系統性紅斑狼瘡患者血清IL-17、IL-23、HMGB1表達水平及臨床意義

陶鵬輝

(信陽市中心醫院檢驗科，河南信陽464000)

系統性紅斑狼瘡患者血清IL-17、IL-23、HMGB1表達水平及臨床意義

陶鵬輝

(信陽市中心醫院檢驗科，河南信陽464000)

目的探討系統性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)患者血清中白介素17(Interleukin－17，IL－17)、白介素23(Interleukin－23，IL－23)、高遷移率蛋白1(High mobility group box－1，HMGB1)的表達水平及臨床意義。方法選取我院風濕免疫科收治的67例SLE患者為本研究觀察組，同期選取22例體檢健康志愿者為對照組，采用酶聯免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測所有受試者血清中IL－17、IL－23、HMGB1表達水平，分析三者表達與SLE臨床指標之間的關系。結果觀察組患者血清中IL－17、IL－23以及HMGB1水平均高于對照組，差異均顯著，且具有統計學意義(P＜0．05)，其中SLE活動組中IL－17、IL－23以及HMGB1水平均高于穩定組(P＜0．05)，腎炎組HMGB1水平明顯高于非腎炎組(P＜0．05)，腎炎組IL－17、IL－23水平與非腎炎組比較無顯著差異(P＞0．05)；觀察組IL－17水平與抗ds－DNA抗體水平、抗Sm抗體水平、補體C3、C4、IgM、IgG、CRP均無顯著相關性(P＞0．05)，與SLEDAI呈正相關(r=0．703，P＜0．05)；IL－23水平與抗ds－DNA抗體水平、抗Sm抗體水平均無顯著相關性(P＞0．05)，與SLEDAI、IgM、IgG、CRP呈正相關(r=0．621、0．317、0．432，P＜0．05)，與補體C3、C4呈負性相關(r=－0．456、－0．378，P＜0．05)；HMGB1水平與抗Sm抗體水平、補體C4、CRP均無相關性，與SLEDAI、抗ds－DNA抗體水平、IgM、IgG呈正相關(r=0．000，P＜0．05)，與補體C3呈負性相關(r=0．000，P＜0．05)。結論血清IL－17、IL－23及HMGB1在SLE患者中顯著高表達，且與疾病活動性密切相關，這些指標可能對揭示SLE發病機制或控制病情有一定的作用。

系統性紅斑狼瘡；白介素17；白介素23；高遷移率蛋白1

SLE是一種以機體多器官功能損傷及廣泛的免疫異常為特征的典型自身免疫性疾病[1]。SLE發病機制復雜，目前臨床仍然缺乏特效治療性藥物。糖皮質激素及免疫抑制劑是目前控制SLE病情應用最為廣泛的治療藥物[2]，但長期大量使用往往導致多數病人發生嚴重毒副反應，最終導致病情反復，預后不良。進一步開展SLE基礎及臨床研究，對于闡明SLE發病機制以及開發新型治療性藥物具有重要意義。研究表明[3]，大量細胞因子表達異常在SLE發病中起重要作用。本研究旨在探討IL-17、IL-23及HMGB1在SLE患者血清中的表達情況，以及三者表達與SLE臨床指標之間的關系，試圖為闡明SLE發病機制及尋找新的治療靶點提供一定理論依據。

1 材料與方法

1.1 臨床資料選取2015年4月至2016年4月河南省信陽市中心醫院風濕免疫科收治的67例SLE患者為本研究觀察組，所有患者均符合2012年系統性紅斑狼瘡國際臨床協助組(Systemic lupus international collaborating clinics，SLICC)制定關于SLE最新分類診斷標準[4]，按照SLE活動性指數(Systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)評分，以SLEDAI評分≥10分者為活動組，共32例，其中男性7例，女性25例，年齡20~56歲，平均年齡31.57±8.43歲，SLEDAI評分＜10分者為穩定組，共35例，其中男性10例，女性22例，年齡19~54歲，平均年齡30.78±8.52歲，狼瘡性腎炎者36例，其中男性9例，女性27例，年齡20~55歲，平均年齡31.32±8.27歲，非腎炎者31例，其中男性8例，女性23例，年齡20~56歲，平均年齡32.03±8.56歲。

納入標準：①符合2012年SLICC制定關于SLE最新分類診斷標準；②確診前未使用免疫抑制劑及糖皮質激素類藥物；③排除合并其他急慢性感染病者；④排除伴有心臟、肝臟、腎臟、腫瘤等嚴重疾病者；⑤排除懷孕及哺乳期婦女；⑥了解本研究，患者家屬同意簽署知情同意書者。

