滑石粉炒魚鰾膠炮制工藝優選

李 楠，譚裕君，王念明，馮玲玲，楊 明

（1.成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 611137；2.江西中醫藥大學·現代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004）

·實驗研究·

滑石粉炒魚鰾膠炮制工藝優選

李 楠1，譚裕君1，王念明1，馮玲玲1，楊 明2

（1.成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 611137；2.江西中醫藥大學·現代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004）

目的優選最佳滑石粉炒魚鰾膠炮制工藝，為滑石粉炮制藥材的工藝篩選及質量評價提供研究思路及方法。方法選用 L9（34）正交表設計試驗，以粉碎率、蛋白質含量為指標，以膨脹率、浸出物為參考指標，結合實際選擇滑石粉炒制時間、滑石粉粒度、滑石粉炒制溫度、滑石粉用量4個因素進行考察，篩選滑石粉炒魚鰾膠炮制工藝。結果選擇2倍于藥物的200目滑石粉，190℃，翻炒3 min為滑石粉炒魚鰾膠最佳工藝。驗證試驗表明，最佳工藝切實可行，結果穩定。結論采用客觀、可靠的評價指標，對傳統滑石粉炒魚鰾膠“翻炒至鼓起、酥脆”的工藝進行了研究，為進一步制訂滑石粉炒魚鰾膠飲片的質量標準提供依據。

滑石粉炒；魚鰾膠；炮制工藝；正交試驗

魚鰾膠為石首魚科動物大黃魚 Pseudosciaena Crocea（Ricb）、小黃魚 P.polyactis Bleerer或鱘科動物中華鱘Acipenses sinensis Cray、鰉魚 Huso dauricus Georgi等的干燥的魚鰾，具有補腎益精、滋筋養脈、散瘀、止血、消腫的作用。魚鰾膠歷來多炮制入藥，現代炮制對魚鰾膠炒制品的要求統一描述為“翻炒至鼓起、酥脆”[1－2]，是魚鰾膠滑石粉炒后最直觀的經驗鑒別方式。其中，“酥”意為物質的酥松程度，“脆”是物質易折、易碎的特性。因此，本研究中提出用炒制前后樣品體積的變化率也就是膨脹率表示物質的酥松程度，粉碎過篩稱定重量法表示物質脆性，以此對魚鰾膠經滑石粉炒后的“酥”“脆”進行定量評價；另外，蛋白質含量測定采用2010年版《中國藥典（二部）》附錄ⅦM蛋白質含量測定方法中的考馬斯亮藍法（Bradford法）。以此考察魚鰾膠炮制品的水分及蛋白質含量，對魚鰾膠炮制品的質量進行定量評價[1－4]。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高速打粉機（浙江省永康市溪岸五金藥具廠）；遠紅外可控調溫電爐（成都市聚 電器廠)；UV－1700型紫外分光光度計（SHIMADZU CORPORATION）。

1.2 試藥

淡水魚鰾膠（四川科倫天然藥業有限公司，批號為20130703），經成都中醫藥大學炮制教研室黃勤挽副教授鑒定合格；考馬斯亮藍G250（純度＞90%），牛血清白蛋白（純度＞98%，20130725），均購自生工生物工程有限公司。

2 方法與結果

2.1 炮制品評價指標測定

2.1.1 膨脹率[3－5]

用500 mL量筒測量炮制品和生品的體積，充分振搖使體積不再增加為止。膨脹率（%）＝燙后體積（mL）／生品體積（mL）×100。

2.1.2 粉碎率

取炮制品各15 g，置粉碎機中粉碎2 min，過60目篩，均篩1.5 min，取可通過60目篩粉末。按公式計算，粉碎率(%)＝m1／m2×100。其中，m1為過60目篩粉末質量（g），m2為炮制品總質量（g）。

2.2 蛋白質含量測定[6]

2.2.1 溶液配制

標準牛血清白蛋白：取牛血清白蛋白對照品9.25mg，加水溶解制成每1 mL中含92.5 μg的溶液。

考馬斯亮藍溶液：稱取考馬斯亮藍G250 1.008 g，加入95%乙醇50 mL超聲（功率500 W，10 min）溶解，再加磷酸100 mL，加水定容至1 000 mL，混勻，抽濾，取續濾液保存在棕色瓶中，即得，冷藏備用。貯存中如有沉淀產生，使用前需再濾過。

供試品溶液：精密吸取配置的考馬斯亮藍溶液1.5mL，置25mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 測定方法

精密吸取供試品溶液1 mL，置具塞試管中，加入考馬斯亮藍溶液5.0 mL，立即混勻，照紫外－可見分光光度法，于400～800 nm波長范圍進行全波長掃描，生魚鰾膠與魚鰾炮制品最大吸收波長均為592 nm。于595 nm波長處測定供試品溶液吸光度，并以考馬斯亮藍溶液校零。

