BC-6800血細胞分析儀精密度和正確度性能驗證

吳志成，董晶，李進，肖建萍，石孝勇

(1、北京大學深圳醫院檢驗科，廣東深圳518036；2、深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司，廣東深圳518057)

BC-6800血細胞分析儀精密度和正確度性能驗證

吳志成1，董晶1，李進2，肖建萍2，石孝勇2

(1、北京大學深圳醫院檢驗科，廣東深圳518036；2、深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司，廣東深圳518057)

目的對深圳邁瑞BC-6800全自動血細胞分析儀精密度和正確度性能進行驗證。方法參照新發布WS/T 492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》行業標準，使用3個水平的BC-6D質控品在BC-6800上進行5d 5個分析批的精密度測試，驗證廠家聲明的精密度；挑選20例健康體檢患者標本分別在BC-6800上測試后再送至邁瑞標準化實驗室進行參考方法的盲測，對BC-6800的正確度進行驗證。結果BC-6800上三個水平質控品室內精密度均低于廠家宣稱值，且均低于CLIA’88指標的1/4；BC-6800與參考方法配對t檢驗顯示各參數結果均無顯著性差異（P>0.05），且室內偏倚值均在預期偏差零值的99%置信區間內。結論BC-6800全自動血細胞分析儀的精密度和正確度性能均通過廠家聲明的驗證，符合實驗室高效檢驗對精密度和正確度的要求，可用于臨床血液標本的檢測。

血細胞分析儀；精密度；正確度

為保證定量檢測項目的有效性和完整性，確保檢測結果的質量水平，由國家衛生計生委臨床檢驗中心及多家大型醫院聯合起草、由國家衛生和計劃生育委員會于2016-07-07發布了衛生行業標準WS/T 492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》，并計劃于2016-12-15正式實施[1]?，F本實驗室基于此行業標準，率先對深圳邁瑞公司生產的BC-6800全自動血液細胞分析儀進行精密度和正確度的性能驗證，檢驗其是否符合廠家的性能宣稱以及實驗室高效檢驗[2]的要求。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑深圳邁瑞BC-6800全自動血細胞分析儀、其配套試劑及質控品及校準品。

1.1.2 實驗樣本精密度性能驗證使用高中低三個水平BC-6D質控品；正確度性能驗證所用20例標本來源于本院健康體檢者，其中男女各10例，年齡21～45歲。采集靜脈血2ml，置于含乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）的BD真空采血管中。所有樣本在采血后2h內用BC-6800全自動血細胞分析儀完成血常規檢測，6h內完成WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數參考方法的檢測。

1.2 方法根據衛生行業標準WS/T 492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》進行操作。評價參數包括：白細胞計數（WBC）、紅細胞計數（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞壓積（HCT）、紅細胞平均體積（MCV）、血小板計數（PLT）。

1.2.1 精密度評價連續測定5d質控品，每天一個分析批，每批三個濃度水平，每一個濃度水平質控從冰箱取出后放置15～20min使其恢復至室溫，然后在BC-6800上重復測定3次；如果因為質量控制程序或操作問題判斷一批為失控，應剔除數據，并增加執行一個分析批。

1.2.2 正確度評價挑選20例健康體檢者的EDTA-K2抗凝靜脈全血標本，在4d時間內，每天檢測5份樣品，分別使用以下方法進行檢測，試驗設計遵從盲法原則。

1.2.2.1 邁瑞BC-6800全自動血細胞分析儀檢測取標本混勻后，嚴格按照分析儀標準操作手冊和實驗室SOP文件在儀器上進行分析，所有標本均采用手動模式進行測試；測試完畢后將樣品送至深圳邁瑞公司溯源實驗室，使用參考方法對樣品進行盲測。

1.2.2.2 邁瑞標準化實驗室參考方法檢測WBC/ RBC計數參考方法：參照ICSH 1994推薦的參考方法[3]，使用單通道、阻抗原理的半自動電子計數儀（Coulter Z2粒子計數儀）分別對WBC/RBC進行計數，通過重疊校準對結果進行了校正；PLT計數參考方法：參照ICSH2001推薦的參考方法[4]，使用CD41-FITC和CD61-FITC標記血小板，使用Bricyte E6流式細胞儀檢測PLT/RBC比值，再乘以RBC數值得到PLT計數值；HGB檢測參考方法：參照CLSI H15-A3標準[5]，使用氫化高鐵血紅蛋白法對血紅蛋白進行測量；HCT檢測參考方法：參照CLSI H7-A3標準[6]，使用微量壓積離心法測量PCV，沒有修正殘留血漿。