同期選取22例體檢健康志愿者為對照組，其中男性4例，女性18例，年齡21~53歲，平均年齡31.06±8.54歲。兩組受試者之間一般資料比較無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 主要試劑與儀器人IL-17、IL-23及HMGB1酶聯免疫吸附實驗(Enzymes linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒購自美國ADL公司，抗ds-DNA抗體ELISA試劑盒購自美國R&D公司，抗Sm抗體試劑盒購于德國歐蒙生物技術有限公司，C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)、C3、C4、IgM、IgG試劑均購于上海科華生物工程股份有限公司，比濁法檢測儀器為德國生產的羅氏MODULAR P800全自動生化分析儀。

1.3 方法采集所有受試者清晨空腹狀態下靜脈血5mL，離心分離血清，-70℃保存待檢。采用ELISA檢測血清IL-17、IL-23及HMGB1含量，具體操作嚴格按照試劑盒使用說明進行，采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法檢測ds-DNA抗體水平，采用間接免疫熒光法半定量檢測抗Sm抗體水平，采用免疫比濁法檢測補體C3、C4以及CRP、IgM、IgG水平。

1.4 統計學分析利用統計學軟件SPSS 19.0進行統計學分析，服從正態分布計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩兩比較采用t檢驗，組間比較采用方差分析，相關性分析采用Pearson法，不服從正態分布資料兩兩比較采用非參數秩和檢驗，采用Spearman法進行相關性分析，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組與對照組之間IL-17、IL-23以及HMGB1水平比較觀察組患者血清中IL-17、IL-23以及HMGB1水平均高于對照組，差異均顯著，且具有統計學意義(P＜0.05)。具體結果見表1。

表1 觀察組與對照組之間IL-17、IL-23以及HMGB1水平比較

2.2 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與病情活動之間的關系SLE活動組及SLE穩定組中IL-17、IL-23、HMGB1水平均高于對照組(P＜0.05)，且SLE活動組中IL-17、IL-23、HMGB1水平均高于SLE穩定組(P＜0.05)。具體結果見表2。

表2 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與病情活動之間的關系

2.3觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與腎臟損害之間的關系腎炎組及非腎炎組中IL-17、IL-23、HMGB1水平均高于對照組(P＜0.05)，且腎炎組HMGB1水平明顯高于非腎炎組(P＜0.05)，腎炎組IL-17、IL-23水平與非腎炎組比較無顯著差異(P＞0.05)。見表3。

表3 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與腎臟損害之間的關系

2.4 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與臨床指標之間的關系相關性分析采用Pearson法，不服從正態分布資料，如抗ds-DNA抗體水平與抗Sm抗體水平，采用Spearman法進行相關性分析。結果可見，觀察組IL-17水平與抗ds-DNA抗體水平、抗Sm抗體水平、補體C3、C4、IgM、IgG、CRP均無顯著相關性(P＞0.05)，與SLEDAI呈正相關(P＜0.05)；IL-23水平與抗ds-DNA抗體水平、抗Sm抗體水平均無顯著相關性(P＞0.05)，與SLEDAI、IgM、IgG、CRP呈正相關(P＜0.05)，與補體C3、C4呈負性相關(P＜0.05)；HMGB1水平與抗Sm抗體水平、補體C4、CRP均無相關性，與SLEDAI、抗ds-DNA抗體水平、IgM、IgG呈正相關(P＜0.05)，與補體C3呈負性相關(P＜0.05)。

表4 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與臨床指標之間的關系

3 討論

目前，SLE發病尚未完全清楚，臨床普遍認為SLE發病主要與機體T淋巴細胞激活，刺激B淋巴細胞產生大量自身抗體以及免疫復合物沉積有關[5]，Th17細胞作為輔助性T淋巴細胞亞群[6]，成為了近年來國內外研究的熱點。Th17主要分泌IL-17A、IL-17F、TNF-α等細胞因子[7]，IL-17A作為IL-17最為主要的效應分子，在機體中具有很強的促進炎癥作用。大量研究表明[8-10]，IL-17在自身免疫性疾病諸如類風濕性關節炎、支氣管哮喘、移植腎排斥反應等中均存在表達異常，提示IL-17與自身免疫性疾病的發生關系密切。IL-23是IL-12家族新成員，對Th17細胞存活及增殖起重要作用，且能夠促進Th細胞釋放IL-17[11]。相關研究表明[12]，CD4+T細胞在向Th17分化的早期，IL-23并不發揮作用，而在Th17細胞發生增殖分化時起重要作用。此外，國外學者發現[13]，鼠模型試驗中，自身免疫性疾病在缺乏IL-17以及IL-17抗體治療的模型中仍然發生，而在缺乏IL-23模型中結果相反，推測IL-23可能通過不依賴于Th17的其他途徑參與自身免疫性疾病的發生及發展。HMGB1在細胞核內是一種進化高度保守的典型非組蛋白，參與DNA重組、DNA復制、基因轉錄調控、細胞分化成熟以及類固醇激素調控等重大生命活動[14，15]。近年來，HMGB1在自身免疫性疾病中的研究成為了熱點，研究表明[16，17]，HMGB1在風濕性關節炎中呈現高表達，在狼瘡性腎炎小鼠模型中同樣發現其異常高表達，提示HMGB1可能與自身免疫性疾病的發生發展存在密切聯系。因此，本研究選擇IL-17、IL-23以及HMGB1三個指標進行研究，探討三者與SLE發生發展之間的關系，試圖為闡明SLE發病機制及尋找新的治療靶點提供一定理論依據。

