恩施硒茶中兒茶素含量測定

黃思勇

（恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖北 恩施 445000）

恩施硒茶中兒茶素含量測定

黃思勇

（恩施職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖北 恩施 445000）

以不同企業(yè)生產(chǎn)的恩施硒茶為供試材料，采用高效液相色譜法檢測分析3種主要兒茶素成分含量。結(jié)果表明：恩施硒茶中兒茶素含量為94.9～147.8 mg/g，平均含量為122.5 mg/g，兒茶素品質(zhì)指數(shù)為539～1 234，平均值為856。不同企業(yè)生產(chǎn)的恩施硒茶中兒茶素的含量差別較大，兒茶素品質(zhì)指數(shù)也高低不一，且兒茶素品質(zhì)指數(shù)與兒茶素總含量不呈比例關(guān)系，需要根據(jù)恩施硒茶的開發(fā)目的選育實(shí)用的茶樹品種。

恩施硒茶；兒茶素；品質(zhì)指數(shù)

兒茶素屬于黃烷醇類化合物，是茶葉中的主要化學(xué)成分之一，因具有抗氧化、防癌抗癌、抑菌、降低膽固醇、抗突變、抗輻射等多種生物活性而受到廣泛關(guān)注[1-4]。在茶葉中，各種兒茶素單體的含量與綠茶品質(zhì)均有相關(guān)性，這種相關(guān)性可以用兒茶素品質(zhì)指數(shù)來衡量，阮宇成等[5]指出指數(shù)愈大綠茶品質(zhì)愈好。

恩施州現(xiàn)有茶園面積近10萬hm2，是湖北省最大的產(chǎn)茶區(qū)，“恩施硒茶”已經(jīng)成為恩施州的地域公共品牌，其品牌價(jià)值估算達(dá)6億元[6]，但對恩施硒茶資源開發(fā)利用不夠，存在茶制品單一，保健茶、飲料茶等產(chǎn)品開發(fā)尚未起步的窘境[7]。筆者通過測定恩施硒茶中兒茶素的含量，分析了市面銷售恩施硒茶的兒茶素品質(zhì)指數(shù)，為恩施硒茶的品種選定提供參考，為合理開發(fā)恩施硒茶資源提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材與試劑

恩施硒茶為硒露茶葉有限責(zé)任公司、恩施親硒源硒茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司、凱迪克富硒茶葉有限公司、湖北施州實(shí)業(yè)有限公司、恩施市春歸商貿(mào)有限公司、恩施維春農(nóng)業(yè)開發(fā)有限責(zé)任公司、湖北綠可生態(tài)茶葉有限公司、恩施親硒源硒茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司（恩施硒茶8號、9號、10號由該公司提供）等公司生產(chǎn)，均為市售品。表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表沒食子兒茶素（EGC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）對照品純度均不低于98.5%，由上海融禾醫(yī)藥科技有限公司提供。甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純，水為純凈水。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀：DIONEX（U3000）；色譜工作站：Chromeleon；檢測器：VWD 3100；色譜柱：Acclaim 120 C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；紫外可見分光光度計(jì)：UV2600（上海天美科學(xué)儀器有限公司）；分析天平：AL204（METTLER TOLEDO）；超聲波清洗儀：KQ-2500（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.3 色譜條件

以Acclaim 120 C18為色譜柱；以乙腈為流動相A，以冰醋酸為流動相B，水為流動相C，按照表1中確定的梯度進(jìn)行洗脫；柱溫為30℃；檢測波長為278 nm；進(jìn)樣量為10 μL[8]。

表1 流動相梯度洗脫表

1.4 供試品溶液的制備

精密稱取恩施硒茶試樣粗粉約0.2 g于10 mL離心管中，加入70℃預(yù)熱過的70%甲醇溶液5 mL，立即放入70℃水浴中浸提10 min（隔5 min攪拌1次），浸提后冷卻至室溫，離心10 min（3 500 r/min），將上清液轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中。殘?jiān)貜?fù)提取1次。合并兩次提取液定容至10 mL，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液2.0 mL至10 mL量瓶中，70%甲醇定容，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液[9]。

