丹蓮肝康顆粒中藥材的提取工藝研究

劉柄娜

摘 要：目的：對丹蓮肝康顆粒中藥材的提取工藝進行研究。方法：將干膏得率和丹參酮ⅡA提取率作為指標，使用均勻設計法來選擇紫草醇和丹參提取工藝中的乙醇用量、乙醇的體積分數、提取的時間、浸泡時間和提取次數；將丹酚酸B和野黃岑苷的干膏得率和提取率當做指標，使用正交設計試驗的方法來對整個工藝中的提取時間、浸泡時間、加水量等幾個方面進行優化，從而對于最優的提取工藝進行驗證。結果：最佳的提取工藝是紫草和丹參加入9.6倍的乙醇，乙醇的比例是95%，在經過了3個小時的浸泡之后，提取兩次，每一次是20min，在經過了3次的驗證試驗之后，試驗結果顯示丹參酮ⅡA的提取率平均值是44.73%，而干膏得率的平均值是25.55%。將藥渣和其余的一些藥材也提取3次，在第一次的時候要加入12倍的水，在第2次和第3次的時候要加入10倍的水，而且每一次提取的時間是1h，在這三次驗證中，野黃岑苷的平均提取率是71.67%，而丹酚酸B的平均提取率是47.67%，干膏得率的平均值是24.63%。結論：提取工業是可行的，為丹蓮肝康顆粒的制備提供了科學的依據。

關鍵詞：丹蓮肝康顆粒；藥材提取；丹參酮ⅡA；丹酚酸

丹蓮肝康顆粒在經過一系列的臨床試驗得到的藥物，這種藥物主要是由丹參、半枝蓮、鱉甲、赤芍和莪術等成分組成的，有著軟堅散結、活血化瘀和清熱利濕的作用，主要是用來治療腰腿酸軟、頭暈耳鳴、脅下痞塊、五心煩熱等癥狀，在臨床中在主要是用于肝腎陰虛型上的慢性肝炎和肝硬化。為了選擇最佳的藥材提取工藝，使用均勻設計法、正交試驗法來進行工藝的優化。本文就是對丹蓮肝康顆粒的實際應用進行詳細的研究，為相關的研究提供借鑒。

1 材料

1.1 儀器

JJ300型電子天平、XS204電子分析天平、1200高效液相色譜儀和DHG型電熱恒溫鼓風干燥箱。

1.2 藥品、藥材和試劑

半枝蓮、丹參、鱉甲、紫草、莪術、野黃岑苷對照品、丹參酮ⅡA對照品、丹酚酸B對照品。其中丹參酮ⅡA對照品是供含量測定使用的，丹參中含有0.42%的丹參酮ⅡA，野黃岑苷對照品的純度是92.1%，半枝蓮中含有0.24%的野黃岑苷，丹酚酸B對照品的純度為92.1%，丹參中含有3.93%的丹酚酸B，甲醇、乙腈是色譜純，使用的水是雙蒸水，其他的試劑是分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 干膏得率的測定。要精密的吸取丹蓮肝康的濃縮液，濃縮液的含量是20mL，將其放在已經干燥到恒質量的蒸發皿中，在這一狀態下進行水浴蒸干，并且根據干燥失重測定法來進行相應的測定，對于干膏得率進行計算。

2.1.2 丹參酮ⅡA的測定。（1）對照品溶液在配制的過程中，要精密的進行丹參酮ⅡA對照品的稱取，將其放在棕色的量瓶中，之后就可以向立面加入甲醇進行稀釋，將其稀釋成為1ml的溶液中含有40.2μg的丹參酮ⅡA丹參酮ⅡA溶液。（2）供試品溶液在配制的過程中，要精密的吸取丹蓮肝康的濃縮液，吸取1ml，將溶液放置在50ml的量瓶中，之后就可以向里面加入45ml的甲醇，并且進行超聲處理，在超聲處理的過程中，功率是100w，超聲頻率是50kHz，超聲處理的時間是15min，將其放冷加入乙醇到相應的刻度，進行搖勻和過濾處理。（3）色譜柱使用的是：EclipseXDB-C18，檢測的波長是270nm，流速是1ml/min，流動相是甲醇-水，比例是80：20，進樣量是10μl，柱溫是25ml，y代表的是峰面積，x代表的是質量不濃度，從而達到相應的方程如下：y=25.278x+1.76，其中r為0.999，n為5，相關的結果表明了丹參酮ⅡA在質量濃度為6.4-32μg/ml這一范圍內和峰面積是呈現良好的線性關系的。精密度試驗RSD是0.73%的時候，根據這一結果就可以知道精密度是良好的，而供試品溶液在8h內是呈現穩定的狀態的，這時RSD是0.26%，在平均加樣回收率是98.23%的情況下，RSD是1.55%。根據色譜專屬性試驗的結果可以得知，丹參的陰性對照供試品色譜在保留的時間上是無色譜峰，也就是說明了陰性對照是無干擾的。