本研究結果表明，觀察組患者血清中IL-17、IL-23以及HMGB1水平均高于對照組，提示SLE患者中存在IL-17、IL-23以及HMGB1高表達，推測三者參與SLE疾病的發生；SLE活動組中IL-17、IL-23以及HMGB1水平均高于SLE穩定組，三者與SLEDAI呈明顯正相關，提示三者與SLE疾病病情密切相關，且隨疾病活動呈升高趨勢，提示三者可作為SLE疾病活動的參考指標；腎炎組HMGB1水平明顯高于非腎炎組，HMGB1水平與抗Sm抗體水平、補體C4、CRP均無相關性，與SLEDAI、抗ds-DNA抗體水平、IgM、IgG呈正相關，與補體C3呈負性相關，說明HMGB1與SLE并發癥狼瘡性腎炎的發生密切相關，抗ds-DNA抗體作為SLE患者自身特異性抗體，推測HMGB1在SLE發病過程中發揮作用，可能是由于與抗ds-DNA誘導的腎小球免疫復合物發生結合；腎炎組IL-17、IL-23水平與非腎炎組比較無顯著差異，觀察組IL-17水平與抗ds-DNA抗體水平、抗Sm抗體水平、補體C3、C4、IgM、IgG、CRP均無顯著相關性，與SLEDAI呈正相關，IL-23水平與抗ds-DNA抗體水平、抗Sm抗體水平均無顯著相關性，與SLEDAI、IgM、IgG、CRP呈正相關，與補體C3、C4呈負性相關，提示IL-17、IL-23與狼瘡性腎炎的發生無明顯相關性，二者與SLE疾病活動情況密切相關，推測IL-23與SLE疾病活動程度相關的作用機制，可能與其導致IgM、IgG、CRP水平升高，補體C3、C4消耗過大有關。

綜上所述，本研究結果表明，血清IL-17、IL-23及HMGB1在SLE患者中顯著高表達，三者參與SLE疾病發生，且與疾病活動性密切相關，推測三者有望成為SLE治療新靶點，值得進一步深入研究探討。

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The expression and clinical significance of IL-17，IL-23，HMGB1 in systemic lupus erythematosus

TAO Penghui.Department of Laboratory Medicine，Central Hospital of Xin Yang City，Xinyan Henan 464000，China.

Objective To investigate the expression and clinical significance of IL－17，IL－23，HMGB1 in systemic lupus erythematosus．Method A total of 67 cases of SLE patients in our hospital were selected as the observation group，and 22 healthy volunteers were selected as the control group．ELISA was used to detect the expression of IL－17，IL－23and HMGB1 in serum of all subjects，and the relationship between the expression of these three indexes and the clinical parameters of SLE was analyzed．Result In the patients of observation group，the expression levels of serum IL－17，IL－23 and HMGB1 were higher than that in control group(P＜0．05)；IL－17，IL－23 and HMGB1 levels of SLE patients in active state were significantly higher than those in stable state(P＜0．05)．The level of IL－17 in the nephritis group was significantly higher than that in the non－nephritis group(P＜0．05)，and there was no significant difference for IL－17 and IL－23 levels between nephritis group and non nephritis group(P＞0．05)；The level of IL－17 in the observation group had no significant correlation with anti－ds－DNA antibody level，anti－Sm antibody level，complement C3，C4，IgM，IgG and CRP(P＞0．05)，but positive correlation with SLEDAI(P＜0．05)；Between IL－23 and anti－ds－DNA antibody or anti－Sm antibody there was no correlation(P＞0．05)．But IL－23 was positively correlated with SLEDAI，IgM，IgG，CRP(P＜0．05)，and had negative correlation with C3，C4(P＜0．05)；The level of HMGB1 was not correlated with the level of anti－Sm antibody，complement C4 and CRP，and was positively correlated with SLEDAI，anti－ds－DNA antibody levels，IgM and IgG(P＜0．05)，and negatively correlated with complement C3(P＜0．05)．Conclusion Serum levels of IL－17，IL－23 and HMGB1 were significantly higher in SLE patients，and three of them were involved in SLE disease，and were closely related to disease activity．These indexes may play an important role in revealing the pathogenesis of SLE and controlling the disease．

Systemic lupus erythematosus；IL－17；IL－23；HMGB1

R593．24+1，R446．62

A

1674－1129(2017)02－0177－04

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．012

2016-12-16；

2017-03-17)

陶鵬輝，男，1972年生，本科學歷，學士學位，副主任檢驗技師，研究方向是臨床免疫、生化、微生物學檢驗。E-mail：taopenghui88@ 163.com