氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量

文/尚東洋 高 楊

（黑龍江省龍丹乳業(yè)科技股份有限公司）

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量

文/尚東洋 高 楊

（黑龍江省龍丹乳業(yè)科技股份有限公司）

嬰幼兒配方乳粉試樣經(jīng)石油醚、乙醚提取脂肪后，再用正己烷溶解，經(jīng)毛細(xì)管色譜柱分離，質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量測(cè)定1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的含量。結(jié)果顯示：回收率在86.0%～94.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.89%～3.20%，表明分析結(jié)果可靠。

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法；1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯；嬰幼兒配方乳粉

母乳喂養(yǎng)可以為嬰兒健康生長(zhǎng)發(fā)育提供最理想食品，無(wú)論在營(yíng)養(yǎng)學(xué)、免疫學(xué)還是心理學(xué)等方面，母乳喂養(yǎng)對(duì)于嬰兒的益處是嬰幼兒配方乳粉喂養(yǎng)無(wú)可比擬的。任何嬰幼兒配方乳粉都不能與母乳相媲美，只能作為母乳喂養(yǎng)失敗后的無(wú)奈選擇，或母乳不足時(shí)對(duì)母乳的補(bǔ)充。因此，所有的嬰幼兒配方乳粉所追求的終極目標(biāo)就是使產(chǎn)品無(wú)限接近母乳。

作為母乳替代品的嬰幼兒配方乳粉，其脂肪結(jié)構(gòu)應(yīng)盡量接近母乳。1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯作為一種新資源食品，是由脂肪酶催化酯交換反應(yīng)，使脂肪酸在甘油分子上的位置重新排列而得，其與母乳脂肪結(jié)構(gòu)相似。許多研究證明，嬰幼兒配方乳粉中添加1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯可使其在微觀上更接近母乳脂肪成分，能夠提高脂肪酸的吸收利用率，促進(jìn)嬰兒對(duì)脂肪、礦物質(zhì)的吸收，促進(jìn)嬰兒骨骼礦物質(zhì)的沉積，預(yù)防便秘。

2008年5月26日，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布公告（2008年第13號(hào)），批準(zhǔn)了1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯作為營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑在嬰兒配方食品、較大嬰兒和幼兒配方食品中使用，并于2010年1月4日中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布的第1號(hào)公告中明確了1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的使用范圍及使用量。1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯作為母乳脂肪的替代品之一，正在被廣泛地添加在嬰幼兒配方乳粉中。因此準(zhǔn)確測(cè)定嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的含量具有重要意義。目前國(guó)家尚未出臺(tái)標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法，文獻(xiàn)上的檢測(cè)方法主要有：薄層色譜分離與氣相色譜法、反相高效液相色譜法、氣相色譜法、蒸發(fā)光散射高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、銀離子交換柱分離與液相色譜法、胰脂肪酶與液相色譜法等。本文論述了采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量的方法，該方法精密度高，重現(xiàn)性好，適用于嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量的測(cè)定。

1 材料和方法

1.1 試劑和材料

乙醇：分析純，體積分?jǐn)?shù)為9 5%；氨水：分析純，25%～28%；正己烷：色譜純；石油醚：分析純；乙醚：分析純。

1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液，濃度為10 mg/ mL：精確稱取0.5000 g 1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL容量瓶中，用正己烷溶解定容。

1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)中間液，濃度為1 mg/ mL：取標(biāo)準(zhǔn)貯備液1 mL，用正己烷定容至10 mL。

分析用水應(yīng)符合GB/T 6682-2008《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》中規(guī)定的三級(jí)水。

1.2 儀器和設(shè)備

毛氏抽脂瓶；毛氏離心機(jī)；毛氏水浴鍋；毛氏振蕩器；分析天平：奧豪斯，CAV214C；渦旋振蕩器：其林貝爾，XW-80A；超聲波清洗機(jī)：昆山，KQ-700DE；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海滬西，RE52-3；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：日本島津，GCMS-QP2010E。

