惡性血液病患者化療前后TBNK淋巴細胞亞群的檢測及其臨床意義

唐 軍

（九江市婦幼保健院檢驗科，江西九江332000）

惡性血液病患者化療前后TBNK淋巴細胞亞群的檢測及其臨床意義

唐 軍

（九江市婦幼保健院檢驗科，江西九江332000）

目的探討惡性血液病患者化療前后TBNK淋巴細胞亞群的檢測及其臨床意義。方法采用流式細胞儀對兩組患者進行外周血TBNK淋巴細胞亞群檢測，分析化療前后的變化，觀察組患者的免疫功能變化及其與病情進展之間的聯系和病情的變化及預后。結果分析發現，觀察組的所有患者指標均低于對照組，且急性患者比非急性患者更低。在治療后，40例患者中有25例患者TBNK淋巴細胞亞群有明顯變化，得到了緩解。治療前，觀察組患者CD3、CD4+、CD3+/CD8+、D16+CD56+指標較低，治療后明顯提高，通過指標的變化分析患者免疫功能和病情的變化。結論化療前，惡性血液病患者的TBNK各項指標異常，化療后得到有效的緩解，表明通過檢測TBNK淋巴細胞亞群有助于了解患者的免疫功能和病情的變化情況，值得推廣應用。

惡性血液病；化療；TBNK淋巴細胞亞群

血液病是目前威脅著人類健康的一類重大疾病，是一種原發于造血系統的疾病，其中，惡性血液病是所有惡性腫瘤發病率排第6位的一類疾病[1]。目前治療惡性血液病的主要手段是化療，但化療藥物通常“敵我不分”，在殺死病變細胞的同時，也會殺傷人體正常免疫細胞。感染是惡性血液病患者死亡的重要原因，大量的文獻表明[2]：化療會對機體的免疫系統產生損害，導致患者免疫力下降，增加其發生感染的機率。如何在化療、免疫調節劑應用和預防感染中找到一個平衡點，對患者進行恰如其分的治療，是臨床工作者經常要碰到的問題，這需要臨床醫生確切的掌握每個患者的免疫情況。本次研究，旨在通過對TBNK淋巴細胞亞群的檢測，了解患者的免疫功能變化及其與病情進展之間的聯系，了解病情的變化及預后，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料觀察組選擇2014年3月～2015年3月我院接受診治的惡性血液初治病患者共40例，男27例，女13例，年齡20～65歲，平均年齡（35.22±2.1）歲。均于MICM確診為急慢性白血病，其中，急性白血病22例，慢性白血病5例、惡性淋巴瘤9例、多發性骨髓瘤4例。對照組選擇同時期到我院健康體檢者30例，其中，男16例，女14例，年齡22～67歲，平均年齡（35.31±2.3）歲。所有病例診斷均符合血液病診斷及療效標準，兩組的年齡、性別等一般資料差異，無統計學意義。

1.2 方法檢測時間和次數：惡性血液病患者分別采用DA、DVP、CHOP、COMP等方案治療，2l d為1個周期。所有病例及正常對照組均空腹抽晨血，檢測惡性血液病患者治療前、有效緩解、未緩解、化療緩解后鞏固治療各階段及正常人的外周血分別3次測定TBNK淋巴細胞亞群。

標本收集：（1）收集正常人外周血和各類惡性血液病初治患者外周血，無菌條件下采集以EDTA-K抗凝2 mL；（2）收集化療有效緩解的患者與未能緩解患者化療前后外周血，無菌條件下采集以EDTA-K抗凝2 mL；（3）收集化療緩解后各類惡性血液病患者鞏固治療各階段外周血，無菌條件下采集以EDTA-K抗凝2 mL；

TBNK細胞檢測：應用熒光直接標記法及流式細胞儀檢測外周血單個核細胞膜表面CD3/CD4/CD8/CD45/CD16+56/ CD19。取試管加入調節細胞數為1×106細胞數的外周血，加入試劑20μL，室溫下避光孵育15～20 min→加入1 mL紅細胞裂解液→室溫下避光15 min→1 200轉/min離心5 min兩遍→500μLPBS重懸細胞，上機測定。調用MultiSET軟件，圈淋巴細胞門，讀取數據。

