對我院血細胞分析儀復片規則驗證的探討

徐從瓊，朱麗萍，李慶

(昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科，云南昆明650032)

對我院血細胞分析儀復片規則驗證的探討

徐從瓊，朱麗萍，李慶

(昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科，云南昆明650032)

目的采用Sysmex XE-2100全自動血液分析儀對本院的18條復檢規則進行驗證，從而提高檢驗質量及工作效率。方法選取門診和住院包含了體檢、血液科、腫瘤科、產科、新生兒科、呼吸內科等共500份樣本經Sysmex XE-2100全自動血液分析儀分析后立即由推片機進行推片和染色，新生兒科標本可手工推片染色。結果儀器假陰性率為1.59%，真陰性率為80.09%，真陽性率為70.45%，假陽性率為19.91%，推片率為29.8%，白血病漏檢率為0%。本次復檢的假陰性率為1. 59%，達到“＜5%假陰性率”的行業要求。結論臨床實驗室按規定定時為本醫院制定的復片規則進行驗證，不僅可降低假陽性率而且進一步提高了工作效率。

血細胞分析儀；復片規則；顯微鏡鏡檢

血細胞分析是診斷和輔助診斷白血病、貧血、血小板減少、遺傳性疾病、血液寄生蟲以及了解疾病的進展及感染程度的一項實驗室項目[1]。隨著血細胞自動分析儀的普及和不斷改進，大大提高了臨床檢查的效率[2]。但是由于儀器的局限性和某些病理變化等干擾因素影響了血細胞分析準確性，使得某些情況必須由人工鏡檢來完成[3]。因此，各臨床實驗室有必要根據自己所用儀器的特點及本室的實際情況制定出適合本院的血細胞復檢和顯微鏡復片規則。通過對本科室已建立的復片規則進行驗證，從而進一步完善本科室的復檢規則。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑日本Sysmex XE-2100全自動血液分析儀及配套質控品和配套試劑；SP-1000i自動血液學載片制備裝置，瑞氏-姬姆薩染液為珠海貝索生物技術有限公司提供，奧林巴斯顯微鏡(用于血細胞顯微鏡分析)。儀器設備操作按照標準操作規程進行[4]。

1.2 標本收集選取昆明醫科大學第一附屬醫院臨床血液室2d(2016年8月29日至30日)門診和住院樣本，其中血液內科樣本65例，腫瘤科與移植科樣本30例，外科樣本20例，新生兒科樣本11例，兒科樣本15例，產科樣本35例，呼吸內科22例，體檢樣本302例共500份樣本經Sysmex XE-2100全自動血液分析儀分析后立即由推片機進行推片和染色，新生兒科標本可依照《全國臨床檢驗操作規程》進行手工推片染色[5]。

1.3 方法所選500份樣本覆蓋了白細胞、紅細胞及血小板方面的異常及直方圖、散點圖異常。由SP-1000i推片機自動推片染色烘干后由2名經驗豐富的血液檢驗技術人員進行顯微鏡觀察，每份樣本推2份片，每份片分200個細胞，記錄結果。

1.4 涂片陽性判斷標準對于血細胞形態結果，只要有一名人員發現陽性，經具有較高職稱和經驗豐富的人員確認后即判斷為陽性[6]。鏡檢結果符合以下13條中任何一條即為陽性。⑴紅細胞明顯大小不等（體積相差1倍以上)中空淡染>1/2，淡染區的紅細胞多于30%；⑵巨大血小板多于15%；⑶見到血小板凝聚；⑷Dohle小體的粒細胞>10%；⑸中毒顆粒中性粒細胞>10%；⑹空泡變性粒細胞> 10%；⑺原始和幼稚細胞≥1%；⑻早幼粒細胞和中幼粒細胞≥1%；⑼晚幼粒細胞≥2%；⑽異型淋巴細胞>5%；⑾NRBC≥1%；⑿漿細胞≥1%；⒀發現瘧原蟲。

2 結果

儀器假陰性率為1.59%，真陰性率為80.09%，真陽性率為70.45%，假陽性率為19.91%，推片率為29.8%，白血病漏檢率為0%。本次復檢的假陰性率為1.59%，達到“＜5%假陰性率”的行業要求。為了進一步提高復片組的工作效率和質量，建議可以從以下幾個方面進行下一步改進：假陰性樣本為紅細胞形態異常。與紅細胞形態有關的規則有“RDW＞22%或無結果”、“NRBC flag”、“雙峰紅細胞或多峰紅細胞”、“MCV＞120fl或＜60fl”等四條，因假陽性率在可接受范圍，可暫為觀察。復片樣本報警信息總數統計見表1。

