單糖甲基化GC/MS片段定性分析方法

廖洪梅

在對多糖樣品進行結(jié)構(gòu)分析時，甲基化方法是一種常用的、非常重要的方法，它可以提供單糖組成和鏈接方式等信息。通常情況下，會利用質(zhì)譜分析手段對甲基化衍生物進行研究，而氣相質(zhì)譜（GC/MS）由于價格相對低廉和完備的數(shù)據(jù)庫較其他形式的質(zhì)譜在這方面得到了更廣泛的應(yīng)用。多糖樣品經(jīng)過甲基化、乙酰化和水解后，在離子源的裂解效應(yīng)下會產(chǎn)生諸多的離子片段（或稱碎片離子），根據(jù)這些離子片段的質(zhì)核比和豐度等信息可以對多糖的連接單元進行定性分析，為分析多糖的一級結(jié)構(gòu)提供重要的信息[1]。

構(gòu)成多糖的單糖殘基較常見的有六碳糖、五碳糖、脫氧六碳糖等。由于不少單糖殘基互為同分異構(gòu)體，在甲基化和乙酰化處理后，衍生物裂解產(chǎn)生的離子片段極為相似；即便是在單糖殘基不為同分異構(gòu)體的情況下也存在裂解片段相互匹配度較高的情況。這些情況對定性工作造成了很大的干擾，因此僅依靠數(shù)據(jù)庫自動檢索的定性信息已經(jīng)不能滿足對多糖中單糖殘基定性分析的需要，應(yīng)依據(jù)理論和經(jīng)驗補充定性方法以提高未知物與目標物比對的準確度。

1 試驗部分

1.1 主要儀器與裝置

氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC/MS），電子轟擊（EI）離子源；電子能量70 eV；質(zhì)量掃描范圍m/z 35～500。配有NIST或WILLY譜庫。

1.2 試驗條件和方法

純化的多糖樣品經(jīng)甲基化完全后，水解并乙酰化；此衍生化樣品即可進行GC/MS分析。具體的試驗條件（如采用的甲基化、乙酰化方法）及氣相色譜條件的設(shè)定等可根據(jù)試驗要求、試驗效果自行選擇、確定，試驗方法的不同對最終定性分析不產(chǎn)生影響[2]，但是要嚴格控制甲基化、乙酰化反應(yīng)不完全產(chǎn)生的副產(chǎn)物對試驗的干擾。……