1.3 排除標準所有病例診斷均參照血液病診斷及療效標準，不符合此標準經臨床診斷為非惡性血液病患者。

1.4 統計學方法采用SPSS19.0統計軟件對數據進行分析和處理，計量資料采用“s”表示，組間比較采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者外周血TBNK淋巴細胞亞群治療前后的檢測變化比較從觀察組的40例患者治療前后的TBNK淋巴細胞數據比較，治療后的惡性血液病患者CD3、CD4+、CD3+/CD8+、D16+CD56+指標有明顯的提高，前后差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 惡性血液病患者和健康人群TBNK淋巴細胞分布特點觀察組的CD3、CD4+、CD3+/CD8+、D16+CD56+指標均低于對照組，且急性患者的CD3+/CD8+最低為（0.97±0.32）。隨著病情的緩解，指標都在升高并恢復至正常水平，緩解后各項指標和對照組比較，差異無統計學意義。

3 討論

目前最常用的檢測淋巴細胞亞群，包括T淋巴細胞（CD3）、B淋巴細胞（CD19）、NK細胞（CD16+56+）、輔助性T淋巴細胞（CD3+CD4+）、抑制性T淋巴細胞（CD3+CD8+）[3]。CD4+細胞可協助B細胞分泌抗體和調節其他T細胞的免疫應答，能夠識別血液腫瘤細胞分泌的可溶性抗原，釋放IL-2，IFN-γ，IL-4等細胞因子，激活巨噬細胞和NK細胞，促進B淋巴細胞活化和抗體的形成，從而起到抗腫瘤作用[4]；CD8+細胞常表現細胞毒活性，是主要的細胞毒效應細胞；NK細胞是機體防御腫瘤的天然屏障，腫瘤細胞能被它直接或者分泌出細胞因子而殺傷，腫瘤發展和發生轉移的原因往往是因為其活性的降低。分泌抗體和介導體液免疫應答是B淋巴細胞的主要功能。活化的B淋巴細胞可以分泌抗原，誘導T細胞免疫和巨噬細胞補體系統一起殺死腫瘤細胞[5]。

胸腺肽是臨床上應用很廣的一種免疫調節劑，能誘導T細胞的分化成熟，增加細胞因子的生成和增強B細胞的抗體應答，起到維持機體免疫平衡，提高機體抵抗疾病的能力。已有報導證實[6]：化療的同時使用胸腺肽可以保護增強免疫細胞的活性，保證化療的如期進行，還能調動提高機體免疫活性細胞達到機體免疫功能良性循環。

正常情況下機體免疫狀態的維持，靠各種免疫細胞之間相互作用，使各細胞的指標達到一種穩定的狀態[7]。近年的相關研究表明[8]，Th（輔助性T淋巴細胞）及Ts（抑制性T淋巴細胞）的平衡是維持機體免疫內環境穩定的一個中心環節，其比值可直接反映機體細胞免疫功能狀態，當Th/Ts比值很低時，機體細胞免疫處于受抑制的狀態，增加機體發生感染的概率，同時也預示著患者的預后較差，容易發生腫瘤轉移。

本次研究證明，惡性血液病患者TBNK細胞比值及其功能和正常的健康人群相比更低，如與免疫功能有關的CD3+CD8+指標，其功能低下會導致腫瘤持續生長；CD4+、D16+CD56+細胞在體內抗瘤免疫中具有重要作用。經化療后可以改善CD3、CD4+、CD3+/CD8+、D16+CD56+各項指標的比值，緩解后免疫功能恢復到正常水平。

綜上所述，治療前的惡性血液患者和治療后的惡性血液患者TBNK淋巴細胞的比值有明顯差異，檢測TBNK淋巴細胞亞群的比值，對評價治療后的療效、患者的免疫功能變化及其與病情進展之間的聯系和病情的變化及預后方面有著一定的臨床價值，值得廣為應用。

表1 兩組患者外周血TBNK淋巴細胞亞群治療前后的檢測變化比較（）

表1 兩組患者外周血TBNK淋巴細胞亞群治療前后的檢測變化比較（）

注：t、P值所得數據，來源于觀察組治療前和治療后的數據比較

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[2]鄭淑霞,謝若騰.惡性血液病患者外周血NK細胞數量變化及意義[J].中國實驗血液學雜志，2015,23(4)：1133-1137.

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[4]黃菊,王宙政,韓艷霞，等.急性白血病患者外周血T淋巴細胞亞群及NK細胞表達情況分析[J].浙江醫學，2013(17)：1596-1598．

[5]何金媛,賈祝霞,蔡曉輝，等.NKG2D在細胞因子誘導的殺傷性細胞(CIK)抗血液腫瘤細胞的作用[J].中國實驗血液學雜志，2013,21(6)：1380-1384.

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[7]石艷芬,陳梅英,蘇文芳.腫瘤患者外周血T淋巴細胞亞群和自然殺傷細胞數目的變化及其臨床意義[J].檢驗醫學與臨床，2012,9(22)：2888-2889．

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.21.079