納洛酮、腎上腺素和血管加壓素對復(fù)蘇大鼠細(xì)胞因子的影響

湯天軍，吳 軍，黃忠榮，張繼紅

納洛酮、腎上腺素和血管加壓素對復(fù)蘇大鼠細(xì)胞因子的影響

湯天軍，吳 軍，黃忠榮，張繼紅

目的 分析納洛酮、腎上腺素聯(lián)合血管加壓素對復(fù)蘇大鼠細(xì)胞因子的影響，并探討其可能的作用機制。方法 健康Wistar大鼠100只，雌雄不限，體重280 g～320 g，隨機分為5組(n=20)：假手術(shù)組(A組)，單用腎上腺素組(B組)，腎上腺素聯(lián)合血管加壓素組(C組)，聯(lián)合應(yīng)用腎上腺素、血管加壓素和納洛酮組(D組)，對照組(E組)。A組僅進(jìn)行麻醉以及氣管插管，不進(jìn)行窒息及心肺復(fù)蘇，其他4組成功建立心臟驟停模型后分別尾靜脈注射腎上腺素0.2 mg/kg ，血管加壓素0.8 U/kg和納洛酮0.4 mg/kg以及生理鹽水。記錄B組、C組和D組大鼠自主循環(huán)恢復(fù)后30 min內(nèi)的平均動脈壓(MAP)變化；并采用免疫組織化學(xué)方法檢測腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)以及白介素-10(IL-10)水平。結(jié)果 和E組相比，B組、C組和D組大鼠的窒息時間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，和B組、C組相比，D組的自主循環(huán)成功率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。當(dāng)自主循環(huán)恢復(fù)(ROSC)30 min后，B組、C組、D組的MAP都有上升趨勢，且和B組相比，C組、D組的MAP上升更加明顯(P<0.05)。同時，B組、C組、D組大鼠TNF-α、IL-6以及IL-10水平與E組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 在心肺復(fù)蘇期間聯(lián)合應(yīng)用納洛酮、腎上腺素和血管加壓素能顯著提高自主循環(huán)恢復(fù)率，同時在復(fù)蘇后大鼠動脈壓能維持在相對較高的水平，而且聯(lián)合用藥在降低促炎細(xì)胞因子的同時也能提高復(fù)蘇大鼠血清中的抗炎因子水平。

心肺復(fù)蘇；納洛酮；腎上腺素；血管加壓素；腫瘤壞死因子-α

在臨床上呼吸驟停是最常見、最棘手的問題之一。在心肺復(fù)蘇(CPR)的過程中除了應(yīng)用人工呼吸以及胸外心臟按壓外，藥物的應(yīng)用也是影響心肺復(fù)蘇成功的關(guān)鍵性因素。當(dāng)前在國內(nèi)外，腎上腺素是搶救心臟驟停的一線藥物。但是，不論單獨還是加大劑量使用腎上腺素，CPR的存活率以及自主循環(huán)的恢復(fù)率都沒有顯著的改善?，F(xiàn)階段，臨床上單獨或聯(lián)合用藥意見不一，而且納洛酮、腎上腺素和血管加壓素這三種藥物聯(lián)合應(yīng)用的臨床試驗以及動物實驗都比較缺乏。本研究分析聯(lián)合應(yīng)用納洛酮、腎上腺素和血管加壓素后對復(fù)蘇大鼠細(xì)胞因子的影響。

1 材料與方法

1.1 一般材料 健康Wistar大鼠100只(吉林大學(xué)實驗動物中心提供)，雌雄不限，體重280 g～320 g。隨機分為5組：假手術(shù)組(A)，單用腎上腺素模型組(B組)，腎上腺素聯(lián)合血管加壓素組(C組)，聯(lián)合應(yīng)用腎上腺素、血管加壓素和納洛酮組(D組)，對照組(E組)，每組20只大鼠。

1.2 方法

1.2.1 制模 參考文獻(xiàn)[1]方法制備大鼠心臟驟停模型。手術(shù)前12 h，禁食不禁水。大鼠稱重，腹腔注射戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，給藥劑量為35 mg/kg。將大鼠仰臥固定，同時進(jìn)行心電監(jiān)護(hù)標(biāo)準(zhǔn)肢體導(dǎo)聯(lián)檢測心電圖。對大鼠的左側(cè)頸總動脈進(jìn)行分離手術(shù)，并插入事先充好肝素鈉的經(jīng)脈留置管。連接壓力換能器，以便顯示動脈波形，同時氣管切開置管，連接呼吸機；在大鼠的尾靜脈中插入輸液針，并在輸液針的近端連接注射器。手術(shù)后室溫穩(wěn)定10 min，除A組外，在其他4組中，均用止血鉗夾閉氣管插管，使大鼠因缺氧而出現(xiàn)呼吸停止；A組只進(jìn)行插管操作，不實施窒息處理。

