食品中胭脂蟲紅的高效液相色譜測定法

李曉瑩

摘要：目的 建立高效液相色譜法測定食品中胭脂蟲紅的方法。方法 采用提取的溶液為：鹽酸和甲醇，檢測儀器為：高效液相色譜和二極管陣列，提取和檢測時保留時間定性，定量采用外標法。結果 在100 mg/L時線性關系良好，當線性相關系數>0.999，方法檢出限為0.0004g/kg，方法定量限為0.001g/kg，加標回收率是92.3%～105.6%，0.7%～6.5%是相對標準偏差數值。結論 采用本文方法的特點是簡單實用，該方法適合各類食品中胭脂蟲紅的檢測。

關鍵詞：食品；胭脂蟲紅；高效液；相色；譜測定法

胭脂蟲紅，英文名是：carmine cochineal，中南美洲、墨西哥等地的蒽醌類天然紅色素是胭脂蟲紅的原產地，胭脂紅酸，英文名：camlinicacid，胭脂紅酸屬于活性成分，胭脂紅酸應用于食品、化妝產品品、藥類產品、紡織產品，應用廣泛，胭脂蟲紅是安全和天然的色素。之一而用于眼部化妝品中。提取胭脂蟲紅色素的原料是寄生在仙人掌類植物上的雌性胭脂蟲。在各類食品中的使用量方面，我國已做出了具體規定，但是還沒有建立胭脂蟲紅國家檢驗，還沒有建立胭脂蟲紅行業檢驗標準，對于胭脂蟲紅的質量標準與檢驗方法也沒有做出具體規定。所以，對于對食品中胭脂蟲紅的含量檢測中，應當建立穩定可靠的方法，為其在食品中的含量檢測提供科學的指導。根據我國的具體狀況，我們所采用的檢測方法的特點是實用簡單，這種方法就是胭脂蟲紅的高效液相色譜測定法。

1資料與方法

1.1儀管與試劑 島津高效液相色譜儀，規格為LC-20AD，二極管陣列檢測器、恒溫水浴鍋、均質機、粉碎機、電子天平、離心機、0.22 μm尼龍膜作為輔助儀器；胭脂蟲紅標準物質，純度≥98%，用胭脂紅酸來計算，德國Dr.EhrenstorferGmb H為其采購地；甲醇，就是色譜純，乙腈，指色譜純；鹽酸溶液2 mol/L：準確量取鹽酸，容量為20鹽酸，注入水中，水量為100 ml，將其混勻；甲酸溶液：準確吸取甲酸，容量為9 ml甲酸，將其倒置容量瓶中，體積為1000 ml，用水定容，之后將其混勻[1]。

1.2方法

1.2.1色譜條件 ①迪馬 Diamonsil C18；②反相色譜柱，值為：250 mm×4.6 mm，5 μm；流動相：乙腈∶甲酸溶液；脫洗流速為0.8 ml/min；柱溫為35℃；進樣量為10 μl；495 nm為檢測波長。

1.2.2樣品前處理

1.2.2.1配制酒和飲料 準確稱取約2 g試樣于具塞比色管中，其容量為50 ml，加入鹽酸溶液，容量為10 ml，以甲醇定容，混勻至數值為25 ml，封緊蓋子應用封口膜，80 ℃水浴30 min。水浴后，把試樣溫度冷切與室溫相同，并靜置，時間為30 min，吸取上清液，過0.22 μm尼龍膜上機測定。

1.2.2.2冰激凌 把試樣放置在室內，等其融化成液體，將試樣攪勻，按方法制備，方法為1.2.2.1。將其水浴，后將其冷卻和室溫相同，其次以12000 r/min，5 min為離心值，放入冰箱，溫度為 4 ℃；取出靜置，待和室溫相同后，吸取上清液過0.22 μm尼龍膜上機測定。

1.2.2.3糖果 將糖果試樣粉碎，粉碎儀器為粉碎機，按方法制備，方法為1.2.2.1。水浴后，待冷切和室溫相同后，以12000 r/min，5 min為離心值，吸取上清液過 0.22 μm尼龍膜上機測定。

1.2.2.4熟肉和膨化食品 將糖果試樣粉碎，按方法制備，方法為1.2.2.1。將其水浴，后將其冷卻和室溫相同，其次以12 000 r/min，5 min為離心值，放入冰箱，溫度為 4 ℃；取出靜置，待和室溫相同后，吸取上清液過0.22 μm尼龍膜上機測定[2]。

