趨化因子受體4的表達和血管內皮生長因子與卵巢癌發生的相關性分析

郭玲+李蓮娣+尹國華

[摘要] 目的 探究趨化因子受體4的表達和血管內皮生長因子與卵巢癌發生的相關性。方法 研究應用免疫組化法SABC法對卵巢癌中的CXCR4和VEGF表達進行聯合檢測，分析兩者在卵巢癌轉移、侵襲的關系，為早期診斷、治療卵巢癌提供具有重要參考價值的生物學指標。結果 CXCR4、VEGF在卵巢癌組織中表達水平顯著高于良性、正常組織水平（P<0.05）；CXCR4、VEGF表達水平可能和腹膜轉移、淋巴結轉移呈現正相關；CXCR4、VEGF表達水平呈正相關（P<0.05）。結論 CXCR4和VEGF在卵巢癌組織中的陽性率較高，且兩者呈正相關，提示CXCR4、VEGF在卵巢癌的發生與轉移過程中發揮著重要作用。

[關鍵詞] 趨化因子受體4；血管內皮生長因子；卵巢癌；陽性表達率；相關性

[中圖分類號] R737.31 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）13-157-04

[Abstract] Objective To explore the correlation of chemokine receptor 4 expression， vascular endothelial growth factor and ovarian carcinogenesis. Methods Immunohistochemical method and SABC method were used to detect the expression of CXCR4 and VEGF in ovarian cancer to analyze the relationship between metastasis and invasion of ovarian cancer. It provided an important biological indicator for early diagnosis and treatment of ovarian cancer. Results The expression levels of CXCR4 and VEGF in ovarian cancer tissues were significantly higher than those in benign and normal tissues（P<0.05）. The expression levels of CXCR4 and VEGF might be positively related to peritoneal metastasis and lymph node metastasis. The expression levels of CXCR4 and VEGF were positively correlated（P<0.05）. Conclusion The positive rates of CXCR4 and VEGF in ovarian cancer tissues are higher， and both of them are positively correlated. These findings suggest that CXCR4 and VEGF play an important role in the development and metastasis of ovarian cancer.

[Key words] Chemokine receptor 4； Vascular endothelial growth factor； Ovarian cancer； Positive expression rate； Correlation

腫瘤的發生是多基因、多階段和多因素的結果，受細胞內由多種因素所控制[1]。相關文獻報道[2]：趨化因子受體CXCR4是近年備受關注的受體，其與配體SDF-1相互作用在腫瘤的轉移中發揮著一定的作用。除此之外，血管內皮生長因子（VEGF）也是一種和腫瘤血管生長相關的因素，其參與了腫瘤血管的生長過程，同時其可以促進淋巴內皮細胞趨化因子[3-4]。本研究應用免疫組化法SABC法對卵巢癌中的CXCR4和VEGF表達進行聯合檢測，分析兩者在卵巢癌轉移、侵襲的關系，為早期診斷、治療卵巢癌提供具有重要參考價值的生物學指標。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

入組對象選擇2014年2月～2015年4月之間，在我院收治的32例卵巢上皮癌患者，病理確診確診為卵巢漿液性或者黏液性囊腺癌，臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期共15例，Ⅲ～Ⅳ期共17例；有腹膜轉移共7例，無腹膜轉移共25例；有淋巴結轉移的共15例，無淋巴結轉移的共17例。其中研究另選取同期在我院收治的卵巢上皮性良性腫瘤的患者27例，同時選擇術后病理為正常的卵巢組織患者35例。

1.2 患者入組標準與排除標準

入組標準[5]：入組患者術前均未經過化療及放療等治療；患者均經病理確診。排除標準：患者伴有嚴重的精神障礙，不能配合治療。

1.3 方法

1.3.1 試劑 SP免疫組化試劑盒、兔抗人CXCR4多克隆抗體（上海常斤生物科技有限公司），VEGF兔抗人單克隆抗體（上海煊翎生物科技有限公司）。

1.3.2 研究方法 研究選用公司配置的陽性切片作為對照，應用PBS代替一抗作為陰性對照。染色過程嚴格按著試劑盒說明進行。石蠟切片脫水后應用3%的H2O2阻斷內源性過氧化氫酶活性，然后采用高溫高壓修復法抗原修理，接著向其中加入5%的BSA封閉液，降低背景染色，加入CXCR4兔抗人多克隆抗體（濃度為1∶100）和VEGF兔抗人單克隆抗體（濃度為1∶100），儲存在4℃的冰箱中，加入生物標記素的二抗，再次加入SABC后，滴加DAB溶液顯色，最后行復染，脫水，二甲苯透明和封固等步驟。

1.4 觀察指標和結果判定

觀察標準[6]：（1）觀察卵巢組織中的VEGF、CXCR4的陽性表達率；（2）觀察VEGF、CXCR4 蛋白表達與臨床特征的相關性；（3）觀察VEGF、CXCR4之間的關系[7]。

