葛根通絡顆粒對偏頭痛大鼠模型的作用及機制研究*

關(guān)珊珊，曹利民， 張 鵬

陜西省榆林市中醫(yī)醫(yī)院 (榆林 719000)

·實驗研究·

葛根通絡顆粒對偏頭痛大鼠模型的作用及機制研究*

關(guān)珊珊，曹利民， 張 鵬△

陜西省榆林市中醫(yī)醫(yī)院 (榆林 719000)

目的：觀察葛根通絡顆粒(GG)對硝酸甘油致大鼠偏頭痛模型的作用，探討其緩解偏頭痛的機理。方法：采用皮下注射硝酸甘油的方法建立偏頭痛大鼠模型，觀察3h內(nèi)大鼠前肢撓頭次數(shù)，測定血清一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性，腦組織5-羥色胺(5-HT)、去甲腎上腺素(NA)水平，并檢查血液流變學指標。結(jié)果：葛根通絡顆粒3.0、6.0g·kg-1減少模型大鼠的前肢撓頭次數(shù)，降低偏頭痛大鼠血清中NO的含量，增加腦組織內(nèi)5-HT含量，6.0g·kg-1降低全血粘度。結(jié)論：葛根通絡顆粒有一定防治偏頭痛的功效，其機制可能與調(diào)節(jié)體內(nèi)5-HT、NO水平以及改善機體的血液流變學有關(guān)。

葛根通絡顆粒是在中醫(yī)藥理論指導下，根據(jù)多年的臨床實踐，采用現(xiàn)代先進的制備工藝加工而成的,具有祛風化痰、活血化瘀、通絡止痛之功效。臨床主要用于治療頭風血瘀夾痰證所引起的偏頭痛，但目前有關(guān)該藥的基礎(chǔ)實驗研究甚少。本文對葛根通絡顆粒對硝酸甘油偏頭痛大鼠模型的作用及機制進行研究，為其臨床應用提供依據(jù)。

材料與方法

1 藥 品 葛根通絡顆粒顆粒由榆林市中醫(yī)醫(yī)院提供，用時以0.5%的CMCNa混懸液將藥物配制成所需濃度。

2 試 劑 羧甲基纖維素鈉(批號：20140715，天津市永大化學試劑有限公司)；硝酸甘油注射液(廣州白云山明興制藥有限公司，國藥準字H44020569)；西比靈(鹽酸氟桂利嗪膠囊，5 mg/粒，國藥準字H10930003，西安楊森制藥有限公司)；戊巴比妥鈉，規(guī)格：25g/瓶，批號：140418，由德國默克生物科技公司生產(chǎn)。一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)測定試劑盒均購于南京建成生物工程研究所；大鼠ELISA 試劑盒:5-羥色胺(5-HT)，去甲腎上腺素(NA),均為R&D 公司分裝，大連泛邦化工技術(shù)開發(fā)有限公司提供。

3 動 物 SD大鼠，SPF級，雌雄兼用，體重180～220 g，動物質(zhì)量合格證號：11400500010598，購自中國食品藥品檢定研究院，生產(chǎn)許可證號：SCXK-(京)2014-0013。

4 儀 器 電子天平，CAV2101，奧豪斯儀器(上海)有限公司，BL-420 分析天平(瑞士梅特勒托利多公司) ，BSA124S電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司)；超純水系統(tǒng)HFSuper PW(上?？道追治鰞x器有限公司)；冷凍離心機(型號：L-535R，湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司)，S10 型手提式高速分散器(寧波新芝公司生產(chǎn))，SA5600 自動血流變儀( 北京)。

5 實驗方法[ 1-3]

5.1 模型建立、分組與給藥:動物適應飼養(yǎng)5 d，選用檢疫合格的60只SD大鼠，雌雄各半，體重180～220 g，按體重、性別隨機均衡分為6組，分別為空白組、模型組、葛根通絡顆粒低、中、高劑量組(1.5、3.0、6.0g·kg-1，按體表面積折算，分別等效于臨床劑量的1、2、4倍)，西比靈陽性對照藥組(5 mg/kg)，每組10只，灌胃給藥，每天給藥1次，連續(xù)7 d，模型組給予0.5%CMCNa混懸液，給藥體積為20 ml/ kg，于末次給藥后30 min，除空白組注射生理鹽水外，其余5組大鼠頸部皮下注射硝酸甘油10 mg /kg，造模1次。

