氣相色譜-質譜聯(lián)用法測定嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量

文/尚東洋 高 楊

（黑龍江省龍丹乳業(yè)科技股份有限公司）

氣相色譜-質譜聯(lián)用法測定嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量

文/尚東洋 高 楊

（黑龍江省龍丹乳業(yè)科技股份有限公司）

嬰幼兒配方乳粉試樣經(jīng)石油醚、乙醚提取脂肪后，再用正己烷溶解，經(jīng)毛細管色譜柱分離，質譜檢測器檢測，外標法定量測定1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的含量。結果顯示：回收率在86.0%～94.7%，相對標準偏差在2.89%～3.20%，表明分析結果可靠。

氣相色譜-質譜聯(lián)用法；1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯；嬰幼兒配方乳粉

母乳喂養(yǎng)可以為嬰兒健康生長發(fā)育提供最理想食品，無論在營養(yǎng)學、免疫學還是心理學等方面，母乳喂養(yǎng)對于嬰兒的益處是嬰幼兒配方乳粉喂養(yǎng)無可比擬的。任何嬰幼兒配方乳粉都不能與母乳相媲美，只能作為母乳喂養(yǎng)失敗后的無奈選擇，或母乳不足時對母乳的補充。因此，所有的嬰幼兒配方乳粉所追求的終極目標就是使產(chǎn)品無限接近母乳。

作為母乳替代品的嬰幼兒配方乳粉，其脂肪結構應盡量接近母乳。1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯作為一種新資源食品，是由脂肪酶催化酯交換反應，使脂肪酸在甘油分子上的位置重新排列而得，其與母乳脂肪結構相似。許多研究證明，嬰幼兒配方乳粉中添加1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯可使其在微觀上更接近母乳脂肪成分，能夠提高脂肪酸的吸收利用率，促進嬰兒對脂肪、礦物質的吸收，促進嬰兒骨骼礦物質的沉積，預防便秘。

2008年5月26日，中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布公告（2008年第13號），批準了1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯作為營養(yǎng)強化劑在嬰兒配方食品、較大嬰兒和幼兒配方食品中使用，并于2010年1月4日中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布的第1號公告中明確了1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的使用范圍及使用量。1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯作為母乳脂肪的替代品之一，正在被廣泛地添加在嬰幼兒配方乳粉中。因此準確測定嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的含量具有重要意義。目前國家尚未出臺標準的檢測方法，文獻上的檢測方法主要有：薄層色譜分離與氣相色譜法、反相高效液相色譜法、氣相色譜法、蒸發(fā)光散射高效液相色譜法、氣相色譜-質譜聯(lián)用法、銀離子交換柱分離與液相色譜法、胰脂肪酶與液相色譜法等。本文論述了采用氣相色譜-質譜聯(lián)用法測定嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量的方法，該方法精密度高，重現(xiàn)性好，適用于嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量的測定。

1 材料和方法

1.1 試劑和材料

乙醇：分析純，體積分數(shù)為9 5%；氨水：分析純，25%～28%；正己烷：色譜純；石油醚：分析純；乙醚：分析純。

1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯標準貯備液，濃度為10 mg/ mL：精確稱取0.5000 g 1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯標準品于50 mL容量瓶中，用正己烷溶解定容。

1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯標準中間液，濃度為1 mg/ mL：取標準貯備液1 mL，用正己烷定容至10 mL。

分析用水應符合GB/T 6682-2008《分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法》中規(guī)定的三級水。

1.2 儀器和設備

毛氏抽脂瓶；毛氏離心機；毛氏水浴鍋；毛氏振蕩器；分析天平：奧豪斯，CAV214C；渦旋振蕩器：其林貝爾，XW-80A；超聲波清洗機：昆山，KQ-700DE；旋轉蒸發(fā)儀：上海滬西，RE52-3；氣相色譜-質譜聯(lián)用儀：日本島津，GCMS-QP2010E。

1.3 試驗方法

試樣處理：稱取混合均勻的嬰幼兒配方乳粉固體試樣約1.5 g（精確到0.1 mg）于毛氏抽脂瓶中，加入10 mL 45 ℃的水，將試樣洗入毛氏抽脂瓶的小球中，充分混合，直到試樣完全散開，之后冷卻。