2.1.3 丹酚酸B的含量測定。（1）對照品溶液在配制的過程中，要精密的稱取對照品適量，向里面加入甲醇，從而制成1ml中就含有282.5μg丹酚酸B的對照品溶液。（2）供試品溶液的配置。供試品溶液在配置的過程中，要精密的量取5mL的丹蓮肝康的濃縮液，將其放在50mL的量瓶中，之后加入甲醇40ml，進行超聲處理30min之后取出，放冷加入甲醇到相應的刻度，搖勻過濾。（3）色譜柱：EclipseXDB-C18，流動相：[甲醇-乙腈（3∶1，V/V）]-1%甲酸水溶液（38∶62，V/V），流速：1ml/min；檢測波長：286nm；柱溫：25℃；進樣量：10μl。以峰面積（y）為縱坐標，質量濃度（x）為橫坐標，得回歸方程：y=12.26x-142.64（r=0.99995，n=5），結果表明，丹酚酸B在22.6～282.50μg/ml質量濃度范圍內與峰面呈良好的線性關系。丹酚酸B精密度試驗RSD為1.61%，表明精密度良好；供試品溶液在8h內基本穩定，RSD為1.86；平均加樣回收率為97.59%，RSD為1.35%。色譜專屬性試驗結果顯示，丹參陰性對照供試品色譜在丹酚酸B對照品相應的保留時間上無色譜峰，表明陰性對照無干擾。

2.2 均勻設計法優選醇提取工藝研究

2.2.1 因素水平。根據丹參和紫草中所含有效成分的理化性質，選取乙醇體積分數（X1，%）、乙醇用量（X2，倍）、浸泡時間（X3，h）、提取時間（X4，min）、提取次數（X5）作為考察因素，以丹參酮ⅡA提取率（丹參酮ⅡA提取率%=提取液中丹參酮ⅡA總量/藥材中丹參酮ⅡA總量×100%）（Y1，權重系數0.7）與干膏得率（Y2，權重系數0.3）為考察指標，采用均勻設計表來安排試驗。

2.2.2 結果分析。采用DPSv6.55版數據處理系統對試驗結果進行逐步回歸，經F檢驗具有顯著意義（P<0.05），表示差異具有統計學意義。從回歸方程可以求得最佳參數為：取處方量的丹參和紫草，加9.6倍量95%的乙醇，浸泡3h，提取2次，每次提取20min。

2.3 正交設計試驗法優選水提工藝研究

選取提取次數（A）、提取時間（B，min）、加水量（C，倍）作為考察因素，進行L9（34）正交試驗，以丹酚酸B提取率[丹酚酸B提取率（%）=提取液中丹酚酸B總量/藥材中丹酚酸B總量×100%]（Y3，權重系數0.4）、野黃芩苷提取率[野黃芩苷提取率%=提取液中野黃芩苷總量/藥材中野黃芩苷總量×100%]（Y4，權重系數0.4）和干膏得率（Y5，權重系數0.2）為考察指標綜合評價，篩選最佳工藝。

結果：方差分析結果表明，提取次數和提取時間均對提取結果有顯著影響（P<0.05），而加水倍量對結果無顯著影響。

3 討論

均勻設計可以將試驗有關因素的各水平數均勻分散在實驗范圍內，尤其適合中藥處方篩選、提取工藝優化等經常涉及多因素、多水平的試驗，以丹酚酸B和野黃芩苷的提取率及干膏得率為考察指標，采用多指標歸一化加權法，綜合評價優選丹蓮肝康顆粒的水提取工藝。綜上所述，本研究中醇提工藝驗證結果與優選結果基本吻合，表明優選的工藝合理、工藝條件穩定可行。

參考文獻

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