腦膠質瘤患者外周血DC細胞的檢測及其臨床意義

王偉豐，張智峰

(1、濟源市人民醫院神經外科，河南濟源459000；2、鄭州大學一附院神經外科，河南鄭州450000)

腦膠質瘤患者外周血DC細胞的檢測及其臨床意義

王偉豐1，張智峰2

(1、濟源市人民醫院神經外科，河南濟源459000；2、鄭州大學一附院神經外科，河南鄭州450000)

目的檢測腦膠質瘤患者外周血樹突狀細胞（DC）的改變，探討其相關的臨床意義。方法收集2015年1月至2016年4月我院神經外科收治的腦膠質瘤患者44例，另取同期我院健康體檢者40例作為正常對照。DC細胞表達使用流式細胞儀檢測。結果DC1細胞和DC2細胞在對照組分別為1．82±0．43%和1．89±0．42%，顯著高于膠質瘤組的1．44±0．24%和1．52±0．26%（P＜0．05）。DC1細胞和DC2細胞亞型在膠質瘤Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級不同分級之間存在顯著的差異（P＜0．05）。DC1細胞和DC2細胞術后1d和3d均顯著低于術前（P＜0．05）。DC1細胞和DC2細胞術后3d又顯著低于術后1d（P＜0．05），術后7d恢復到術前水平（P＞0．05）。結論膠質瘤患者中存在DC細胞的低表達，不同分級之間DC細胞表達存在顯著差異，手術治療可以顯著減低DC細胞表達，為膠質瘤患者圍手術期免疫治療的時期選擇提供了一定的理論依據。

腦膠質瘤；樹突狀細胞；神經外科

腦膠質瘤（brain glioma）是中樞神經系統腫瘤中最為常見腫瘤，起源于神經膠質細胞，呈浸潤性生長與周圍正常腦組織分界不清，導致了腫瘤細胞外科手術無法徹底切除，需要手術后輔以放療和化療等綜合治療[1]，但由于血腦屏障對化療藥物的阻擋作用，以及膠質瘤細胞對放療不敏感性，因此手術、放療、化療常規治療方法對膠質瘤病人的治療效果并不顯著[2]。以樹突狀細胞(dendritic cell，DC)為基礎的免疫治療作為一種特殊的治療方式，越來越引起人們的重視[3]。DC細胞是目前已知的體內最強的抗原遞呈細胞(Antigen presenting cells，APC)，將腫瘤抗原遞呈給T細胞，并參與T細胞活化，殺滅腫瘤細胞[4]，已有的研究顯示以DC疫苗為基礎的主動免疫治療在膠質瘤中可以取得顯著的療效[5]。本研究檢測了腦膠質瘤患者外周血DC細胞的改變，探討了其相關的臨床意義。

1 材料與方法

1．1臨床病例資料收集2015年1月至2016年4月我院神經外科收治的腦膠質瘤患者44例，所有病例均經病理證實，組織學類型為星形膠質細胞瘤，其中男22例，女22例，年齡40～71歲，平均年齡58．7±11．3歲，WHO分級Ⅰ級10例，Ⅱ級11例，Ⅲ級12例，Ⅳ級11例。所有病例術前未經化療、放療或其他治療。另取同期我院健康體檢者40例作為正常對照，其中男20例，女20例，年齡40～72歲，平均58．2±11．6歲。兩組樣本在性別、年齡臨床資料方面無顯著性差異（P＞0．05），具有可比性。

1．2主要試劑和儀器單個核細胞分離試劑盒購自天津灝洋生物制品科技有限責任公司，PECDl1c、FITC－CD123、APC－HLA－DR流式抗體購自美國BD公司，FACBCalibu流式細胞分析儀為美國BD公司產品。

1．3 DC細胞的流式細胞儀檢測取受試者術前、術后1d、3d、7d外周靜脈血5ml，單個核細胞的分離使用密度梯度離心分離法，按照試劑盒說明5ml靜脈血加入等體積的分離液，1500g×20min，血漿層和分離液交界處即為單個核細胞層，吸出單個核細胞層。調整細胞濃度為106個細胞/ml，標本分成2份，按照抗體說明書一份標本加入PE－CDl1c、APC－HLA－DR，另一份加入FITC－CD123、APCHLA－DR室溫避光孵育30min。同型對照調零，流式細胞儀檢測PE－CDl1c、APC－HLA－DR雙陽性的DC1細胞和FITC－CD123、APC－HLA－DR雙陽性的DC2細胞。

1．4統計學方法采用SPSS 13．0軟件進行分析，兩組樣本均數比較采用t檢驗，多組間均數比較采用方差分析，P＜0．05為統計學有顯著性差異。

2 結果

2．1 DC細胞亞群在腦膠質瘤中的表達DC細胞分為DC1細胞和DC2細胞兩個亞型，從表1可見DC1細胞和DC2細胞在對照組分別為1．82±0．43%和1．89±0．42%，顯著高于膠質瘤組的1．44±0．24%和1．52±0．26%（P＜0．05）。