5.2 指標觀察與檢測:造模后30 min左右，動物出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁撓頭、爬籠次數(shù)增多、自主活動增多等現(xiàn)象，此現(xiàn)象持續(xù)約2.5～3 h，繼而出現(xiàn)蜷臥，活動減少， 表明偏頭痛動物復制成功，記錄3h內(nèi)大鼠前肢撓頭次數(shù)。觀察結(jié)束后，大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔注射麻醉后經(jīng)腹主動脈取血，第1管肝素抗凝血用于測定動物全血粘度，第2管置于促凝管放置0.5 h，2500 rpm離心，取血清，用于測定NO含量及NOS活性，置-20℃冰箱備用。

取血后將大鼠斷頭后于冰臺迅速分離腦組織(去除小腦)，生理鹽水沖洗，濾紙拭干，在液氮中快速冷凍后移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩⒛X組織加入適量生理鹽水快速研磨(質(zhì)量體積比為1 g∶9 ml)，3000r/min，離心10 min后吸取上清，用Elisa試劑盒測定腦組織5-HT、NA的含量。

結(jié) 果

1 對硝酸甘油偏頭痛模型行為癥狀的影響 記錄造模后3 h 內(nèi)每組大鼠的前肢撓頭次數(shù)，結(jié)果顯示：與模型組相比，葛根通絡顆粒中、高劑量組及西比靈組都能明顯減少模型大鼠的前肢撓頭次數(shù)(P<0.05)，見表1。

2 對大鼠血清NO及NOS含量的影響 與空白組比較，模型組大鼠血清中的NO含量及NOS活性明顯升高(P<0.01)；與模型組比較，葛根通絡顆粒中、高劑量組及西比靈均能明顯降低模型大鼠血清中NO的含量及NOS的活性(P<0.05或0.01)，見表2。

3 對大鼠腦內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)的影響 與空白組比較，模型組大鼠腦組織中5-HT、NE的含量均明顯降低(P<0.05或0.01)；與模型組比較，葛根通絡顆粒中、高劑量組及西比靈組大鼠腦組織中5-HT的含量明顯增加(P<0.05或0.01)，低劑量組動物腦內(nèi) 5-HT 含量增加，但與模型組比較無顯著性差異(P>0.05)；各治療組NE含量與模型組比較無顯著性差異(P>0.05)，見表3。

4 對大鼠血液流變學的影響 與空白組比較，模型組大鼠低切、中切、高切全血黏度值均明顯增加(P<0.05)。與模型組比較，葛根通絡顆粒高劑量組及西比靈組大鼠全血黏度低切、中切、高切值明顯降低(P<0.05)，葛根通絡顆粒中、低劑量組對全血粘度未見明顯影響，見表4。

表1 葛根通絡顆粒(GG)對偏頭痛模型大鼠撓頭次數(shù)影響±s)

注：與空白組比較，ΔP<0.01；與模型組比較，*P<0.05

表2 葛根通絡顆粒(GG)對偏頭痛模型大鼠血清

注：與空白組比較，ΔP<0.01；與模型組比較，*P<0.05，◇P<0.01

表3 葛根通絡顆粒(GG)對偏頭痛大鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)的影響±s)

注：與空白組比較，ΔP<0.05，◇P<0.01；與模型組比較*P<0.05，▲P<0.01

表4 葛根通絡顆粒(GG)對偏頭痛模型大鼠血液流變學的影響±s)

注：與空白組比較，◇P<0.01；與模型組比較，*P<0.05

討 論

葛根通絡顆粒以“角藥”葛根、川芎、羌活為主藥，葛根可解表通絡，現(xiàn)代藥理研究葛根具有鎮(zhèn)靜和擴張腦血管作用，改善腦供血，對治療血管神經(jīng)性頭痛有顯著療效；川芎，善疏通升散，具有活血行氣，祛風止痛之功效，現(xiàn)代藥理研究川芎能改善微循環(huán)、抗氧化、抑制自由基等。羌活辛苦性溫，有祛風止痛之功效，善治頭痛。三藥相輔相成，有機配合，起到通絡止痛的作用。

