影響神經元特異性烯醇化酶測定因素的分析及驗證

盧志芳++楊先凱

【摘要】目的 本文旨在探討影響神經元特異性烯醇化酶（NSE） 測定結果的因素。方法 根據受試者樣本放置時間，溶血程度，黃疸程度的不同，采用化學發光免疫法測定各組NSE水平，通過統計學方法進行數據分析。結果 正常人和3例小細胞肺癌患者血液標本分別放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h，NSE檢測結果差異有統計學意義（P<0.05）；溶血對NSE的測定影響很大，且溶血的標本中每增加1 g血紅蛋白（Hb）就可測定出32.45 ng/mL的的NSE；不同濃度的黃疸樣本檢測結果與對照組結果差異無統計學意義（P>0.05）。

結論 NSE的測定受外界因素影響，會出現假陽性，并影響到臨床診療。在實際工作中，應避免溶血，且及時送檢并分離血清從而提高結果的準確性。

【關鍵詞】神經元特異性烯醇化酶（NSE）；化學發光免疫檢測；標本；影響因素；

【中圖分類號】R446.6 【文獻標識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2016.34..02

作為烯醇化酶的同工酶，神經元特異性烯醇化酶（NSE）被公認是監測小細胞肺癌的首選標志物。另一方面NSE同神經損傷所致的許多神經性疾病關系密切[1-2]。由于紅細胞和血小板中同時存在著NSE，血細胞的異常代謝活動， 會導致血清中NSE的成分發生變化。因此在測定中，應避免外界因素干擾血清中NSE的原有水平，從而影響實驗結果[3]。本研究旨在探討影響NSE檢測的影響因素，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

標本：健康體檢者30例，男性20例，女性10例，年齡20～40歲，均無抽煙史，無基礎病；小細胞肺癌患者3例，為2016年4～10月確診的我院男性住院患者，年齡45～60歲。自制溶血標本：取無溶血的正常人混合血清標本，人工使其溶血后高速離心，取上清備用。自制黃疸標本：取無溶血的正常人混合血清標本，人工加入特定含量膽紅素備用。

1.2 試劑與儀器

NSE試劑盒為化學發光免疫法，深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司提供；化學發光免疫測定儀器，深圳新產業生物醫學工程股份有限公司提供的MAGLUMI 2000。Mek7222k血液分析儀，日本光電公司生產。

1.3 方法

（1）早晨分別采集健康體檢者和肺癌患者空腹靜脈血10 mL，同一標本按放置時間不同分裝四份。按深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司試劑盒說明書進行操作（試劑盒為化學發光免疫法）。健康體檢人群與3例小細胞肺癌患者血清標本收集后，分別在放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h后進行離心，檢測。每次、每份標本重復測定5次，計算其均值、標準差及進行差異顯著性檢驗。

（2）將自制的溶血標本，再次離心，取上清液用光電Mek-7222k血細胞分析儀重復測定數次，調整血紅蛋白含量使其均值為4.0 mg/mL，將其倍比稀釋成1.0，0.25，0.063的4個梯度。每個濃度梯度重復進行5次測定，算出其NSE均值（ng/mL）。再分別計算出每克Hb的NSE

含量（ng/mL），最后以NSE和Hb總量，計算出總平均每克Hb的NSE含量（ng/mL）。

（3）自制黃疸標本，取無溶血的正常人混合血清標本，分成6組，分別加入不同濃度的膽紅素制備成梯度濃度的黃疸血清樣本，40～60 μmol/L組、60～100 μmol/L 組、100～200 μmol/L組、200～300 μmol/L組、300～400μmol/L組、>400 μmol/L組各20份，進行NSE檢測。

2 結 果

（1）正常人血清標本放置0.5 h，1 h，3 h，5 h后， 檢測NSE含量。NSE水平最高為放置5 h的樣本，隨著放置時間的減少NSE明顯降低，其中與0.5 hNSE結果相比，3 h和