1.3 試驗(yàn)方法

試樣處理：稱取混合均勻的嬰幼兒配方乳粉固體試樣約1.5 g（精確到0.1 mg）于毛氏抽脂瓶中，加入10 mL 45 ℃的水，將試樣洗入毛氏抽脂瓶的小球中，充分混合，直到試樣完全散開(kāi)，之后冷卻。

脂肪的提取：①第一次提取：向毛氏抽脂瓶中加入3.0 mL氨水，混勻。置于60 ℃水浴中15～20 min，冷卻至室溫。加入10 mL乙醇和1 滴剛果紅溶液，混勻。再加入25 mL乙醚，塞上軟木塞，放到毛氏抽脂瓶搖混器上震蕩1 min。再加入25 mL石油醚，震蕩1 min，4 000 r/min離心分層。傾出上清液于脂肪收集瓶中。②第二次提取：在剩余試樣液中再加入5 mL乙醇，25 mL乙醚，25 mL石油醚，按上述操作步驟進(jìn)行第二次提取。離心分層后傾出上清液與第一次的上清液合并。將脂肪收集瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，在60 ℃通入氮?dú)鈼l件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，保留殘?jiān)礊橹荆?0 mL正己烷溶解備用。

1.4 色譜條件

毛細(xì)管色譜柱：HP-5MS，30 m×0.25 mm×0.25 μm，彈性石英毛細(xì)管柱；

載氣：高純氦氣，流量1 mL/ min；

分流比：1∶50；

進(jìn)樣量：1 μL；

溶劑延遲：3 min；

進(jìn)樣口溫度：365 ℃；

接口溫度320 ℃，柱溫300 ℃，保持3 min，以2 ℃/min速率升至350 ℃，保持12 min；

質(zhì)譜條件：離子源為EI源，電子能量70 eV，離子源溫度250℃，四極桿溫度200 ℃，掃描范圍30～800 amu，電子倍增器電壓1.5 kV。

2 結(jié)果與分析

2.1 測(cè)定方法

將標(biāo)準(zhǔn)中間液進(jìn)行系列稀釋，制成標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，濃度分別為0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mg/mL。將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液與試液分別注入色譜儀，按上述的儀器條件進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的總離子流圖，采用外標(biāo)法定量。以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算未知樣品的濃度，進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。線性方程為：Y=650752X+528.7，相關(guān)系數(shù)為0.9994（圖1）。

表1 平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

表2 準(zhǔn)確度（n=2）

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 樣品加標(biāo)回收率與精密度

在待測(cè)樣品中添加3 個(gè)不同水平的1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)工作液，每個(gè)水平做6 個(gè)平行樣，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。按照1.3的樣品處理方法進(jìn)行處理。結(jié)果見(jiàn)表1。其回收率在86.0%～94.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.89%～3.20%，表明分析結(jié)果可靠。

2.3 準(zhǔn)確度

重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確度為1.73%。如表2。

2.3 試驗(yàn)過(guò)程注意事項(xiàng)

2.3.1 實(shí)驗(yàn)試劑乙醚、石油醚等用于空白試驗(yàn)，以檢驗(yàn)試劑的純度。

2.3.2 保證氣質(zhì)聯(lián)用儀的氣密性，避免漏氣造成抽真空不正常。最常見(jiàn)的漏氣部位可能是進(jìn)樣墊，需要判斷固定進(jìn)樣墊的螺母、玻璃襯管的O型圈及進(jìn)樣口螺母、毛細(xì)柱兩端的螺母、真空腔體門是否擰緊。

2.3.3 氣質(zhì)聯(lián)用儀每次重新開(kāi)機(jī)時(shí)，色譜柱均需要更換，進(jìn)樣墊更換后均需要重新做調(diào)諧。

2.3.4 每次試驗(yàn)結(jié)束后，需將氣質(zhì)聯(lián)用儀的進(jìn)樣針取下，用適宜的溶劑進(jìn)行清洗。

3 結(jié)論

本測(cè)定方法樣品前處理簡(jiǎn)單，干擾因素少，適用于嬰幼兒配方乳粉及同類產(chǎn)品中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量的測(cè)定。

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尚東洋（1985-），女，助理工程師，從事乳品質(zhì)量管理工作。

2017-03-23）