顱內(nèi)外血管舒縮異常和痛閾改變是偏頭痛發(fā)病機制之一，而引起這些變化的主要物質(zhì)是5-羥色胺、NE、NO、組胺等[1-2]。硝酸甘油是廣泛應用偏頭痛藥物研究的模型之一，發(fā)病機制與癥狀與人類相似，并且造模省時、容易復制。硝酸甘油皮下注射在體內(nèi)生成一氧化氮(NO)，NO通過強烈的擴張腦血管效應和神經(jīng)毒性作用誘發(fā)實驗性偏頭痛，內(nèi)源性NO的合成是在NOS的參與下合成的， 因此研究NOS 的含量顯得尤為重要。本實驗研究結(jié)果表明，模型組大鼠給予硝酸甘油造模后出現(xiàn)倦臥、雙耳發(fā)紅，撓頭，尤其是前肢撓頭等，與文獻報道一致[2-4]，說明造模成功。與模型組比較，葛根通絡顆粒能明顯減少大鼠前肢撓頭次數(shù)，證明可以緩解硝酸甘油致大鼠偏頭痛的臨床癥狀。模型組大鼠血清中NOS 、NO 含量均明顯增加，腦組織5-HT、NA的含量極度減少，全血黏度值明顯增加。而葛根通絡顆粒可以通過降低大鼠血清中NO、NOS的含量，減緩NO舒張腦血管的作用；增加腦組織內(nèi)的5-HT含量，促進5-HT對血管收縮和痛覺調(diào)節(jié)作用，緩解偏頭痛的發(fā)作；此外，葛根通絡顆粒降低全血粘度，改善偏頭痛血液流變學特點，可能與復方中的川芎及葛根有關(guān)[5-6]。然而葛根通絡顆粒對腦組織中的 NA 含量影響不大，有待進一步研究。

該研究是首次通過大鼠實驗對該復方緩解頭痛的作用進行研究，結(jié)果提示葛根通絡顆?？擅黠@緩解硝酸甘油致大鼠偏頭痛的臨床癥狀，對NO/NOS 通路、腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)(5-HT)、血液流變學3個方面均有影響，具有良好的開發(fā)前景，但因葛根通絡顆粒是中藥復方制劑，下一步研究要從中醫(yī)角度對其緩解偏頭痛的藥理作用及作用機制進行研究和探討。

[1] 郭倩瑤,郭建生,劉頂鼎,等.芎麻湯不同提取物對硝酸甘油偏頭痛模型大鼠血漿NO、CGRP、5-HT、ET含量的影響[J]. 西安交通大學學報醫(yī)學版, 2013,34(3):393-396.

[2] 譚 亮. 偏頭痛發(fā)病機制的研究進展[J]. 中國臨床神經(jīng)外科雜志, 2012, 17(9):571-573.

[3] 劉頂鼎,郭建生,郭倩瑤,等. 芎麻湯藥效部位干預硝酸甘油型偏頭痛大鼠行為學癥狀、外周血及腦組織中5-HT的研究[J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2015, 30(5):1708-1711.

[4] 董曉夢,荊 龍,陳金波,等. 偏頭痛模型大鼠相關(guān)活性物質(zhì)表達[J]. 中國神經(jīng)免疫學和神經(jīng)病學雜志, 2015, 22(1):34-39.

[5] 金玉青, 洪遠林, 李建蕊,等. 川芎的化學成分及藥理作用研究進展[J]. 中藥與臨床, 2013, 4(3):44-48.

[6] 張素慧,寧 煉,石勁敏,等. 葛根總黃酮經(jīng)鼻給藥對硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠的保護作用[J]. 中國新藥與臨床雜志, 2013，32(5):394-398.

(收稿：2016-11-30)

Effects of the Gegen Tongluo granules on the migraine model of rats and the mechanism

Guan Shanshan，Cao Limin，Zhang Peng.

TCM Hospital of Yulin City in Shaanxi Province (Yulin 719000)

Objective: To observe the effect of Gegen Tongluo sranules (GG) on the model of migraine induced by nitroglycerin in rats, and to explore the mechanism of relieving migraine. Methods: The rats model was established by subcutaneous injection of nitroglycerin. The symptoms of scratching head with forepaws were observed for three hours, nitric oxide (NO) content and nitric oxide synthase (NOS) activity in serum, 5- serotonin (5-HT) and norepinephrine (NA) levels in brain, and the hemorheology were determined. Results: The number of scratching head with forepaws, the level of NO in serum were reduced significantly, serotonin levels in the rat brain were improved obviously at GG 3 and 6.0 g·kg-1, and also， the blood viscosity was decreased at GG 6.0g kg-1. Conclusion: Gegen Tongluo granules have a certain effects on migraine, and its mechanism may be related to regulate 5-HT and NO levels and improve the hemorheology.

Migraine/traditional Chinese medicine therapy @Gegen Tongluo granules Nitric oxide Hemorheology

*陜西省中醫(yī)藥管理局課題(15-LC077)

偏頭痛/中醫(yī)藥療法 @葛根通絡顆粒 一氧化氮 血液流變學

R289.5

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.05.058

△通訊作者