1.3 統計分析數據統計參照行標的要求，使用Excel 2013進行精密度和正確度數據整理和計算；使用analyse-it(v4.20)統計軟件進行正確度評價中配對t-檢驗的統計分析，并繪制Bland-Altman偏差散點圖。計量數據以均值±標準差（x±s）表示；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 精密度結果通過三個水平質控均值，計算其不同濃度水平處的標準差Sclaim值用于驗證值V的計算。精密度檢測結果顯示各參數實驗室內不精密度結果（Sl）小于其計算的驗證值（V），說明實驗室內BC-6800儀器通過廠家精密度聲明的驗證。見表1。

2.2 正確度結果將20例新鮮血樣品分別使用BC-6800及參考方法各檢測2次，計算檢測結果的平均偏差，并使用analyse-it（v4.20）統計軟件對兩組數據進行配對t檢驗分析，計算檢驗統計量t以及P值，統計結果表明BC-6800與參考方法在檢測外周血WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數時均表現為P＞0.05，故差異無統計學意義。廠家預期BC-6800與參考方法之間無明顯偏差，即按零值計算各參數廠家聲明驗證限（CI99%），結果表明各參數實驗室內偏倚值均在廠家聲明的驗證限之內，說明BC-6800檢測結果與參考方法結果一致。具體結果詳見表2。各參數Bland-Altman偏差散點圖如圖1所示。

圖1 正確度性能驗證Bland-Altman偏差散點圖

表1 精密度檢測結果

表2 正確度檢測結果

3 討論

邁瑞BC-6800全自動血液細胞分析儀是深圳邁瑞公司2011年推出的一款中高端五分類血液細胞分析儀，可單機使用也可以連接到軌道上形成流水線，極大地提升檢驗效率。該分析儀以含二次鞘流的半導體激光流式細胞術、鞘流電阻抗檢測法和核酸熒光染色等先進技術并完美融合了SF-Cube三維算法分析技術[7]，可對血液中的多種組分進行定量分析，而且同系列儀器還可對體液進行定量檢測[8]，可滿足客戶的多種需求。作為新的血細胞分析儀，在投入臨床使用前對其進行性能驗證十分必要，我們也注意到有部分醫院對BC-6800有做過較為全面的驗證或研究[9-11]，但較少有比較深入的對精密度及正確度進行驗證。

臨床檢驗定量測定項目有兩項重要的性能特征，一項是精密度，以標準差或變異系數表示；另一項是正確度，代表的是系統誤差，以偏倚表示。衛計委新發布的行業標準是制定重復性試驗和方法比對試驗或測量標準物質的試驗方案，為臨床實驗室的精密度和正確度性能驗證提供了參考依據。新的檢測系統在正式用來檢測病人樣品、發出檢驗報告前，實驗室要對系統的操作分析性能作實驗予以證實，因此當已確認的系統進入臨床實驗室時，臨床實驗室首次要做的最基礎的工作就是進行精密度和正確度的性能驗證。通過重復性試驗方案來評價隨機誤差是否滿足廠商聲明的精密度要求；通過方法比對或測量標準物質試驗方案來評價檢測系統的系統誤差，即正確度驗證[12]。

國際血液學標準化委員會（ICSH）和美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）近年來發布了很多標準或指南用于定量程序的驗證和確認[13]。關于精密度和正確度的驗證方法，分別在ICSH1994、ICSH2014中有詳細的介紹，在CLSI H26、CLSI EP15、EP05、EP09等標準/指南中也提供了可供參照的方法。本次發布的行業標準主要依據CLSI EP15-A2中精密度和正確度的評價方法[14]進行制定[15]，用于指導實驗室用戶對選定測量程序的驗證和認定。

該行業標準提供了一種精密度驗證方案，基于5d 2個以上水平樣品5個分析批的定量檢測數據，計算實驗室內精密度結果（標準差SD和/或變異系數CV%），并將其與廠家聲明的精密度進行對比驗證。本試驗數據表明BC-6800全自動血細胞分析儀上不同水平的質控品各檢測參數的室內不精密度均小于各參數廠家精密度聲明及其計算的驗證值，并且三個水平質控品的WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數的室內不精密度CV%均低于美國臨床實驗室管理法規（CLIA’88）指標的1/4，說明本實驗室的BC-6800具備良好的精密度性能。

