光核桃仁油對實驗鼠與兔的急性毒性實驗

孫位軍++++++周熙++++++王張++++++張靜++++++甘大莉++++++梁源++++++范剛++++++尹鴻翔

[摘要] 目的 研究光核桃仁油對小鼠、大鼠和兔的急性毒性。 方法 KM種小鼠40只，雌雄各半，分為空白對照組和光核桃仁油組各20只，在24 h內分別連續灌胃3次生理鹽水和光核桃仁油，最大給予劑量為289.224 g生藥/（kg·d）。SD大鼠40只，雌雄各半，分為空白對照組和光核桃仁油組各20只，在24 h內分別連續灌胃3次生理鹽水和光核桃仁油，最大給予劑量為144.612 g生藥/（kg·d）。新西蘭兔16只，雌雄各半，分為空白對照組和光核桃仁油組各8只，在24 h內分別連續涂抹皮膚3次生理鹽水和光核桃仁油，最大給予劑量為482.28 mg生藥/（cm2·d）。分別觀察動物在14 d內所產生的毒性反應（死亡、中毒癥狀）及其嚴重程度、恢復情況、延遲反應等。 結果 未見動物死亡、中毒癥狀和肉眼可見的臟器異常。與空白對照組比較，大鼠和小鼠在灌胃1～3 d后出現大便溏稀，毛發油漬，但4 d后恢復正常。與空白對照組比較，在給藥第7天雄性小鼠體重明顯增高（P < 0.01），而雄性大鼠體重明顯降低（P < 0.01）；兔皮膚涂抹光核桃仁油第2天，雌兔體重明顯下降（P < 0.05）。與空白對照組比較，光核桃仁油組在給藥后第1天小鼠飼料消耗量降低（P < 0.01）。與空白對照組比較，小鼠平均血紅蛋白濃度出現異常（P < 0.05），但血液生化指標無明顯變化；大鼠部分血常規指標[紅細胞寬度變異系數、血小板數和血小板比積（P < 0.05）以及中間細胞百分比（P < 0.01）]和血液生化指標[白蛋白、總蛋白、球蛋白、膽固醇、尿素氮、總紅膽素和三酰甘油（P < 0.05）以及肌酐（P < 0.01）]出現異常；兔部分血常規指標[血小板數、粒細胞絕對值、血小板比積、中間細胞百分比、血小板分布寬度、淋巴細胞百分比和粒細胞百分比（P < 0.05）]和血液生化指標[谷草轉氨酶和肌酐（P < 0.05）]出現異常。 結論 大鼠和小鼠經口給予光核桃仁油的最大給藥量分別為144.612 g生藥/（kg·d）和289.224 g生藥/（kg·d），兔經皮膚給予光核桃仁油的最大給藥量為482.28 mg生藥/（cm2·d），安全性良好，但在臨床應用時應監測血常規和血液生化學指標。

[關鍵詞] 光核桃仁油；最大給藥量；急性毒性；大鼠；小鼠；兔

[中圖分類號] R28 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）07（c）-0018-07

[Abstract] Objective To study the acute toxicity of Prunus mira oil used in mice， rats and rabbits. Methods 40 KM mice which were half male and half female were divided into blank control group and Prumus mira oil group， each group had 20 mice. Within 24 hours， the mice were given normal saline and Prumus mira oil with one maximum dosage amounting to 289.224 g dried medicinal herbs/（kg·d） in a total of 3 times through mouth. 40 SD rats which were half male and half female were divided into blank control group and Prumus mira oil group， each group had 20 mice. Within 24 hours， the rats were also given normal saline and Prumus mira oil with one maximum dosage of 144.612 g dried medicinal herbs/（kg·d） in a total of 3 times in the same way. 16 New Zealand rabbits which were half male and half female were divided into blank control group and Prumus mira oil group， each group had 8 rabbits. Within 24 hours， the rabbits were given normal saline and Prumus mira oil with one maximum amount of 482.28 mg dried medicinal herbs/（cm2·d） 3 times through skin. And the toxic effects （death， poisoning symptoms） and the severity and recovery， as well as delayed reaction shown on these three animals were carefully observed within 14 days. Results There was no death， poisoning symptoms and organ abnormality visible to the naked eye. Compared with the blank control group， the mice and rats produce loose stool and oily hair after being given medicine within 1-3 d， but return to normal in 4 d. Compared with the blank control group， weights were significantly increased in the male mice （P < 0.01）， but significantly decreased in the male rats （P < 0.01） after taking Prunus mira oil of 7 d （P < 0.01）， and the weights of female rabbits decreased significantly after taking Prunus mira oil of 2 d through skin （P < 0.05）. Compared with the blank control group， the feed consumption of mice in the Prumus mira oil group were decreased after 1 d medication （P < 0.01）. Compared with the blank control group， the average hemoglobin concentration of mice in the Prumus mira oil group were abnormal （P < 0.05）， but their blood biochemical indexes showed no obvious change. Some blood indexes [RDW-CV， PLT， PCT （P < 0.05） as well as Mid% （P < 0.01）] and blood biochemical indexes [ALB， TP， GLO， CHOL， BUN， T-Bil and TG （P < 0.05） as well as CREA （P < 0.01）] showed abnormalities in rats of the Prumus mira oil group. Certain blood indexes [PLT， GR#， PCT， Mid%， PDW， LY% and GR% （P < 0.05）] and blood biochemical indexes [AST and CREA （P < 0.05）] showed abnormalities in rabbits of the Prumus mira oil group. Conclusion Maximum dosage given to the mice and rats through mouth are respectively 289.224 g dried medicinal herbs/（kg·d） and 144.612 g dried medicinal herbs/（kg·d）， while the maximum dosage given to the rabbits through skin is 482.28 mg dried medicinal herbs/（cm2·d）. There is no security problem， but the blood routine and blood biochemistry indexes should be monitored during clinical application.