1.2.3標準溶液配制 準確稱取標準物質，重量為10.0 mg，溶解采用甲醇溶，容切值至50 ml時，此溶液濃度為200 mg/L，在溫度為4℃中它可儲存2個月的時間。

1.2.4標準曲線的制備 依次準確吸取標準溶液，吸至具塞比色管中，具塞比色管體積為于50 ml，加入鹽酸溶液同該試樣處理，處理方法是1.2.2.1，鹽酸溶液容量為10 ml，之后上機測定。縱坐標是胭脂蟲紅峰面積，橫坐標是胭脂蟲紅濃度，單位為mg/L。

1.2.5結果 試樣中胭脂蟲紅含量的計算公式為：試樣中胭脂蟲紅含量為X-，（g/kg）為胭脂紅酸計，為試樣溶液中胭脂蟲紅濃度，一定容體積為V，單位為ml，取樣量為m，單位為g。

1.2.6回收率和精密度試驗 選取GB 2760-2014 中所列胭脂蟲紅限量值，添加4個濃度：低、中、高和與檢出限靠近，在6 種試樣中進行加標回收，應用精密度試驗于6組試樣中。對樣品進行分組，每種樣分為4個組次，7份樣品在每組中稱取。第一組量為0.001/kg，第二組是0.25/kg，第三組是0.50/kg，第四組是1.0 g/kg，加入胭脂蟲紅標準溶液到這4組樣品中，0.001 g/kg數值為靠近檢出限濃度，處理和測定方法與此前一樣。

1.2.7方法檢出限 使用標準曲線最低點峰高，計算方法檢出限根據3倍噪聲計算方法業計算，定量限根據 10 倍噪聲計算方法計算，核對用空白樣品加標[3]。

2結果

2.1線性范圍和回歸方程、檢出限和定量限 范圍是4.0～100 mg/L時胭脂蟲紅線性關系良好，線性相關系全部>0.999，方法檢出限是0.0004g/kg，方法定量限的數值為0.001 g/kg。

2.2回收率和精密度 樣品回收率范圍數值是 92.3%～105.6%，相對標準偏差范圍數值為0.7%～6.5%。

3討論

3.1代表性樣品的選擇 允許使用胭脂蟲紅的具有代表性的試樣，在進行測驗過程中按照限量值來測驗。

3.2方法適用范圍 本文測定方法適合飲料、糖果、膨化食品等各類食品。

3.3前處理方法的確定 胭脂蟲紅在不同pH值下，胭脂蟲紅所呈現的顏色也不相同同，指在高效液相色譜儀檢測器上的最大吸收峰不同，因此采用向樣品提取液中，向其加入一定量的鹽酸，把酸堿性質相異的試樣整體調至呈酸性，使試樣提取液穩定為最大吸收峰，峰值為495 nm，最終建立的測定方法具有穩定性和準確性。

3.4干擾 研究結果證明苯甲酸和對羥基苯甲酸乙酯以及對羥基苯甲酸丙酯在類似條件下不存在干擾，此外在類似條件不存在干擾還有對羥基苯甲酸丁酯、糖精鈉、安賽蜜等 18 中常見食品添加劑；證明姜黃素、辣椒紅素等天然色素與胭脂蟲紅混用不存在干擾。

參考文獻：

[1]顧正健，黃雅佩，沈陽，等. 高效液相色譜法同時測定冷飲中禁限用色素胭脂蟲紅酸、喹啉黃和堿性藍26[J].化學試劑，2014，04：325-328，342.

[2]付忠源.高效液相色譜法測定豬肉脯中胭脂蟲紅的含量[J]. 理化檢驗（化學分冊），2014，03：368-370.

[3]趙艦，甘源，肖義夫，等.反相高效液相色譜法測定食品中的蘇丹紅1號[A].重慶市預防醫學會.重慶市預防醫學會2006年學術交流會論文集[C].重慶市預防醫學會，2006：5.

[4]虞成華， 陸志蕓， 朱偉，等.反相高效液相色譜法測定食品中胭脂蟲紅色素[J].理化檢驗：化學分冊，2012，48（8）：991-992.

[5]郭蒙京，李堃，趙丹瑩.食品中胭脂蟲紅的高效液相色譜測定法[J].職業與健康，2016，32（18）：2508-2510.

編輯/高章利