SF3B1在急性髓系白血病中的表達

續 琳

(山西醫科大學第二醫院，山西 太原 030001)

·基礎醫學·

SF3B1在急性髓系白血病中的表達

續 琳

(山西醫科大學第二醫院，山西 太原 030001)

目的：探討SF3B1突變在急性髓系白血病中的發生情況。方法：利用HRMA和DNA直接測序分析65例急性髓系白血病的SF3B1的突變熱點。結果： 在AML中存在SF3B1雜合突變，通過DNA直接測序發現1例K666T，1例K700E突變,1例同時具有NPM1和DNMT3A 突變，1例具有DNMT3A和FLT3-ITD突變。結論：SF3B1突變在AML中罕見。

SF3B1；急性髓系白血病；基因突變

急性髓系白血病(Acute myeloidleukemia， AML)是一類源于造血干祖細胞的惡性克隆性疾病，因干祖細胞分化受阻或對正常的分化調節反應異常，導致骨髓或外周血中不成熟細胞增多。近年，關于和白血病相關的基因突變被陸續發現，其中有部分基因突變被證實和疾病的進展及預后相關[1]。有些被作為世界衛生組織對白血病進行分型的依據[2]。

轉錄本的選擇性剪接可以發生于不同的腫瘤中[3]，然而關于其在腫瘤中的致病機制卻不清楚。血液腫瘤細胞剪接體基因的體細胞突變近來被認知[4]。RNA剪接因子3B第1亞單位(splicing factor 3B subunit 1，SF3B1)基因RNA 剪接過程中起著重要的作用，其主要由5個小核糖核蛋白(snRNP) 復合體組成，包括U1、U2、U3、U4、U5、U6等。其中，SF3B1編碼的蛋白是U2snRNP的一個組成部分。RNA的正常剪接是基于精準識別外顯子-內含子交界處的位點，然而當剪接體組份突變時，會導致所翻譯蛋白質的改變，從而導致剪接亞型變異和疾病的發生[5]。研究發現6.5%～28.1%的骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome， MDS)和5%～15%的慢性淋巴細胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)存在SF3B1的基因突變[4]，共有4個突變熱點，分別是密碼子E622，H662，K666和 K700。并且還發現，具有SF3B1突變的CLL預后不良[6]，而在MDS中的預后價值卻存在爭議[4]。而關于SF3B1在AML中的發生情況卻鮮有報道，故本文將利用HRMA法探索SF3B1在AML中發生情況。

1 資料和方法

1.1 一般資料

65例初診急性髓系白血病的骨髓標本來源于山西醫科大學第二醫院2016年5～12月的住院患者，男40例，女25例，中位年齡32歲。所有患者的診斷根據FAB和2008年世界衛生組織的診斷指南確診[2]。

1.2 方法

使用蔗聚糖基質的密度梯度離心法分離骨髓標本的單個核細胞，使用DNA提取試劑盒提取骨髓標本DNA，操作參照試劑盒說明書執行。 在25μL體積存在下，用1×PCR緩沖，0.25 mmol / L的每個dNTP，2.5 mmol/L MgCl2，0.8μmol/L正向和反向引物，1 UTaq 酶(寶生物，大連)和50 ng基因組DNA。PCR反應使用ABI7300PCR儀。見表1 。

表1 SF3B1 引物序列及反應條件

PCR產物轉移到LightScanner(美國)進行高分辨率溶解曲線分析法(High-resolution melting analysis，HRMA)分析，平板以0.10°C/s 的加熱速度從55°C 加熱到 95°C，利用儀器自帶的分析軟件，對溶解曲線進行分析。FLT3-ITD、NPM1突變檢測按文獻中方法執行[5]。

2 結果

樣品表現出光滑和對稱的熔融曲線表示野生型純合子SF3B1。3個樣本(4.6%)存在復雜的熔解曲線形狀的變化，表明為雜合性突變。核苷酸的變化分別為C1997A>C(AAG→ACG，K666T)，C1998G>C(AAG→AAC，K666N)，和C2098A>G(AAA→GAA，K700E)，分別為圖1。3例患者的臨床特點SF3B1突變如表2所示。

表2 3例SF3B1突變患者的臨床及實驗室參數

注：M 男性，NA 沒有數據，RS 環形鐵粒幼紅細胞。

A: K666T (C1997A>C) 和K666N (C1998G>C)突變;