該行業標準同時提供了兩種正確度驗證方案，第一種方法為分析具有指定值的參考物質，推薦的參考物質包括：⑴具有互換性的有證參考物質；⑵具有溯源性及互換性的正確度驗證物質，并且推薦至少選擇2個濃度水平參考物質，在3~5d時間內每批進行2次重復測定，然后計算均值和標準差。由于本實驗室缺乏定值的血細胞分析參考物質，因此參考了第二種使用患者樣品的正確度驗證方案進行正確度的性能驗證。行標中提到“使用患者樣品的正確度驗證方案中比較方法首選是參考方法”，因此本實驗室聯合深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司的標準化實驗室，該實驗室于2009年6月獲得中國合格評定國家認可委員會CNAS認可（CNAS L4090），符合ISO/IEC 17025：2005檢測和校準實驗室能力通用要求（CNAS-CL01《檢測和校準實驗室能力的認可準則》）的要求，具備承擔認可證書所列的校準服務能力。由其對選定的新鮮血樣品中的WBC，RBC，HGB，HCT，PLT參數進行參考方法定值。WBC/ RBC分別由Z2粒子計數儀法進行定值；HGB由氰化高鐵血紅蛋白法進行定值；HCT由微量壓積離心法進行定值；PLT則由流式細胞儀法進行定值[10]。此方法得到的是真正的“偏倚”，代表了深圳邁瑞BC-6800全自動血細胞分析儀真正的系統誤差，本試驗數據說明BC-6800與參考方法之間具有良好的一致性。

綜上所述，BC-6800全自動血細胞分析儀精密度和正確度均通過廠家聲明的驗證，可以用來檢測臨床血液標本并發報告。此外，行標中要求在進行患者樣品的正確度驗證時，其濃度水平應覆蓋檢測方法的可報告范圍，但是考慮到實際操作的可行性以及參考方法檢測的限制，如高值WBC或高值PLT會干擾HGB檢測等問題，本次試驗主要以健康體檢患者標本進行正確度性能驗證，而對于異常計數值樣本的檢測還有待進一步的探討。

[1]中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會.中華人民共和國衛生行業標準WS/T 492-2016臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證[S].（2016-7-7）[2016.12.15].

[2]馮仁豐.高效檢驗對精密度的要求[J].上海醫學檢驗雜志，2000，15(5)：270-272.

[3]Peng L，Wang W，Bai L.Performance evaluation of the Z2 coulter counter for WBC and RBC counting[J].Int J Lab Hematol，2007，29，361-368.

[4]International Council for Standardization in Haematology Expert Panel on Cytometry，International Society of Laboratory Hematology Task Force on Platelet Counting.Platelet counting by the RBC/ platelet ratio method：a reference method[J].Am J Clin Pathol 2001，115(3)：460-464.

[5]CLSI H15-A3：Reference and selected procedures for the quantitative determination of hemoglobin in blood.Approved standardthird edition[S].2000.

[6]CLSI H07-A3：Procedure for determining packed cell volume by the microhematocrit method.Approved standard-third edition[S]. 2000.

[7]李朝陽.熒光標識檢測精準立現：BC6800試劑平臺暨SF Cube解析[J].世界醫療器械，2011，17(10)：52-60.

[8]壽爽，譚煥騰，金曉娟，等.邁瑞BC-6900全自動血細胞分析儀在臨床體液細胞檢測中的應用[J].實驗與檢驗醫學，2015，33（6）：751-753.

[9]吳衛，解宏杰，王庚，等.BC-6800全自動血細胞分析儀臨床性能評價[J].中國衛生檢驗雜志，2014，24（11）：1596-1599，1603.

[10]孫克.BC-6800血細胞分析儀性能評價[J].國際檢驗醫學雜志，2013，34（12）：1579-1581.

[11]劉紅偉，林金端，鐘國權，等.清遠市區12396例體檢職工紅細胞參數水平研究[J].實驗與檢驗醫學，2015，33（6）：789-791.

[12]馮仁豐主編.臨床檢驗質量管理技術基礎[M].第2版.上海：上?？茖W技術文獻出版社，2003：104-105.

[13]Verbrugge SE，Huisman A.Verification and standardization of blood cell counters for routine clinical laboratory tests[J].Clin Lab Med，2015，35(1)：183-196.

[14]CLSI EP15-A2：User Verification of Performance for Precision and Trueness；Approved Guideline-Second Edition[S].2005.

[15]王薇，王治國，李少男.臨床實驗室對廠家聲明的精密度和正確度的性能驗證要求[J].檢驗醫學，2010，25（12）：1001-1005.

R446.11+1

A

1674-1129(2017)04-0504-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.016

2016-12-27；

2017-06-01)