BC-5310做血液常規(guī)檢測項目測量不確定度評定

王巖，趙立眾，夏曉影

(北京航天總醫(yī)院社區(qū)中心，北京100076)

BC-5310做血液常規(guī)檢測項目測量不確定度評定

王巖，趙立眾，夏曉影

(北京航天總醫(yī)院社區(qū)中心，北京100076)

目的對本實驗室BC-5310全自動血液分析儀測定血液常規(guī)檢測項目的結(jié)果進行不確定度評定。方法通過對BC-5310測定血液常規(guī)檢測項目測量過程中WBC、RBC、HGB、PLT四個檢測項目分析，確定并簡化測量不確定度的來源包括：復(fù)現(xiàn)性、采血方法不同、放置時間、攜帶污染率和方法偏移等。并量化各不確定度分量，確定合成不確定度與擴展不確定度。結(jié)果取k=2時，包含概率P=95.45%，4個項目高、中、低水平靜脈血和末梢血擴展不確定度分別：U（WBC）=(靜脈：±0.89、±0. 44、±0.25；末梢：±1.21、±0.63、±0.37)×109/L，U（RBC）=(靜脈：±0.24、±0.16、±0.09；末梢：±0.60、±0.33、±0.20)×1012/L，U（HGB）=(靜脈：±9. 12、±3.55、±1.89；末梢：±16.37、±9.74、±4.47)g/L，U（PLT）=(靜脈：±55.79、±24.77、±12.80；末梢：±60.33、±34.87、±18.34)×109/L。結(jié)論有助于提高實驗室檢測水平，可使來自不同實驗室的結(jié)果或同一實驗室不同時期的結(jié)果具有可比性。

血液常規(guī)檢測；不同采血方法；測量不確定度

血常規(guī)檢驗是臨床上最為常規(guī)的檢查方法，隨著技術(shù)的進步，檢查和應(yīng)用越來越迅速和廣泛，目前常用儀器是全自動血細胞分析儀。邁瑞公司生產(chǎn)的BC-53系列全自動五分類血細胞分析儀的主要參數(shù)檢測精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性較好，準(zhǔn)確度也較高，能滿足血細胞檢測的一般要求[1]。但是血常規(guī)檢測結(jié)果除了受到上述機器本身參數(shù)影響因素外，還受到多種其他因素影響，為了使實驗室結(jié)果的表達趨于一致，臨床結(jié)果的可信性更清晰的表達，每個完整的和可溯源的測量結(jié)果應(yīng)附有合理評定的測量不確定度。ISO/IEC17025和ISO15189都對實驗室的不確定度評定提出了相應(yīng)要求[2，3]。測量不確定度是指與測量結(jié)果相關(guān)的參數(shù)，表征可合理地賦予被測量值的分散性。測量不確定度表示指南(Guide to the expression of uncertainty in measurement，GUM)中給出的方法即基于不確定度傳播律以實現(xiàn)不確定度分量的合成。由于經(jīng)典GUM法在實際應(yīng)用中遇到許多困難[4]，2012年由中國合格評定國家認可委員會發(fā)布的CNAS技術(shù)報告“醫(yī)學(xué)實驗室—測量不確定度的評定與表達”闡述了常規(guī)實驗室檢測項目測量不確定度的評定和表示方法[5]。因此我們參考相關(guān)文件的要求，結(jié)合本實驗室實際情況，設(shè)計實驗方案對BC-5310全自動血細胞分析儀測量不確定度進行評價，現(xiàn)報告結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 儀器和試劑邁瑞B(yǎng)C-5310全自動血細胞分析儀及儀器廠家原裝配套試劑，質(zhì)控品，校準(zhǔn)品；20μl微量采血吸管由山東奧賽特醫(yī)療器械有限公司制造；蘇州碧迪醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的ED-