1.5 對照品溶液的制備

分別精密稱取EGCG、ECG、EGC對照品適量，用甲醇溶解制成EGC濃度為2.9 mg/mL、EGCG濃度為4.3 mg/mL、ECG濃度為3.9 mg/mL的溶液，0.45 μm微孔濾膜濾過，續(xù)濾液即為對照品溶液。

1.6 數(shù)據(jù)分析

按公式（1）計(jì)算兒茶素品質(zhì)指數(shù)。

兒茶素品質(zhì)指數(shù)=100×（EGCG +ECG）/EGC （1）

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

參照《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的測定方法》（GB/T 8313—2008）的方法，對流動相的組成進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)合兒茶素類化合物的性質(zhì)選取了乙腈、冰醋酸、水作為流動相體系，采用梯度洗脫，可以使EGCG、ECG、EGC和相鄰的化合物完全分離，且滿足高效液相色譜法系統(tǒng)適用性的要求。色譜圖見圖1。

2.2 線性回歸方程與相關(guān)系數(shù)

分別精密吸取各對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL至10 mL棕色量瓶中，用甲醇稀釋定容，配成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按確定的色譜條件測定各對照品峰面積。以進(jìn)樣濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算EGCG、ECG、EGC的線性回歸方程及線性相關(guān)系數(shù)見表2。

2.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取2.2中兒茶素各2.0 mL系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液（EGCG濃度0.86 mg/mL、EGC濃度0.58 mg/mL、ECG濃度0.78 mg/mL）重復(fù)進(jìn)樣6次，按照確定的色譜條件測定EGCG、ECG、EGC的峰面積，計(jì)算其RSD分別為1.35%、1.26%、1.48%，表明該方法具有良好的精密度。

圖1 供試品的HPLC圖譜

表2 EGCG、ECG、EGC的線性回歸方程及線性相關(guān)系數(shù)

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取低溫（4℃）下放置不同時(shí)間（0、2、4、8、12 h）的供試品溶液分別注入液相色譜儀，測定EGCG、ECG、EGC的峰面積，考察兒茶素各組分的含量變化，計(jì)算其RSD分別為1.54%、1.43%、1.65%，表明供試品溶液至少在放置12 h內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一恩施硒茶6份，按照供試品溶液的制備方法制備，按確定的色譜條件測定EGCG、ECG、EGC的峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算。測得恩施硒茶中各兒茶素的平均含量：EGCG為105.5 mg/g、EGC為10.3 mg/g、ECG為7.2 mg/g，其RSD分別為1.14%、1.26%、1.62%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的恩施硒茶粉末約0.1 g，分別置于50 mL量瓶中，分別加入EGCG、ECG、EGC對照品溶液0.50 mL，按照供試品溶液相同的方法制備，并按照確定的色譜條件測定EGCG、ECG、EGC的峰面積，計(jì)算EGCG、ECG、EGC的加樣回收率分別為100.30%、98.85%、101.08%，其RSD分別為1.08%、0.96%、1.55%，表明該方法準(zhǔn)確度較好，滿足測定要求。

2.7 兒茶素含量測定

取恩施硒茶，照上述方法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算恩施硒茶的兒茶素含量，并計(jì)算兒茶素品質(zhì)指數(shù)。從表3可以看出，恩施硒茶中兒茶素含量為94.9～147.8 mg/g，平均含量為122.5 mg/g，兒茶素品質(zhì)指數(shù)為539～1 234，平均值為856。在各兒茶素中以EGCG含量最高，ECG含量最低，且兒茶素總含量與EGCG含量呈正相關(guān)，但兒茶素品質(zhì)指數(shù)與EGCG含量高低沒有相關(guān)性，與兒茶素總含量也不呈比例關(guān)系，故在用兒茶素品質(zhì)指數(shù)來衡量綠茶品質(zhì)時(shí)應(yīng)注意兒茶素的總含量。

