HPLC法檢測設備表面枸櫞酸托法替布含量

張群+戚蘭君+徐凱

【摘要】本文建立用高效液相法（HPLC）對設備表面的枸櫞酸托法替布殘留的檢測方法。方法：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1%醋酸銨溶液-乙腈75∶25為流動相；檢測波長為286nm。結果：該方法線性范圍為7μg/ml到43μg/ml，R2=0.9997；回收率為99.5%，取樣回收率為91.0%；且該方法專屬性強、靈敏度高、在24小時內溶液穩定性良好，夠準確的檢測出設備表面殘留的枸櫞酸托法替布含量。

【關鍵詞】高效液相法 HPLC；枸櫞酸托法替布；設備表面殘留

【中圖分類號】R971 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）07--02

1.前言

類風濕關節炎目前大多被認為是人體自身免疫性疾病，亦是一種慢性的綜合征，表現為外周關節的非特異性炎癥。此時患病關節及其周圍組織呈現進行性破壞，并致使受損關節發生功能障礙，影響全球0.8%的成人人口[1，2]。人們正越來越致力于類風濕性關節炎藥物的開發。

枸櫞酸托法替布片是由美國輝瑞制藥公司開發的一種新型的治療類風濕性關節炎（RA）的藥物，用于對氨甲喋呤治療應答不充分或不耐受的中至重度活動性類風濕性關節炎成人患者。[3]作為Janus激酶（JAK）抑制劑，托法替布通過作用于JAKs來預防STATs磷酸化和激活。2012年美國食品藥品監督管理局批準該藥品上市。本文對設備表面的枸櫞酸托法替布殘留的檢測方法進行了考察研究。

2.方法

2.1 儀器與試劑

儀器：Agilent1260液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；BT125D分析天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；KQ500E超聲清洗器（中國昆山市超聲儀器有限公司）。試劑：枸櫞酸托法替布對照品（自標，批號LFQ170315，含量100%，水分0.13%）；醋酸銨（溫州市化學用料廠）；醋酸（上海凌峰化學試劑有限公司）；乙腈（J.TBaker）。

2.2 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Shim-packVP-ODS4.6×150mm5μm）；以0.1%醋酸銨溶液（用醋酸調節pH值至5.0）-乙腈75∶25為流動相；檢測波長為286nm；進樣量為20μl；理論板數按托法替布峰計算應不低于2000。

2.3 溶液制備

對照溶液的制備：取枸櫞酸托法替布對照品，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含枸櫞酸托法替布28.68?g的溶液，搖勻，作為對照品溶液。

供試品溶液的制備（模擬生產設備進行取樣）：取合適濃度的對照品溶液適量均勻滴加涂布在面積約為25cm2的不銹鋼板上，待溶液干后，用干凈的棉球（純化水浸潤）上下左右方向各擦拭至少3次，然后將棉簽浸在10ml純化水中超聲10min后，取浸出液過濾，取續濾液即得。

枸櫞酸托法替布片溶液的制備：取枸櫞酸托法替布片適量，磨成細粉，精密稱定置量瓶中，加純化水適量，超聲10min，使枸櫞酸托法替布溶解，用純化水稀釋制成每1ml中含枸櫞酸托法替布約28.68μg的溶液。

3.結果

3.1 系統適用性。精密取對照品溶液（濃度約為28.68μg/ml）20μl注入液相色譜儀，連續進樣6次，記錄色譜圖。6次對照品峰面積RSD為0.1%，該系統具有良好適用性。

3.2 專屬性。取空白溶劑、空白輔料溶液、對照品溶液和枸櫞酸托法替布片溶液進行測定。空白溶劑和空白輔料溶液在托法替布峰位置均無出峰，對照品溶液和枸櫞酸托法替布片溶液主峰的保留時間一致。結果表明，空白溶劑和輔料空白對枸櫞酸托法替布主峰沒有干擾，該方法專屬性強。

3.3 準確度。取處方量的空白輔料和對照品分別制成含枸櫞酸托法替布14.34μg/ml、28.68μg/ml和43.02μg/ml的溶液各3份，進行測定。其中50%的回收率為98.4%，100%的回收率為98.6%，150%的回收率為99.5%，9份樣品RSD為0.65%。各濃度的回收率均大于98%，該方法回收率良好。

3.4 取樣回收率。吸取對照品儲備液（286.8μg/ml）0.5ml滴加涂布在面積約為25cm2的不銹鋼板上，待溶液干后，用干凈的棉球（純化水溶液浸潤，擠去多余水分）按要求的方法進行擦拭，然后將棉簽浸在5ml純化水中超聲10min后，取浸出液進行測定。其取樣回收率為91.0%，由此表明該方法能將設備表面的大部分殘留擦拭下來。

3.5 線性。取對照品適量，用純化水配制成濃度分別為7.17μg/ml、14.34μg/ml、21.51μg/ml、28.68μg/ml、35.85μg/ml和43.02μg/ml的溶液，精密吸取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，得回歸方程為y=43288x+2.9833，R=0.9997。在7μg/ml到43μg/ml的濃度范圍，方法線性良好。

3.6 檢測限。將對照品溶液進行系列稀釋，將稀釋的對照品溶液進行測定，并將信號與空白溶劑的信號進行比較，信噪比為3：1時的濃度即為檢測限。信噪比為3.6：1時，檢出限為0.288ng。

3.7 溶液穩定性。分別在0h，4h，8h，12h，18h，24h取對照品溶液和枸櫞酸托法替布片溶液（28.68μg/ml）20μl進樣，記錄色譜圖，并以其峰面積計算RSD%。對照品溶液和枸櫞酸托法替布片溶液的RSD均為0.1%，在24小時內該兩種溶液均有良好的穩定性。

4.結論

經過上述實驗驗證，其結果證明該方法專屬性強、準確度高、靈敏度高、線性及溶液穩定性均良好，能夠準確的檢測出設備表面殘留的枸櫞酸托法替布含量，能夠對生產中設備清潔方法提供真實可靠的評價及數據支持。

參考文獻

[1]馬培奇，類風濕性關節炎治療藥物發展現狀及市場趨勢[J]，上海醫藥，第6期，2010年

[2]李克江賈勛超朱同舜，近幾年開發的類風濕性關節炎治療藥物[J]，國外醫藥（抗生素分冊），第1期，2003年

[3]陳嬌婷詹怡飛，HPLC法枸櫞酸托法替布的含量[J]，中國民族民間醫藥，第24卷，第17期，2015年