表1 復片樣本報警信息總數統計

樣本報警信息突出的是Lymph%，在19次報警信息中有15次為Lymph%單項報警，有4次報警為兒童樣本，故復片組根據第三次復片規則驗證的結論，對復檢規則進行修改，將“Lym%首次結果＞50%”修改為“WBC＞10×109/L且Lym%首次結果＞50%”。

“No diff or incomplete diff”報警9次，其中有3次樣本結果為空值，經檢查均為樣本量少所致，經手動進樣復檢后結果為正常結果。而復檢規則要求“白細胞分類無結果或結果不全”時須涂片鏡檢并分類，沒有考慮到儀器因樣本量不夠上機出現報警的情況，而使用同一編號重新復檢“No diff or incomplete diff”時報警信息亦會出現，因此，此條“白細胞分類無結果或結果不全”的處理應改為：⑴排除儀器故障及樣本不合格。⑵如樣本量少（主要針對兒科和新生兒科）重新編號復檢時，應該同時刪除儀器及LIS所有信息后重測。⑶如樣本凝集或有凝塊，退回并通知重新采血復查。

3 討論

3.1 根據日常工作和此次復片規則驗證結果在18條復片規則基礎上進行適當修改，將第11條Lym%首次結果＞50%”修改為“WBC＞10×109/L且Lym%首次結果＞50%”，理由是此條復片規則假陽性率太高，修改后不僅降低假陽性率而且進一步提高了工作效率。

3.2 原有規則“新生兒首次樣本涂片鏡檢”對儀器是盲點，無操作性，新生兒樣本除（Lymph%）同樣適用復檢規則。

3.3 雖然“NRBC flag”、“WBC unreliability flag”、“Atypical/Variant lymphs(-)”在假陽性率也占到一定比例，但是這些原則性規則，不能修改。

3.3.1 我院有核紅細胞報警主要來自兒科、血液科及腎內科等幾個科室，多為真陽性，原因是正常新生兒或幼兒血液中存在有核紅細胞，成人體內出現有核紅細胞則多數與溶血性貧血、急慢性白血病及感染等疾病有關[7]。

3.3.2 通過在日常工作中和對復片規則的驗證中發現儀器對單核細胞和異型淋巴細胞不容易區別[8]。在形成的二維散點圖上，異型淋巴細胞位于正常淋巴細胞上方，形成一個向上的拖尾形狀，由于異型淋巴細胞的體積、顆粒及染色質與大淋巴細胞及單核細胞近似，儀器在鑒別此類細胞形態上存在困難，導致異型淋巴的報警敏感勝高，而特異性低。而提示異淋報警主要是OTHER值及異淋Q-Flags報警[9]。在各種患兒發熱疾病中，異型淋巴細胞增高是病毒感染的經典標志。血細胞分析儀對異型淋巴細胞形態學識別能力差，只對異型淋巴細胞有提示，分類顯示單核細胞比例增高[3]，因此當儀器報警Atypical/Variant lymphs(-)或MO＞15%時一定要顯微鏡復檢，觀察有無異型淋巴細胞的存在及比例，對臨床醫生初步判斷患兒為病毒感染或細菌感染提供重要依據[2]。

3.3.3 兒科、婦科、WBC受其影響會顯著降低，常使用刺激造血系統的藥物會造成未成熟顆粒水平明顯上升；兒科患者使用激素較多，產科婦女在孕早期造血活躍，導致儀器報警“Immature granulocyte flag”占有一定比例[10]。

3.4 腫瘤患者治療時經常檢查WBC數、PLT數，來調整用藥劑量或考慮是否停藥。由于化療藥物對細胞膜有影響，易造成直方圖異常，報警提示增多，使復檢率增高，增加了檢驗人員工作量；為了降低復檢率，除醫生要求涂片鏡檢外可不復檢[3]。

3.5 大部分血細胞分析儀血小板計數通常為電阻抗原理，依據細胞體積大小形成脈沖，從而得到計數結果，其干擾因素較多，小紅細胞、紅細胞碎片等體積相當的成分都可能對血小板計數形成干擾，造成計數偏高[11]。對于以大血小板為主和血小板聚集的患者，會導致血小板儀器計數偏低。

綜上所述，儀器只能作為一個篩選的手段，必要時仍需人工顯微鏡檢查，加之復片規則的輔助最終才能為臨床提供更準確的報告。在血涂片復檢規則的臨床應用過程中，注意收集、整理發現問題，及時對復檢規則進行修改和完善，總結出更有效的血細胞分析儀血涂片復檢規則，以提高血細胞分析質量和工作效率[12]。

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R446.11+1

A

1674-1129(2017)04-0508-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.017

2016-12-06；

2017-06-20)

朱麗萍