2.2.3 方法學考察

線性關系考察：精密量取對照品溶液 0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分別置具塞試管中，各加水至1 mL，分別加入酸性染色液考馬斯亮藍溶液5.0 mL，混勻，照紫外－可見分光光度法，于595 nm波長處測定吸光度，同時以0號管作為空白。以對照品溶液質量濃度（C）對吸光度（A）計算，得線性回歸方程 A＝0.006 0 C＋0.114 6，r＝0.999 2（n＝6），線性范圍是18.5～92.5 μg／mL。

精密度試驗：取標準牛血清白蛋白溶液（質量濃度為 55.5 μg／mL）依法操作，連續測定 5次。結果的RSD為0.183%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液依法操作，經顯色后室溫放置5，10，15，20，30 min，分別測定吸光度。結果的 RSD為0.726%（n＝5），表明供試品溶液在顯色后30 min內，于595 nm波長處吸收值基本穩定。

重復性試驗：取同一批（批號為20130703）炮制品提取液，依法制備5份供試品溶液，依法測定。結果蛋白質平均含量為0.740 4 g／L，RSD為0.505%（n＝5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密移取已知蛋白質含量（質量濃度為0.740 4 g／L）的供試品溶液6份，每份0.5 mL，分別置10 mL容量瓶中，精密加入牛血清白蛋白標準品溶液（質量濃度為 92.5 μg／mL）4 mL，再補充蒸餾水至刻度，搖勻，稀釋10倍作為供試品溶液，按供試品溶液測定法進行測定。結果平均加樣回收率為101.08%，RSD為1.899%（n＝6）。

2.3 炮制工藝研究[7－9]

2.3.1 因素水平設計

針對“滑石粉，中火，至發泡、鼓起，微黃白”，采用L9（34）正交表設計試驗，以粉碎率、蛋白質含量為指標，以膨脹率、浸出物質量為參考指標。另外，在滑石粉炒制藥材的過程中，滑石粉粒徑過小會造成其吸附于藥材表面，而粒徑過大則藥材受熱不均勻；滑石粉用量越大，藥材受熱越均勻，但用量過高則造成生產成本的提高；炮制時間及溫度關乎藥材內有效成分的保存及藥材質量（是否出現生片或夾生片等）。因此，選擇滑石粉炒制時間（因素A）、滑石粉粒徑（因素B）、滑石粉炒制溫度（因素C）、滑石粉與魚鰾用量比（因素D）4個因素進行工藝考察。結果見表1。

表1 L9（34）試驗因素水平表

2.3.2 試驗結果

膨脹率與浸出物質量測定結果見表2。

表2 膨脹率與浸出物質量測定結果（%）

2.3.3 條件優選

對表2數據分析可知，不同炮制工藝所得炮制品的膨脹率與浸出物無差異。對蛋白含量與粉碎率進行分析，結果見表3。方差分析結果見表4。可知，A，B，D 3個因素對粉碎率具有極顯著性差異，根據直觀分析結果選擇 A2B1C2D3，即滑石粉炮制時間為180 s、滑石粉粒度選擇200目、溫度為190℃、滑石粉與魚鰾用量比例為2∶1時魚鰾膠粉碎率較大。A，C，D 3個因素對蛋白含量具有極顯著性差異，影響蛋白質含量的因素中，C因素與D因素為主要影響因素（P＜0.05），A因素為次要因素（P＞0.05），直觀分析結果得出最佳炮制工藝為 C2D3。選擇炮制溫度為190℃、滑石粉與魚鰾用量比例為2∶1時，魚鰾鼓起完全，無夾生片生成，藥物有效成分煎出較完全。預測最佳炮制工藝為A2B1C2D3，即選擇2倍于藥物的200目滑石粉于190℃條件下，炒制3 min為宜。

表3 L9（34）正交設計試驗方案及結果

表4 方差分析結果

2.3.4 驗證試驗

以最佳炮制工藝制備3批樣品，驗證試驗評價工藝的可靠性。結果見表5。可見，該工藝穩定，合理可行。

表5 驗證試驗結果（%）

3 討論

3.1 正交試驗結果分析

在滑石粉炒魚鰾膠的過程中，滑石粉粒徑過?。ù笥?00目），其對魚鰾膠的吸附性變強，且在鍋中加熱至靈活狀態時滑石粉出現聚集抱團現象，使魚鰾膠受熱不均勻形成夾生片，且酥脆性變差；另外，滑石粉用量對炮制品的粉碎率與蛋白質含量有顯著性影響，滑石粉用量大（滑石粉與魚鰾用量比≥1∶2），魚鰾膠鼓起越充分，粉碎率越高，其中蛋白質得以保存，但用量過高則造成生產成本的提高；炮制時間及溫度對粉碎率有顯著性影響，溫度過低（＜190℃）或炮制時間過短（＜180 s），魚鰾膠同樣有夾生片，溫度過高或炮制時間過長，炮制品出現焦品，蛋白質成分受到破壞。故最終選擇2倍于魚鰾膠的200目滑石粉，190℃，翻炒3 min，作為滑石粉炒魚鰾膠的炮制工藝。

3.2 魚鰾膠的炮制方法[1－2，10]