脂肪的提取：①第一次提取：向毛氏抽脂瓶中加入3.0 mL氨水，混勻。置于60 ℃水浴中15～20 min，冷卻至室溫。加入10 mL乙醇和1 滴剛果紅溶液，混勻。再加入25 mL乙醚，塞上軟木塞，放到毛氏抽脂瓶搖混器上震蕩1 min。再加入25 mL石油醚，震蕩1 min，4 000 r/min離心分層。傾出上清液于脂肪收集瓶中。②第二次提取：在剩余試樣液中再加入5 mL乙醇，25 mL乙醚，25 mL石油醚，按上述操作步驟進行第二次提取。離心分層后傾出上清液與第一次的上清液合并。將脂肪收集瓶置于旋轉蒸發(fā)器上，在60 ℃通入氮氣條件下旋轉蒸發(fā)除去溶劑，保留殘渣，即為脂肪，用10 mL正己烷溶解備用。

1.4 色譜條件

毛細管色譜柱：HP-5MS，30 m×0.25 mm×0.25 μm，彈性石英毛細管柱；

載氣：高純氦氣，流量1 mL/ min；

分流比：1∶50；

進樣量：1 μL；

溶劑延遲：3 min；

進樣口溫度：365 ℃；

接口溫度320 ℃，柱溫300 ℃，保持3 min，以2 ℃/min速率升至350 ℃，保持12 min；

質譜條件：離子源為EI源，電子能量70 eV，離子源溫度250℃，四極桿溫度200 ℃，掃描范圍30～800 amu，電子倍增器電壓1.5 kV。

2 結果與分析

2.1 測定方法

將標準中間液進行系列稀釋，制成標準系列工作液，濃度分別為0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mg/mL。將標準系列工作液與試液分別注入色譜儀，按上述的儀器條件進行測定，得到相應的總離子流圖，采用外標法定量。以標準系列工作液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。用標準工作曲線計算未知樣品的濃度，進行結果計算。線性方程為：Y=650752X+528.7，相關系數(shù)為0.9994（圖1）。

表1 平均回收率和相對標準偏差（n=6）

表2 準確度（n=2）

圖1 標準曲線

2.2 樣品加標回收率與精密度

在待測樣品中添加3 個不同水平的1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯標準工作液，每個水平做6 個平行樣，計算回收率和相對標準偏差。按照1.3的樣品處理方法進行處理。結果見表1。其回收率在86.0%～94.7%，相對標準偏差在2.89%～3.20%，表明分析結果可靠。

2.3 準確度

重復性條件下兩次獨立測定結果，準確度為1.73%。如表2。

2.3 試驗過程注意事項

2.3.1 實驗試劑乙醚、石油醚等用于空白試驗，以檢驗試劑的純度。

2.3.2 保證氣質聯(lián)用儀的氣密性，避免漏氣造成抽真空不正常。最常見的漏氣部位可能是進樣墊，需要判斷固定進樣墊的螺母、玻璃襯管的O型圈及進樣口螺母、毛細柱兩端的螺母、真空腔體門是否擰緊。

2.3.3 氣質聯(lián)用儀每次重新開機時，色譜柱均需要更換，進樣墊更換后均需要重新做調諧。

2.3.4 每次試驗結束后，需將氣質聯(lián)用儀的進樣針取下，用適宜的溶劑進行清洗。

3 結論

本測定方法樣品前處理簡單，干擾因素少，適用于嬰幼兒配方乳粉及同類產(chǎn)品中1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯含量的測定。

[1] 李夢月，殷剛柱. 嬰兒期母乳喂養(yǎng)的研究進展[J]. 中國醫(yī)藥指南，2014（4）：49-50.

[2] 趙晨，王敏，劉寧，等. 1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的合成研究[J]. 中國乳品工業(yè)，2014，42（5）：13-16.

[3] 馬小寧，田燕，宋小莉，等. 氣相色譜法測定嬰幼兒配方乳粉中1，3-二油酸2-棕櫚酸甘油三酯[J]. 檢驗檢疫學刊，2013，23（6）：32-38.

[4] 陳盛，陳景春，何亞斌. 1，3-二油酸2-棕櫚酸甘油三酯（OPO）檢測技術綜述. 廣州化工，2016（3）：26-27.

[5] 中華人民共和國衛(wèi)生部. GB 5413.3-2010食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中脂肪的測定. 北京：中國標準出版社，2010.

[6] 鄒建凱. 椰子油甘油三酯的高溫氣相色譜質譜分析. 分析化學研究簡報，2002，30（4）：428-431.

尚東洋（1985-），女，助理工程師，從事乳品質量管理工作。

2017-03-23）