1.2.2 復(fù)蘇與給藥方法 窒息5 min后，在大鼠心跳及呼吸完全停止時松開止血鉗[2]。在復(fù)蘇過程中，E組尾靜脈注射生理鹽水0.5 mL；B組尾靜脈注射等容量腎上腺素0.2 mg/kg；C組尾靜脈注射等容量腎上腺素(0.2 mg/kg)+血管加壓素(0.8 U/kg)；D組尾靜脈注射等容量腎上腺素(0.2 mg/kg)+血管加壓素(0.8 U/kg)+納洛酮(0.4 mg/kg)，間隔3 min注射。注射結(jié)束后迅速進(jìn)行人工胸外按壓，5 min無效者放棄復(fù)蘇。記錄各組大鼠的復(fù)蘇成功率、自主循環(huán)恢復(fù)(ROSC)率以及復(fù)蘇5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min時的平均動脈壓(MAP)變化。

1.2.3 觀察指標(biāo) 上述步驟結(jié)束后，迅速將大鼠處死，取出部分心臟將其放在4 ℃多聚甲醛中處理，采用免疫組織化學(xué)法檢測腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)水平。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 心搏停止：心電監(jiān)護(hù)儀顯示動脈脈搏波動信號消失或者M(jìn)AP<10 mmHg； ROSC恢復(fù)標(biāo)準(zhǔn)：有室上性節(jié)律，且平均動脈壓≥20 mmHg，其持續(xù)時間要≥5 min；自主呼吸恢復(fù)標(biāo)準(zhǔn)：在ROSC后，在機械條件去除的條件下，大鼠能自主呼吸；復(fù)蘇成功：大鼠同時具有自主呼吸和自主循環(huán)。

2 結(jié) 果

2.1 復(fù)蘇前大鼠基礎(chǔ)參數(shù)的比較 在復(fù)蘇前，5組大鼠的體重等參數(shù)無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 5組大鼠相關(guān)基礎(chǔ)參數(shù)比較(±s)

2.2 ROSC成功率 B組有14只(70.0%)大鼠恢復(fù)自主循環(huán)，C組有15只(75.0%)大鼠恢復(fù)自主循環(huán)，D組有19只(95.0%)大鼠恢復(fù)自主循環(huán)；E組有2只(10.0%)大鼠恢復(fù)自主循環(huán)。和B組、C組大鼠相比，D組復(fù)蘇成功率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。B組大鼠的窒息時間為(3.6±0.3)s，ROSC時間為(72.5±2.5)s；C組大鼠的窒息時間為(3.7±0.4)s，ROSC時間為(71.4±1.8)s；E組大鼠的窒息時間為(70.3±1.4)s，ROSC時間為(70.0±1.1)s。3組窒息時間以及ROSC時間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 大鼠在ROSC 30 min后的MAP變化 在自主循環(huán)恢復(fù)后，B、C、D 3組的MAP都有增高趨勢。C組大鼠和D組大鼠的MAP與B組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 3組大鼠自主循環(huán)恢復(fù)后的MAP比較(±s) mmHg

2.4 ROSC30 min后各組大鼠的IL-6、IL-10以及TNF-α的變化 ROSC 30 min后，B組、C組及D組大鼠的TNF-α、IL-6以及IL-10水平明顯高于E組(P<0.05)；B組大鼠血清中TNF-α、IL-6水平明顯高于C組、D組大鼠(P<0.05)；B組大鼠血清中促炎癥細(xì)胞因子高于C組、D組大鼠；C組大鼠血清中的TNF-α及IL-6高于D組大鼠，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。C組大鼠在復(fù)蘇后，其促炎癥細(xì)胞因子高于D組大鼠；而C組大鼠血清中IL-10水平明顯低于D組大鼠(P<0.05)，D組聯(lián)合用藥可提高大鼠血清中的抗炎因子水平。詳見表3。

表3 4組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10水平比較(±s)

3 討 論

臨床上病人一旦出現(xiàn)心搏驟停，其ROSC成功率在50%，但是最終能出院率僅為10%[3]。雖然在臨床上作為一線復(fù)蘇藥物，腎上腺素的作用早已得到公認(rèn)，但是在搶救心臟驟停的病人時，無論使用標(biāo)準(zhǔn)劑量還是大劑量的腎上腺素，其搶救的成功率以及出院后的存活率都很低。研究發(fā)現(xiàn)，這可能是由腎上腺素的β-受體興奮所導(dǎo)致的。在ROSC后，腎上腺素的β-受體興奮可能帶來很多不利影響，例如心肌功能不全、心肌耗氧量增加等，進(jìn)而影響了CPR的成功率和病人出院后的成活率[4]。近年來，在CPR中聯(lián)合應(yīng)用納洛酮、腎上腺素等受到了廣泛的關(guān)注[5-7]。