歷代對魚鰾膠的炮制方法有炒制、制炭、炮、焙等，明清時出現了蛤粉炒、麩炒、牡蠣粉炒等方法，現行主要為滑石粉炒。現代學界普遍認為，滑石粉炒魚鰾膠[1－2]，滑石粉充當中間傳熱體，其流動性強、粉末細膩，適宜于炮制韌性較強的動物藥材。另外，滑石粉作為固體輔料，難以滲入到藥材內部，因此對魚鰾膠本身的功效影響不大，滑石粉炒魚鰾膠的主要作用，體現在魚鰾膠經滑石粉炒后更有利于炮制制劑。另外，臨床認為可采用蒲黃炒魚鰾膠的炮制方法[10]，以擴大魚鰾膠的臨床適用范圍。

3.3 滑石粉炒魚鰾膠指標的選擇[1－2，3，5，8－9，11]

魚鰾膠歷來多炮制入藥，現代滑石粉炒魚鰾膠的炮制工藝的要求統一描述為“翻炒至鼓起、酥脆”。其中，酥脆中的“酥”意為物質的酥松程度，脆是物質易折易碎的一種性質，酥脆、松脆表示物質既酥脆又易折易碎的性質。查閱文獻 [3－5]，采用炒制前后樣品體積的變化率也就是膨脹率表示物質的酥松程度，粉碎過篩稱定質量法表示物質脆性；另外，考察魚鰾膠炮制品的水分及蛋白質含量，對魚鰾膠炮制品的質量進行定量評價，以上使魚鰾膠炮制品的質量評價更加客觀、可靠。本研究為進一步制訂滑石粉炒魚鰾膠飲片的質量標準提供了參考。

3.4 滑石粉輔料標準的建立[12－15]

為了實現中藥飲片炮制規范化，首先需從炮制輔料的規范化入手，中藥炮制輔料的物理或化學性質，可能直接或間接影響炮制品或炮制工藝，對炮制輔料物理性質的控制是很重要的。粒徑小的滑石粉細膩，與粒徑大的滑石粉比較傳熱慢，容易吸附在炮制品表面，造成炮制品受熱不均勻?；圩鳛橐环N非常重要的中藥炮制輔料，迄今尚無統一的質量標準，其質量好壞將直接影響中藥炮制品的質量與品質?；鄣谋砻嫘再|是滑石粉實際應用的重要參數，是衡量滑石粉應用效果的最重要指標。其表面性質如滑石粉的化學穩定性、潤滑性、吸附性、傳熱性以及其他的表面行為，均與滑石粉粒徑大小有關?；哿讲煌瑢е缕浔砻嫘再|不同，作為輔料應用的滑石粉，粒度是其重要的質量標準。2010年版《中國藥典》并未對其細度進行相關規定，建議應對滑石粉細度與對炮制品品質間的相關性進行研究與規范。建立炮制輔料的標準，應圍繞炮制輔料對藥物的影響進行。輔料用量的多少也是影響中藥炮制質量的重要因素，針對不同種類藥材、不同炮制目的，加入的炮制輔料用量也不同。本研究中選擇了代表性的動物藥魚鰾膠，重點考察了滑石粉的粒徑及用量對炮制品品質的影響，可為中藥炮制輔料滑石粉質量標準的建立提供依據。

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Optimization of Processing Technology of Stir－Frying Swim Bladders with Talcum Powder

Li Nan1,Tan Yujun1,Wang Nianming1,Feng Lingling1,Yang Ming2
(1.School of Pharmacy,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu,Sichuan,China 611137; 2.Key Laboratory of Modern Preparation of TCM of Ministry of Education,Jiangxi University of TCM,Nanchang,Jiangxi,China 330004)

Objective To optimize the best processing paramerter for stir－frying Swim Bladders with talcum powder,and provide the study ideas and methods for the processing and quality evaluation.M ethods L9(34)orthogonal test was carried out by multi－index comprehensive analysis in the study,the crushing rate and protein content were taken as indexes,the expansion rate and extract were taken as reference indexes,according to the actual conditions,4 factors(stir－frying time,particle size,temperature and the dosage of talcum powder)were investigated,in order to optimize the processing paramerter for stir－frying Swim Bladders with talcum powder.Results The best technological paramerteres proportion of talcum powder(200 mesh)to Swim Bladders was 2∶1,the temperature was 190℃,and stir－frying time was 3 min.The verification test indicated that the technology was feasible and result was stable.Conclusion The objective and reliable index is used to evaluate the traditional processing of stir－frying Swim Bladders until swell and crisp with talcum powder,it can provide the reference for formulating the new quality standard of processed Swim Bladders.

stir－frying with talcum powder;Swim Bladders;prepared technology;orthogonal test

TQ460.6

A

1006－4931(2017)13－0005－04

2017－04－10)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.13.002

國家中醫藥管理局科技項目[20100711－09]。

李楠，博士研究生，副教授，研究方向為炮制制劑，（電子信箱）55743198＠qq.com。

楊明，博士研究生，教授，研究方向為炮制制劑，（電話）0791－7119118（電子信箱）yangming16＠126.com。