結果判定[7]：CXCR4陽性細胞表現為細胞質出現棕黃色顆粒，VEGF陽性表現為細胞質、細胞膜和血管內皮細胞的胞質出現棕黃色顆粒。按著染色強度評分：若顯示無色，評價為0分，呈現淡黃色，評價1分，呈現棕黃色，評價2分，呈現棕褐色，評價為3分；按著陽性細胞的比例劃分：陽性細胞率<5%，評價1分，6%<陽性細胞率<50%，評價為2分，51%<陽性細胞率<75%，評價為3分，陽性細胞率在75%以上，評價為4分。以上兩項結果相乘，得分0～2為陰性（-），得分3～4為弱陽性（+），得分5～8為陽性（++），得分9～12分為強陽性（+++）。

1.5 統計學方法

將結果數據錄入SPSS20.0統計學軟件，VEGF、CXCR4的蛋白在卵巢組織中的表達情況計數資料采用χ2檢驗和Fisher確切概率法檢測，以P<0.05為差異有統計學意義，VEGF、CXCR4之間的關系采用Spearman進行關聯性分析。

2 結果

2.1 卵巢組織中的VEGF、CXCR4的陽性表達率

VEGF在卵巢良性組織中的陽性表達率為51.85%，在惡性組織中的陽性表達率為100.00%，組間差別顯著（χ2=16.596，P=0.000），具有統計學意義（P<0.05）；CXCR4在卵巢良性組織中的陽性表達率為44.44%，在惡性組織中的陽性表達率為100%，組間差別顯著（χ2=19.859，P=0.000），具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 VEGF、CXCR4 蛋白表達與臨床特征的相關性

CXCR4的蛋白表達與組織類型、臨床分期無相關性（P>0.05），而和淋巴結轉移具有正相關（r=0.795，P<0.05），同時和腹膜轉移也具有正相關（r=0.746，P<0.05）；VEGF的蛋白表達與組織類型無相關性（P>0.05），但是和臨床分期、淋巴結轉移、腹膜轉移均呈現正相關（r=0.653、0.689、0.729，P<0.05）。見表2。

2.3 VEGF、CXCR4之間的相關性

應用Spearman關聯性分析，結果顯示VEGF、CXCR4蛋白表達水平之間的相關系數為4.526，提示了VEGF、CXCR4蛋白表達水平之間呈正相關（P=0.022）。

3 討論

相關資料顯示[8]，腫瘤的轉移過程是多因素參與的，腫瘤的浸潤和侵襲則是先決條件，血管的形成是給予腫瘤細胞提供物質代謝的窗口，進而促進轉移形成。VEGF屬于胚胎期在血管形成中發揮重要作用的因子，由于腫瘤所需的營養均來自血流的供應，而VEGF可以刺激血管內皮生產、分裂，并且提高了血管的通透性，使血漿蛋白外流，降解了細胞外基質，給予腫瘤細胞提供了豐富的血供[9]。CXCR4是一種G蛋白偶聯受體，其具有7個跨膜結構，參與了諸多正常和病理過程，CXCR4和SDF-1的特異性表達在其中發揮著重要作用[10]。相關研究報道[11]：在乳腺癌、非小細胞癌以及胃癌中均出現CXCR4和SDF-1的特異性蛋白表達，其參與了腫瘤的轉移過程。卵巢癌細胞和血管內皮細胞的表達均受CXCR4、SDF-1蛋白表達的影響，其可以誘發細胞和肌蛋白的假偽足形成、定向遷移等[12]。

謝頌平等[13]報道：VEGF和CXCR4在卵巢惡性腫瘤中的表達強度顯著高于卵巢良性組織（P<0.05）。其結果和本研究結果相似，結果表1顯示兩種因子在卵巢癌的陽性表達率顯著高于卵巢良性腫瘤、正常卵巢組織（P<0.05），其可以說明了CXCR4、VEGF可能促進淋巴結轉移過程，促進了腫瘤組織的新血管生成相關。，同時提示了卵巢癌的發生發展和SDF-1/CXCR4的異常表達有著密切的關系，發揮著不可缺少的生理作用，因此在臨床診斷中具有一定的意義價值。單慶蓮等[14]表示VEGF可以促進淋巴內皮細胞的增生，促進其向特定的器官發生轉移。表2可以看出CXCR4、VEGF表達水平可能和腹膜轉移、淋巴結轉移相關，提示了VEGF可以誘導趨化因子CXCR4促進淋巴內皮細胞的增生，誘導腫瘤細胞的特異性轉移路徑，在臨床診斷時可根據患者有無腹膜、淋巴結轉移來判斷CXCR4、VEGF表達水平，同時兩種因子可以作為判斷卵巢癌惡性程度、轉移及預后的相關重要指標。其結果和石結武等[15]研究結果相似。研究中顯示了VEGF、CXCR4蛋白表達水平之間呈正相關，說明了二者之間構成一條循環通路，對各自的生物學功能起到了促進作用，兩者在腫瘤的侵襲、轉移過程中有著一定的協同作用，并且二者也相互影響，對各自的深生物學有著一定的加強作用。

綜上所述，CXCR4和VEGF在卵巢癌組織中的陽性率較高，且兩者呈正相關，提示CXCR4、VEGF在卵巢癌的發生與轉移過程中發揮著重要作用。

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（收稿日期：2017-05-11）