B: K700E (C2098A>G) 突變; WT 野生型; 直線代表突變密碼子; 箭頭指示突變位點。

圖1 SF3B1的DNA測序結果

Fig1 Results of SF3B1DNA Direct Sequencing

3 討論

在本研究中， SF3B1突變在AML有非常低的發生。此外，在檢測SF3B1K666T時 HRMA的最大靈敏度可達5%，高于直接DNA測序(10%)。雖然有報道顯示，SF3B1突變與環形鐵粒幼細胞(RS)相關，在AML的突變率為(2.6%～5%)[4]，原發性血小板增多癥(3%)，原發性骨髓纖維化(4%～6.5%)[7]，慢性粒細胞白血病(4.5%～6.5%[4，7]，乳腺癌(1%)，腎腫瘤(3%)，多發性骨髓瘤(3%)，和腺樣體囊性癌(4%)[7]。

研究中發現有突變的3例患者均為正常核型，1例有NPM1和DNMT3A突變，1例FLT3-ITD和DNMT3A突變。這與達姆等[8]報道的SF3B1基因突變與DNMT3A突變有關系(35%患者有SF3B1突變伴隨DNMT3A突變)，相一致。最近，在大樣本研究中發現，16%(44 / 275)的AML患者有SF3B1突變[9]。在RS≥15%患者有約31%的患者有SF3B1突變，在48.9%正常核型病例中有≥15%的鐵粒幼細胞。此外還發現，SF3B1突變與年齡、M2和M4、FLT3-ITD,RUNX1等基因相關[9]。

因隨訪數據不足，SF3B1基因突變對AML預后的影響，在本研究中無法明確。目前有關SF3B1基因突變對預后的影響的有關報道相互矛盾[10]。

綜上所述， SF3B1在AML患者突變頻率很低。而SF3B1突變和其他基因突變的關系及在預后評價中的價值卻有待進一步研究。

[1] 孫妍珺.急性髓細胞白血病DNMT3A基因突變的臨床研究[D]．蘇州：蘇州大學，2016.

[2] 馬 軍，趙東陸.WHO 2016(修訂版)急性髓系白血病分型解讀[J]．臨床血液學雜志，2017,30(3)：169-171.

[3] 徐敏杰，竇同海，徐佳熹.癌癥相關基因選擇性剪接進化數據庫的構建[J]．復旦學報(自然科學版)，2016，55(5)：649-659.

[4] Maciejewski JP, Padgett RA. Defects in Spliceosomal Machinery: a new pathway of leukaemogenesis[J]. Br J Haematol,2012,158：165-173.

[5] Yokoi A，Kotake Y，Takahashi K，et al． Biological Validation that SF3b is a Target of the Antitumor Macrolide Pladienolide[J]．FEBS J，2011，278(24): 4870-4880．

[6] Rossi D, Bruscaggin A, Spina V, et al. Mutations of the SF3B1 Splicing Factor in Chronic Lymphocytic Leukemia: association with progression and fludarabine-refractoriness[J]. Blood，2011，118：6904-6908.

[7] Papaemmanuil E, Cazzola M, Boultwood J, et al.Somatic SF3B1 Mutation in Myelodysplasia with Ring Sideroblasts[J]. N Engl J Med，2011，365:1384-1395.

[8] Damm F, Kosmider O, Gelsi-Boyer V, et al. Mutations Affecting mRNA Splicing Define Distinct Clinical Phenotypes and Correlate with Patient Outcome in myelodysplastic syndromes[J].Blood，2012，119：3211-3218.

[9] Jeromin S, Bacher U, Bayer K, et al. SF3B1 Mutations Aredetectable in 48.9% of Acute Myeloid Leukemia with Normal Karyotype (AML-NK)and ≥15% Ring Sideroblasts are Closely Related to FLT3-ITD and RUNX1 Mutations[J].Blood，2012，120:406.

[10] Malcovati L, Papaemmanuil E, Bowen DT, et al. Clinical Significance of SF3B1 Mutations in Myelodysplastic Syndromes Andmyelodysplastic/myeloproliferative Neoplasms[J].Blood,2011,118：6239-6246.

本文編輯：王知平

統計學符號的書寫

Expression of SF3B1in Acute Myeloid Leukemia

XU Lin

(TheSecondHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,ShanxiProvince,China)

Objective: To investigate the occurrence of SF3B1mutation in acute myeloid leukemia.Methods:SF3B1mutation hot spots of 65 cases of acute myeloid leukemia were analysed using high resolution melting analysis (HRMA) and DNA direct sequencing.Results:In the AML, the SF3B1heterozygotic mutation was found. By sequencing the DNA directly, 1 case K666T, 1 case of the K700E mutation, 1 case with NPM1and DNMT3A mutation, and 1 with DNMT3A and FLT3-ITD mutation were also founded. Conclusions:SF3B1mutation is rarely found in AML.

SF3B1; acute myeloid leukemia; genetic mutations

續 琳，女，工程師，從事醫療設備工作

R733.3

A

1671-0126(2017)03-0001-03