TA-K2抗凝管。

1.2 樣本來源本中心健康體檢者、門診患者共計128人的血液。

1.3 檢測方法

1.3.1 復(fù)現(xiàn)性引入的不確定度u(Rw)取本實驗室連續(xù)3個月高、中、低三個水平的室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果計算WBC、RBC、HGB和PLT的復(fù)現(xiàn)性引入的不確定度：u(Rw)=s(Rw)；相對不確定度：urel=s(Rw)×100%/復(fù)現(xiàn)性引入的不確定度的影響因素包含：校準(zhǔn)品、試劑瓶間/批間差異、儀器狀態(tài)變化、操作人員變化、溫濕度變化等。能真實地反映實驗室每日檢測的不確定度情況[6]。

1.3.2 偏移引入不確定uc(bias)取本實驗室連續(xù)3個月高、中、低三個水平同一認定值（靶值）的室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果計算WBC、RBC、HGB和PLT的x、s，并求得x±s為測量結(jié)果。BC-5310全自動血液分析系統(tǒng)測量存在偏移uc(bias)，uc評定包含3部分內(nèi)容：偏移量值b、質(zhì)控品（CRM）標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(Cref)以及多次測量的質(zhì)控品不確定度u(CRM)。以上三部分相對不確定結(jié)果表達為：bref、uref(Cref)及uref(CRM)。利用質(zhì)控品做偏移不確定度評定以測量結(jié)果是否在“認定值（±）不確定度”范圍內(nèi)為評價依據(jù)[7]：

⑴如果所測結(jié)果不在“認定值±不確定度”內(nèi)：

⑵如果所測結(jié)果在“認定值±不確定度”內(nèi)：

1.3.3 末梢血采集（fingertip blood sampling，fb）引入不確定uc(fb)及末梢血采集和放置時間不同（fingertip blood sampling and Place time，ft）共同引入不確定uc(ft)本院健康體檢者、門診患者共計128人，每個人使用EDTA-K2抗凝真空采血試管采集肘前靜脈血2ml。并同時采集同側(cè)食指或無名指內(nèi)側(cè)面末梢血20μl于180μl稀釋液中，輕輕搖勻。立即檢測，紀(jì)錄結(jié)果并計算差值△1i(i=1-128)。所有末梢血標(biāo)本放置30min后進行第二次檢測[8]，紀(jì)錄結(jié)果并計算差值△2i(i=1-128)。所有結(jié)果根據(jù)WBC、RBC、HGB和PLT四個不同檢測項目結(jié)果按照高、中、低三個水平分類，每個水平標(biāo)本數(shù)均大于20個。按照如下公式計算：

1.3.4 攜帶污染率(Carry-over rate)引入的不確定度uc(c)先取1份高值標(biāo)本，連續(xù)測定3次，隨后立即取1份低值標(biāo)本(生理鹽水)連續(xù)測定3次。然后根據(jù)以下公式計算

1.3.5 合成不確定度評定和擴展不確定度計算靜脈血合成不確定度，末梢血立即檢測合成不確定度uc(FB)=末梢血放置30min合成不確定度uc(FT)=成不確定度ucrel(VB)，ucrel(FB)和ucrel(FT)。醫(yī)學(xué)實驗室在報告時，如對輸出量Y的賦值為正態(tài)分布，取包含因子k=2，包含概率P=95.45%[10]。以上四個檢測項目均取k=2，并按下列公式計算擴展不確定度U=k×uc，相對擴展不確定度Urel=k×ucrel。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。WBC、RBC、HGB和PLT檢測結(jié)果取自然對數(shù)后進行統(tǒng)計學(xué)分析，統(tǒng)計結(jié)果小數(shù)點后保留2位有效數(shù)字。