5 h差異具有統計學意義（P<0.05）。

（2）小細胞肺癌患者NSE放置0.5 h，1 h，3 h，5 h測定結果及差異顯著性。

（3）自制溶血標本NSE測定結果。

（4）不同濃度黃疸樣本的NSE檢測水平對比 ，結果差異均無統計學意義（P>0.05）。

3 討 論

血清NSE是糖酵解通路中的一種肝糖分解酶，是烯醇化酶的一種同工酶，分子量為78 KD。正常存在于神經元、周圍神經組織和神經內分泌組織如APUD細胞系統中[4-7]，在細胞被破壞時釋放出來，可作為APUD腫瘤的特異性腫瘤標志物[7]。NSE在神經元和神經內分泌腫瘤組織中呈異常高表達。小細胞肺癌也是能夠分泌NSE的APUD腫瘤之一。目前NSE被認為是小細胞肺癌、神經母細胞瘤最特異、最敏感的腫瘤標志物。同時研究證實NSE不但存在于APUD細胞系中，還存在于APUD瘤細胞系中，對NSE進行測定既可以輔助診斷小細胞肺癌、神經母細胞瘤，還可為其療效觀察和預后評價提供依據，同時還可對嗜鉻細胞瘤、胰島細胞瘤、黑色素瘤、甲狀腺髓樣癌等提供診斷信息。

正常紅細胞中也存在較多量的NSE，溶血標本會對結果的正常判斷造成干擾[8-9]；由于紅細胞破裂會釋放出較多的NSE，因此溶血可引起結果偏高；同樣血小板中也可釋放NSE，因此，未充分離心的樣本NSE的結果也會偏高等[10]。但是紅細胞內含有NSE的量以及溶血會對血清NSE測定結果造成多大的影響，已經達成共識[11-12]。研究顯示，每溶解紅細胞釋放1 g血紅蛋白的量，就可以平均測定出32.45 ng/mL的NSE，屬假陽性結果。可見NSE實驗結果受溶血的影響很大；同時正常人和小細胞肺癌患者血清標本放置一定時間后再測定，均會導致NSE結果產生差異。而黃疸對NSE的檢測結果不產生影響。

綜上所述，標本溶血和標本放置過長時間對測定結果有顯著影響，實踐中NSE檢測一定要避免標本溶血，靜脈采血盡量一次成功，避免在同一部位反復穿刺，在采取標本后應盡量快速送檢并分離血清且應立即進行測定。假如不能即刻測定，也應該立即分離血清，置入冰箱冷凍保存備查。目的就是盡可能避免因標本溶血和標本久置使紅細胞中NSE釋放進入血清，影響測定結果。

參考文獻

[1] DeGiorgio CM.Neuron-specific enolase，marker of acuteneuronal injury，is increased in complex partial status epi-lepticus[J].Epilepsia，1996，37（7）：606-609.

[2] Rabinowicz AL，Correale JD，Bracht KA，et al.Neuron-specific enolase in increased after nonconvulsive status epileticus[J].Epilepsia，1995，36：457.

[3] 仇彩霞，江崇才，王盛楠，等.影響神經元特異性烯醇化酶檢測的新因素.青島醫藥衛生，2013，45（1）：19-21.

[4] 張小紅，王 靜，王紅民.血清NSE TSGF CA125 CYFRA-21-1 聯合檢測對肺癌的診斷價值[J].腫瘤基礎與臨床，2006，（1）：16-18.

[5] Andos S，Suzuki M，Yamamoto N，et al.The prognosticvalue of both neuron-specific enolase （NSE）and Cyfra21-1 in small cell cancer[J].Anticancer Res.2004.24（3b）：1941-1946.

[6] Karnak D，Beder S，Kayacan O，et al.Neuron-specificenolase and lung cancer [J].Am J Clin Oncol，2005，28（6）：586-590.

[7] Tapia FJ，Polak JM，Barbosa AJ，et al.Neuron-specificenolase is produced by neuroeudocrine tumours [J].Lancet，1981，1（8224）：

808-811.

[8] 隋靖喆，李 山，秦 雪，等.標本不同處理因素對神經元特異性烯醇化酶測定的影響[J].國際檢驗醫學雜志，2014，35（14）：1950-1951.

[9] 辛麗君，顧建英，高云朝，等.標本因素對血清神經元特異性烯醇化酶檢測的影響[J].檢驗醫學，2007，22（3）：303-307.

[10] 宋現讓，劉美琴，朱傳金，等.神經元特異性烯醇化酶檢測的標本因素探討[J].醫學檢驗與臨床，2006，17（4）：69-70.

[11] 張家華，黃 平，主編.現代臨床實驗診斷手冊[M].第1版.北京：人民軍醫出版社，1994：322 -325.

[12] 周 新，涂植光.臨床生物化學和生物化學檢驗[M].北京：人民衛生出版社，2004.

本文編輯：李 豆