表1 兩組DC1細胞和DC2細胞表達的比較

2．2 DC細胞亞群在腦膠質瘤不同分級中的表達從表2可見DC1細胞和DC2細胞亞型在膠質瘤Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級不同分級之間存在顯著的差異（P＜0．05）。

2．3 DC細胞亞群在術后的動態變化從表3可見DC1細胞和DC2細胞術后1d和3d均顯著低于術前（P＜0．05）。DC1細胞和DC2細胞術后3d又顯著低于術后1d（P＜0．05），術后7d恢復到術前水平（P＞0．05）。

表2 四組DC1細胞和DC2細胞表達的比較

表3 DC1細胞和DC2細胞術后表達的動態變化

3 討論

腦膠質瘤的發生發展是一個極為復雜的過程，發病機制目前仍不清楚，其中涉及到病毒感染、遺傳、環境、免疫等多種因素，近年來免疫系統的紊亂逐漸引起了學者們的關注，并成為了研究的熱點[6，7]。樹突狀細胞(DC)的研究是近幾年腫瘤免疫治療領域中的熱點之一，由于膠質瘤的特殊性以DC細胞為基礎的免疫治療有可能成為繼手術、放療、化療后的膠質瘤第四種臨床治療方法[8，9]。DC細胞分為DC1細胞和DC2細胞兩個亞型，不同的亞型具有不同的生物學功能，例如DCl誘導Th1分化，DC2誘導Th2分化[10]，本研究檢測了DC細胞的兩個亞型，結果顯示膠質瘤患者外周血DC1和DC2細胞比例顯著低于健康對照人群，說明了膠質瘤患者DC細胞的低表達與膠質瘤的發生可能密切相關。進一步的分析顯示DC1細胞和DC2細胞亞型在膠質瘤Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級不同分級之間也存在顯著的差異，WHO分級中指出Ⅱ級及以上的膠質瘤為惡性膠質瘤[11，12]，結果顯示Ⅱ級及以上的膠質瘤DC1細胞和DC2細胞顯著低于Ⅰ級，說明了膠質瘤患者DC細胞的低表達與患者的預后也有著密切的聯系。

大量的實驗室證據顯示DC細胞可激活患者體內自身的免疫系統，增強機體的抗癌能力，阻止腫瘤的生長、轉移、復發等[13－15]，本研究的結果觀察到手術后患者DC1細胞和DC2細胞比例會顯著減低，第3d達到低值，到第7d時可以恢復到術前水平，術后DC1細胞和DC2細胞的減低可能是因為手術創傷以及麻醉應激等刺激兒茶酚胺、糖皮質激素等內源性激素釋放入血，抑制了免疫功能，這一發現可以為膠質瘤患者免疫治療提供一定的理論依據，例如術后盡量早期使用DC細胞免疫治療。

綜上所述，本研究顯示膠質瘤患者中存在DC細胞的低表達，不同分級之間DC細胞表達存在顯著差異，手術治療可以顯著減低DC細胞表達，為膠質瘤患者圍手術期免疫治療的時期選擇提供了一定的理論依據。

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The expresssion of DC cells in patients with brain glioma and its clinical significance

WANG Weifeng1，ZHANG Zhifeng2.1. Department of Neurosurgery，Jiyuan people's Hospital，Jiyuan Henan，459000，China；2.Department of Neurosurgery，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou，450000，China.

Objective To detect the expresssion of DC cells in patients with brain glioma and explore its clinical significance．Methods A total of 44 patients with brain glioma were enrolled in our hospital．Another 40 cases of healthy person were used as normal control．The DC cells were detected by cytometry analysis．Results The proportion of the DC1 and DC2 cells in control group was 1．82±0．43%and 1．89±0．42%，which was higher than that of 1．44±0．24%and 1．52±0．26%in glioma group(P＜0．05)．There was significant difference of DC1 and DC2 cells among gradeⅠ，Ⅱ，Ⅲ，andⅣ(P＜0．05)，After operation for 1d and 3d，DC1 and DC2 cells were significantly lower than that before operation(P＜0．05)，Which was significantly lower 3d than 1d after operation (P＜0．05)．DC1 cells and DC2 cells recovered to the preoperative level after operation 7d(P＞0．05)．Conclusion The expression of DC cells was lower patients with glioma，which bore significant difference among different grades．Operation therapy can significantly reduce the expression of DC cells，which provides a theoretical basis for selection of appropriate period in immunotherapy of glioma patients．

Brain glioma；Dendritic cells(DC)；Neurosurgery

R446．8，R739．41

A

1674－1129(2017)02－0196－03

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．018

2016-12-12；

2017-03-09)

王偉豐，男，1980年生，本科學士，主治醫師，神經外科專業，研究方向：腦膠質瘤的綜合治療。

張智峰，男，1972年生，博士畢業，神經外科專業，主任醫師，碩士研究生導師，研究方向：腦膠質瘤的綜合治療、顱底腫瘤的基礎與臨床治療。