表3 恩施硒茶樣品兒茶素含量測定

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)中曾采用甲醇-水-冰醋酸的溶劑系統(tǒng)作為流動相，也曾嘗試采用乙腈-水-冰醋酸的溶劑系統(tǒng)等度洗脫，結(jié)果表明：用甲醇-冰醋酸-水的溶劑系統(tǒng)得到的色譜峰的對稱性很差，存在拖尾峰，而采用乙腈-水-冰醋酸等度洗脫各成分的分離度難以達(dá)到要求，且分析時(shí)間偏長，分離效率不高，故采用乙腈-水-冰醋酸溶劑系統(tǒng)梯度洗脫效果較為理想。

試驗(yàn)對不同企業(yè)生產(chǎn)的恩施硒茶中EGCG、EGC、ECG的含量進(jìn)行了測定，并計(jì)算了兒茶素品質(zhì)指數(shù)。從測定結(jié)果來看，不同企業(yè)生產(chǎn)的恩施硒茶中EGCG、EGC、ECG的含量差別較大，兒茶素總含量也有差別，兒茶素品質(zhì)指數(shù)也高低不一，這可能與不同企業(yè)所產(chǎn)恩施硒茶的茶樹品種、生長環(huán)境、采摘時(shí)機(jī)、加工方法等有關(guān)系[10]，還需要對其進(jìn)一步的研究和完善。

兒茶素品質(zhì)指數(shù)主要是采用酯型兒茶素（EGCG、ECG）的含量之和除以非酯型兒茶素（EGC）的含量，這為選育茶樹品種可以提供很大的幫助，但從恩施硒茶的兒茶素品質(zhì)指數(shù)結(jié)果來看，兒茶素品質(zhì)指數(shù)高的不一定兒茶素總含量就高，故在用兒茶素品質(zhì)指數(shù)來衡量綠茶品質(zhì)時(shí)還應(yīng)注意兒茶素的總含量，這在利用用恩施硒茶作為原料加工保健茶、飲料茶等產(chǎn)品時(shí)顯得尤為重要。

[1] 伍紅良，凌月福，黃嵐珍，等. EGCG對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞增殖、凋亡及survivin、VEGF表達(dá)的影響[J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（7）：1138-1141.

[2] 李浩榕，王亞楠，范春雷. 表沒食子兒茶素沒食子酸酯抑制LDL的氧化修飾和小鼠巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào)，2011，27（4）：584-585.

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[5] 阮宇成，程啟坤. 茶兒茶素的組成與綠茶品質(zhì)的關(guān)系[J]. 園藝學(xué)報(bào)，1964，3（3）：287-300.

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[7] 黃思勇. 茶葉下腳料中表沒食子兒茶素沒食子酸酯分離純化工藝研究[D]. 武漢：湖北中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[8] 黃思勇，干國平. 茶葉下腳料中表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量測定研究[J]. 中國藥師，2012，15（2）：676-677.

[9] GB/T 8313—2008，茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的測定方法[S].

[10] 林俐莎，葛 建，楊晶晶，等. 高效液相色譜法測定茶葉中兒茶素含量[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，30（12）：1639-1641.

（責(zé)任編輯：夏亞男）

DeterminationofCatechininEnshiSeleniumTea

HUANG Si-yong
（Enshi Technical College, Enshi 445000, PRC）

The content of 3 main catechins in Enshi Selenium Tea from different enterprises were determined by high performance liquid chromatography (HPLC).The results showed that the content of catechin in Enshi Selenium Tea was 94.9～147.8 mg/g, the mean content was 122.5 mg/g, the catechin quality index was 539～1234, with an average value 856. Catechins in Enshi Selenium Tea had significant difference from different enterprises, and catechin quality index was also different. There was no proportionate relationship between catechin quality index and total catechin content. It is necessary to select the practical tea varieties according to the purpose. It is need to select practical tea tree varieties according to the development purpose of Enshi tea.

Enshi Selenium Tea; catechins; quality index

TS272

A

1006-060X（2017）05-0091-03

10.16498/j.cnki.hnnykx.2017.005.026

2017-02-18

黃思勇（1982-），男，土家族，湖北建始縣人，講師，主要從事藥品與食品質(zhì)量控制研究。