羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產(chǎn)物HPLC測定方法建立及降解產(chǎn)物產(chǎn)生原因探討

楊雷

摘 要：建立反相高效液相色譜法測定羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產(chǎn)物去紅霉糖羅紅霉素的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），磷酸鹽緩沖液-乙腈（25：75）和65%乙腈梯度洗脫為流動相，檢測波長為210nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。結(jié)論：本法簡便、準確，可用于羅紅霉素顆粒和干混懸劑中降解產(chǎn)物去紅霉糖羅紅霉素的含量測定。

關(guān)鍵詞：羅紅霉素；含量；測定

羅紅霉素是新一代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要作用于革蘭氏陽性菌、厭氧菌、衣原體和支原體等[1-2]。羅紅霉素體外抗菌作用與紅霉素相類似，體內(nèi)抗菌作用比紅霉素強1-4倍。羅紅霉素適用于化膿性鏈球菌引起的咽炎及扁桃體炎；沙眼衣原體引起的尿道炎和宮頸炎；敏感菌所致的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作等[3-5]。去紅霉糖羅紅霉素為羅紅霉素主要降解產(chǎn)物之一。本文采用高效液相法對羅紅霉素顆粒和干混懸劑中的降解產(chǎn)物去紅霉糖羅紅霉素進行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；HX-06超聲波清洗器（武漢恒信世紀科技有限公司）；UV-6雙光束掃描型紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）；Precisa XB220A電子分析天平（上海精科天美科學(xué)儀器有限公司）；PC 200-G 50恒溫水浴（賽默飛世爾科技（中國）有限公司）；天星進樣瓶清洗機TX-500型（北京天星科儀科技有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：羅紅霉素、去紅霉糖羅紅霉素

1.4 試劑：甲醇（紹興經(jīng)濟開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、磷酸二氫銨（紹興經(jīng)濟開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、冰醋酸（紹興經(jīng)濟開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）、三乙胺（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、乙腈（紹興經(jīng)濟開發(fā)區(qū)忠良化工有限公司）。

1.5 試藥：羅紅霉素顆粒、羅紅霉素干混懸劑

2 測定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。流動相：流動相以磷酸鹽緩沖液-乙腈（25：75）為A，65%乙腈為B，按下表梯度洗脫；檢測波長：210nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按去紅霉糖羅紅霉素峰計算應(yīng)不得低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

取在60℃減壓干燥4 小時的去紅霉糖羅紅霉素對照品適量，精密稱定，加A流動相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，精密稱定，加A流動相30毫升超聲處理10分鐘，放冷，濾過，濾液置50ml量瓶中，用A流動相分次洗滌容器和殘渣，洗液濾人同一量瓶中，加A流動至刻度，搖勻，即得。

2.4 精密度試驗

精密稱取去紅霉糖羅紅霉素對照品適量，加A流動相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.56%，表明本方法精密度良好。

2.5 對照品的線性考察

精密稱取適量去紅霉糖羅紅霉素對照品，加入A流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含5、10、15、20、25、30微克的溶液對照品溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線。結(jié)果表明，羅紅霉素在5～30μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 準確度試驗

取對照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入去紅霉糖羅紅霉素對照品，按項下方法制備成80% 100%、120%。取模擬樣品照“含量測定”項下方法試驗， 計算回收率為95-105%之間，平均回收率為96.5%。

2.7 樣品穩(wěn)定性試驗

取同一批樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、0.5、1.5、2小時，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。結(jié)果表明供試品不穩(wěn)定，需臨用新配。取去紅霉糖羅紅霉素對照品，按2.2項下的對照品制備方法制備對照品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、0.5、1、1.5、2.0小時，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定去紅霉糖羅紅霉素峰面積的RSD=0.76%。結(jié)果表明對照品2小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 專屬性試驗

取合成原料及合成中間體，照2.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結(jié)果在去紅霉糖羅紅霉素出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.9 破壞性試驗

酸分解產(chǎn)物溶液的制備：取羅紅霉素適量，置試管中，加沿管壁緩緩加入1mol/L鹽酸1ml，煮沸10分鐘，冷卻，加流動相A稀釋至10ml，調(diào)節(jié)溶液pH值至中性，轉(zhuǎn)移定容至25毫升容量瓶內(nèi)，用流動相A定容，濾過，取續(xù)濾液，即得。堿分解產(chǎn)物溶液的制備：取羅紅霉素適量，置試管中，加1mol/L NaOH溶液1ml，煮沸10分鐘，冷卻，加流動相A稀釋至10ml，調(diào)節(jié)溶液pH值至中性，轉(zhuǎn)移定容至25毫升容量瓶內(nèi)，用流動相A定容，濾過，取續(xù)濾液，即得。樣品熱分解產(chǎn)物試驗溶液的制備：取羅紅霉素適量，置試管中，105攝氏度加熱1小時，冷卻，加流動相A稀釋至10ml，轉(zhuǎn)移定容至25毫升容量瓶內(nèi)，用加流動相A定容，濾過，取續(xù)濾液，即得。羅紅霉素被酸堿破壞后產(chǎn)生大量去紅霉糖羅紅霉素，加熱破壞后無去紅霉糖羅紅霉素產(chǎn)生。破壞性試驗發(fā)現(xiàn)羅紅霉素不耐酸堿，羅紅霉素顆粒和干混懸劑PH值偏酸性，這可能是羅紅霉素顆粒和干混懸劑降解的原因之一。

參考文獻

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