血管加壓素是一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素。它是由下丘腦視上核及室旁神經(jīng)元細(xì)胞分泌，并通過垂體后葉釋放的。研究表明：在那些CPR成功病人的血清中內(nèi)源性加壓素水平明顯高于未成功病人[8]。在心肺復(fù)蘇實驗中，將狗作為實驗動物，在心室顫動時也觀測到了血管加壓素有急劇上升的現(xiàn)象[9]。以上這些研究都暗示了在CPR過程中給予外源性血管加壓素可能有利于提高CPR成功率。在CPR時，聯(lián)合應(yīng)用納洛酮、腎上腺素和血管加壓素可顯著提高病人的CPR成功率以及出院后的存活率。有實驗研究表明：當(dāng)病人出現(xiàn)心跳驟停后所引發(fā)的再灌注損傷與促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子之間的平衡息息相關(guān)[10]。

本次實驗中，雖然各組大鼠在窒息時間上無統(tǒng)計學(xué)意義。但是和B組、C組、E組相比，D組大鼠的ROSC成功率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ROSC恢復(fù)后，B組、C組及D組的MAP呈上升趨勢，和B組相比，C組和D組的MAP明顯增高(P<0.05)。同時，ROSC 30 min后，和E組比較，B組、C組及D組的TNF-α、IL-6以及IL-10水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其機制可能是：①聯(lián)合用藥在降低腎上腺素毒副作用的同時，產(chǎn)生了協(xié)同作用；②聯(lián)合用藥增加了某些重要器官的血流量以及冠狀動脈灌注壓，促進(jìn)循環(huán)復(fù)蘇；③聯(lián)合用藥可抑制β-內(nèi)啡肽，降低其對呼吸中樞的抑制性。

聯(lián)合應(yīng)用納洛酮、腎上腺素和血管加壓素在CPR治療中能產(chǎn)生協(xié)同作用，同時聯(lián)合用藥也提高了CPR的成功率，克服了單一藥物的不足。因此，在臨床上納洛酮、腎上腺素和血管加壓素有望成為CPR時的有效組合用藥。

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(本文編輯王雅潔)

Effects of Naloxone，Epinephrine and Vasopressin on Cytokines in Resuscitation Rats

Tang Tianjun，Wu Jun，Huang Zhongrong，Zhang Jihong

Zhuhai Second People’s Hospital， Zhuhai 519020，Guangdong，China

Objective To investigate the effects of naloxone，epinephrine and vasopressin on cytokines in resuscitation rats，and to explore the possible mechanism.Methods One hundred healthy wistar rats，weight in 280 g to 320 g，were randomly divided into five groups：sham operation group (group A，n=20)， epinephrine group (group B，n=20)，epinephrine plus vasopressin group (group C，n=20)，epinephrine，vasopressin plus naloxone group (group D，n=20) and control group (group E， n=20).Rats were treated with anesthesia and tracheal intubation in group A.Rats in group B， groupC， group D and group E were successfully established to cardiac arrest model，adrenaline 0.2 mg/kg，vasopressin 0.8 U/kg and naloxone 0.4 mg/kg and normal saline in tail vein were injected， respectively.The changes of mean arterial pressure (MAP) in 30 min after spontaneous circulation recovery in group B，group C and group D were recorded.The levels of tumor necrosis factor alpha (TNF-α)， interleukin (IL)-6 and IL-10 were detected by immunohistochemical method.Results Compared with group E，there were no significant difference in asphyxia time between group B， group C and group D (P>0.05).Compared with group C and group B，there was a significant difference in the success rate of spontaneous circulation in group D (P<0.05).When 30 min after return of spontaneous circulation (ROSC)， MAP had an upward trend in grup B，group C，group D.Compared with group B， MAP increased more significantly in group C and group D (P<0.05).At the same time， there was a significant difference in the levels of TNF-α，IL-6 and IL-10 between group E and group B，or group C，or group D (P<0.05).Conclusion During cardiopulmonary resuscitation (CPR)，naloxone，epinephrine and vasopressin can significantly increase the rate of spontaneous circulation restoration.At the same time， arterial pressure maintained at a relatively high level in rats after the recovery.Naloxone，epinephrine and vasopressin can reduce the levels of serum proinflammatory cytokines，improve the levels of serum anti inflammatory cytokines in rats.

cardiopulmonary resuscitation；naloxone；epinephrine；vasopressin；tumor necrosis factor alpha

珠海市科技計劃項目(No.2015A1013)

廣東省珠海市第二人民醫(yī)院(廣東珠海 519020)，E-mail：tttianjj@163.com

信息：湯天軍，吳軍，黃忠榮，等.納洛酮、腎上腺素和血管加壓素對復(fù)蘇大鼠細(xì)胞因子的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(12)：1453-1456.

R289.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.12.009

1672-1349(2017)12-1453-04

2016-08-06)