2 結(jié)果

WBC測量不確定度，按照室內(nèi)質(zhì)控水平、醫(yī)學(xué)決定水平和參考區(qū)間，分為高、中、低三個水平。3個水平的靜脈組（VB）、末梢血立即檢測組(FB)、末梢血30min檢測組(FT)的相對合成不確定度根據(jù)上述公式計算，結(jié)果分別為ucrel(VB)=2.33%、2.50%、2.57%；ucrel(FB)=4.26%、4.67%、4.81%；ucrel(FT)=4.43%、4.74%、4.98%。RBC 3個水平結(jié)果分別為ucrel(VB)=1.85%、1.80%、1.90%；ucrel(FB)=3.66%、3.51%、3.96%；ucrel(FT)=3.86%、3.80%、4.14%。HGB 3個水平結(jié)果分別為ucrel(VB)=1.44%、1.34%、2.52%；ucrel(FB)=3.57%、3.45%、3.76%；ucrel(FT)= 3.82%、3.74%、4.01%。PLT 3個水平結(jié)果分別為ucrel(VB)=4.10%、4.03%、4.20%；ucrel(FB)=6.65%、7.02%、7.29%；ucrel(FT)=7.29%、7.10%、7.51%。取包含因子k=2，包含概率P=95.45%，四個檢測項目的擴展不確定度U結(jié)果見摘要，其相對擴展不確定度Urel結(jié)果見表1、2、3、4。

測量不確定度的報告方式：為了便于用戶比較實驗室的能力和水平，在檢測報告上應(yīng)出具測量結(jié)果的不確定度[11]。根據(jù)本研究結(jié)果報告方式可采用以下方式進行：以報告結(jié)果=x±U(k=2)，其中為測量系統(tǒng)給出結(jié)果，U為擴展不確定度。例如：WBC的靜脈血檢測結(jié)果為8.9×109/L，報告結(jié)果=（8.9±0.44）×109/L。

表1 WBC測量相對擴展不確定度評定結(jié)果

表2 RBC測量相對擴展不確定度評定結(jié)果

表3 HGB測量相對擴展不確定度評定結(jié)果

表4 PLT測量相對擴展不確定度評定結(jié)果

3 討論

ISO 15189條款5.6.2[12]要求“適用且可能時，實驗室應(yīng)確定檢驗結(jié)果的不確定度。應(yīng)考慮所有重要的不確定度分量。不確定度來源可包括采樣、樣品制備、樣品部分的選擇、校準(zhǔn)品、參考物質(zhì)、輸入量、所用設(shè)備、環(huán)境條件、樣品狀態(tài)和操作人員的變更等”。影響血液常規(guī)檢測因素有多種，如：每日實驗室檢測環(huán)境溫、濕度的變化、不同檢測人、儀器穩(wěn)定性、不同批號試劑及同一標(biāo)本重復(fù)性檢測差異等引入隨機誤差（主要體現(xiàn)復(fù)現(xiàn)性引入不確定度）；方法偏移引入系統(tǒng)誤差（主要體現(xiàn)方法偏移引入不確定度）；采集方法及放置時間不同引入的誤差。這些誤差都將影響檢測結(jié)果。

目前大多實驗室采取“從上到下”的方法進行評定[13，14]：模型使用統(tǒng)計原理直接估計測量系統(tǒng)的總不確定度，一般通過評估特定設(shè)計的實驗數(shù)據(jù)、質(zhì)控數(shù)據(jù)或者方法確認數(shù)據(jù)。即以室內(nèi)質(zhì)量控制評定實驗室測量復(fù)現(xiàn)性，以有證參考物質(zhì)評定方法偏倚，此種評定測量不確定度方法簡單且有效可行[15]。血液常規(guī)檢測采集方法主要有靜脈血和手指末梢血采集。靜脈血不確定度評估主要涉及到兩個因素：復(fù)現(xiàn)性和方法偏移引入的不確定度。可以采用“從上到下”的方法進行評定。末梢血采集有操作簡單快速、用血量少、檢查血細胞計數(shù)結(jié)果與靜脈血同在一個醫(yī)學(xué)決定水平之內(nèi)[16]等優(yōu)點，被廣泛用于臨床門診操作。末梢血除了受到上述兩個因素影響外，還受到多種其他因素影響，如：氣溫變化、液流通不暢，常常擠壓局部造成組織液滲入、采血管質(zhì)量和人工操作誤差、不能及時檢測等。本實驗室門診血液常規(guī)檢測大多采集手指末梢血，筆者認為只做靜脈血不確定度評估，不能反映本實驗室血液常規(guī)檢測真實情況，因此要單獨對末梢血的不確定度進行評估。

