枳椇子對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細胞產(chǎn)生細胞因子表達的影響

姚侃男 馮彩珠 朱肖鴻

1 浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 浙江 杭州 310053 2 浙江省中醫(yī)院 浙江 杭州 310018

中藥研究

枳椇子對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細胞產(chǎn)生細胞因子表達的影響

姚侃男1馮彩珠1朱肖鴻2#

1 浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 浙江 杭州 310053 2 浙江省中醫(yī)院 浙江 杭州 310018

枳椇子 RAW264.7巨噬細胞 脂多糖 TLR4

實驗組在先期研究中已得到枳椇子可以減輕酒精灌胃大鼠炎癥及脂肪變[1]。本文在先期研究基礎(chǔ)上，探索枳椇子對LPS作用于RAW264.7巨噬細胞所產(chǎn)生的細胞因子的影響及其相關(guān)機制，明確枳椇子對腸源性內(nèi)毒素血癥的保護作用。

1 材料

1.1 藥品與試劑：枳椇子顆粒劑購自江陰天江藥業(yè)有限公司；LPS購自Sigma公司；RAW264.7；30%丙烯酰胺（29:1）、RIPA組織細胞快速裂解液、過硫酸銨、SDS、Tris購自Solarbio公司；BCA蛋白定量試劑盒、SYBR Green PCR試劑盒購自Thermo公司；蛋白預(yù)染Marker、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Fermentas公司；Rabbit anti TLR4 Polyclonal antibody（96kD）、Rabbit anti p65（65kD）購自Proteintech公司；p-p65（65kD）購自Aff inity公司；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase GAPDH）（37kD）購自CST公司；羊抗兔HRP標記二抗、驢抗山羊HRP標記二抗、羊抗鼠HRP標記二抗購自碧云天公司；NC膜、發(fā)光液購自Mi l lipore公司；PBS磷酸鹽緩沖液購自上海長島抗體診斷試劑公司；脫脂奶粉購自BD分裝公司；Tween-20購自Amresco公司；Trizol購自Invit rogen公司；DEPC處理水購自基爾頓生物；異丙醇、無水乙醇、氯仿購自國藥集團。

1.2 主要儀器：TG-16M型低溫冷凍離心機購自上海盧湘離心機儀器有限公司；K30型渦旋振蕩器購自青浦瀘西儀器廠；ABI-7300型Real-time檢測儀購自ABI公司；PRO200型電動勻漿儀購自FLUKO公司；mini protean 3 cel l型電泳儀購自BIO-RAD公司；PS-9型電轉(zhuǎn)儀購自大連競邁科技有限公司；MK3型酶標儀購自芬蘭雷勃酶標儀；P型移液器購自吉爾森公司；……