另外本實驗室血液常規(guī)檢測標(biāo)本從采集到檢測一般不會超過30min。靜脈血結(jié)果在放置30min之內(nèi)檢測，結(jié)果穩(wěn)定性無顯著差異。在采集末梢血進行檢測時，如采集后立即進行檢測，會出現(xiàn)白細胞暫時性升高、血小板暫時性降低的假性結(jié)果，從而造成檢測結(jié)果偏低的現(xiàn)象發(fā)生。因此在做末梢血不確定評估時，應(yīng)該把放置時間這一因素考慮在內(nèi)。筆者在設(shè)計末梢血不確定評估的實驗方案時，一組為立即檢測組，另一組為放置30min檢測組，并比較這兩組末梢血的不確定度的差異。

從上述結(jié)果可以看出，WBC、RBC、HGB和PLT四個檢測項目高、中、低3個水平的靜脈血合成uc(VB)、擴展U(VB)、相對合成ucrel(VB)、相對擴展Urel(VB)不確定度均在質(zhì)量目標(biāo)范圍內(nèi)；末梢血高、中、低3個水平不確定度的立即檢測組uc(FB)、U (FB)、ucrel(FB)、Urel(FB)和30min檢測組uc(FT)、U (FT)、ucrel(FT)、Urel(FT)結(jié)果中WBC和PLT均在質(zhì)量目標(biāo)范圍內(nèi)，RBC和HGB均不在質(zhì)量目標(biāo)范圍內(nèi)；末梢血不確定度評估立即檢測組結(jié)果比放置30min檢測結(jié)果低，但總體差異不大。因此建議，在使用全自動血細胞計數(shù)儀做血常規(guī)檢測時，特別是對RBC和HGB結(jié)果判斷，選用靜脈血為佳。本實驗方案做血液常規(guī)檢測不確定度評定從整個檢測過程進行分析，將主要影響因素量化，比較直觀顯現(xiàn)出各個分量在總體檢驗結(jié)果中所占比例，有助于改進實驗過程或選取合理的檢測方法，有利于臨床更好的考慮不同檢測結(jié)果差值的意義，為提高實驗室檢測水平和治療疾病做出正確的判斷提供保證。

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Evaluation of the uncertainty of blood cell count and hemoglobin determination by BC-5310

WANG Yan，ZHAO Lizhong，XIAXiaoying.Community Health Center of Beijing Aerospace General Hospital，Beijing 100076，China.

Objective To estimate the uncertainty of measurement in detecting of blood cell count and hemoglobin determination by full automatic blood machine(BC-5310)，and discuss the application value.Methods The process of the detection of RBC，WBC，HGB and PLT by BC-5310 was analyzed to confirm and simplify the sources of uncertainties of measurement，which included Reproducibility，Different blood sampling methods，Place time，Carry-over rate and Bias uncertainty.Combined uncertainty and expanded uncertainty were obtained by statistical methods．Results When k=2，Probability=95.45%，4 items in high，medium，low three levels form venous blood(VB)and fingertip blood(FB)sampling were：U（WBC）=(VB：±0.89、±0.44、±0.25；FB：±1.21、±0.63、±0.37)×109/L，U（RBC）=(VB：±0.24、±0.16、±0.09；FB：±0.60、±0.33、±0.20)×1012/L，U（HGB）=(VB：±9.12、±3.55、±1.89；FB：±16.37、±9. 74、±4.47)g/L，U（PLT）=(VB：±55.79、±24.77、±12.80；FB：±60.33、±34.87、±18.34)×109/L.Conclusion It provides guide significance for observing the cure effect of blood cell count and hemoglobin determination and choosing the concentration of quality control.

Blood cell count and hemoglobin determination；Different blood sampling methods；Uncertainties of measurement

R446.11+1

A

1674-1129(2017)02-0186-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.02.015

2016-11-10；

2017-03-07)

王巖，女，1985年生，檢驗師，本科，醫(yī)學(xué)學(xué)士學(xué)位，主要從事血液檢測研究。E-mail:15201631615@139.com。