[Key words] Prunus mira oil； Maximum dose； Acute toxicity； Rat； Mice； Rabbit

光核桃（Prunus mira Koehne），又名康布、毛桃、藏桃，分布于西藏、四川和云南等地[1]且潛藏巨大的經濟價值[2]。光核桃仁曾被《四川省中藥材標準》收載，有活血祛瘀、潤腸通便功效[3]，藏醫《晶珠本草》[4]和《藏藥志》[5]記載：種子榨取油涂擦治黃水病，頭發、眉毛、胡子等脫落癥。光核桃仁中不飽和脂肪酸的含量極高[6-8]。光核桃仁水煎液有抗炎作用，小鼠LD50為（42.81±0.02）g/kg，為臨床常用量（0.18 g/kg）的238倍；大鼠長毒試驗結果未見異常[9]。但是光核桃仁油的急性毒性未見報道。遵照《中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則》[10]，本研究開展光核桃仁油的急性毒性研究，旨在為后續光核桃仁油的長期毒性和藥理研究提供安全劑量參考值。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

光核桃的干燥種子，采集于四川省甘孜州得榮縣，由成都中醫藥大學賈敏如教授鑒定為薔薇科光核桃（Prunus mira Koehne）。

1.2 實驗動物

KM小鼠和SD大鼠，雌雄各半，均為40只，4周齡小鼠體重為18～22 g，6～8周齡大鼠體重為180～220 g，均為封閉群、SPF級，小鼠和大鼠的實驗動物質量合格證號分別為51203500000978和512035000 00945，均由成都達碩生物科技有限公司提供。新西蘭兔，雌雄各半，16只，體重為1.8～2.0 kg，8～10周齡，封閉群，普通級，由四川省實驗動物專委會養殖場提供，實驗動物質量合格證號：0015884。動物實驗設施由成都中醫藥大學提供，實驗動物使用許可證號：SYXK（川）2014-124。

1.3 試劑

測試血常規和血液生化指標的試劑盒，均來自上海特康科技有限公司，見表1。

1.4 儀器

全自動三分群血液分析儀（型號TEK-Ⅱ MINI）和全自動生化分析儀（型號TC6010L）均由上海特康科技有限公司生產。

1.5 實驗方法

1.5.1 光核桃仁油榨取 用德力生榨油機榨取（40℃）光核桃仁油，經濾網粗過濾后為橙黃半透明油狀液體，低溫保存，即為最大濃度的光核桃仁油供試品（2.4102 g藥材/mL）。

1.5.2 急性毒性試驗 參考文獻[11-14]和預實驗，以最大給藥量法開展急性毒性實驗。取小鼠和大鼠各40只，按體重分層后再按隨機數字表法分為空白對照組和光核桃仁油組，每組各20只，雌雄各半，給藥前禁食不禁水12 h。空白對照組灌胃生理鹽水，光核桃仁油組灌胃光核桃仁油，大鼠和小鼠給藥體積分別為20 mL/kg和40 mL/kg，間隔4～6 h，連續灌胃3次。觀察14 d，記錄中毒癥狀、死亡情況、體重變化及進食情況。第14天將動物麻醉（ip，水合氯醛），大鼠經腹主動脈取血5 mL，分置兩管，其中一管做抗凝處理，用于測試血常規指標；另一管自然凝固后分離出血清，用于測試血液生化學指標。20只小鼠，兩組各10只（雌雄各半），眼球采血做抗凝處理；其余20只小鼠，兩組各10只（雌雄各半），分離血清。

取兔16只，雌雄各半，按體重分層后再按隨機數字表法分為空白對照組和光核桃仁油組，每組各8只，雌雄各4只，剃毛約為15 cm×10 cm[15-16]。空白對照組涂抹生理鹽水，光核桃仁油組涂抹光核桃仁油，給藥體積為每次666.67 mL/m2，連續涂抹3次，間隔至少6～7 h。觀察和測試指標同大鼠。

1.6 統計學方法

運用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般狀況和尸檢結果

灌胃光核桃仁油30 min內，鼠均出現精神萎靡、行動遲緩，隨后迅速恢復正常，觀察期內無動物死亡。第1～3天大便溏稀，毛發油漬，但第4天后恢復正常。第14天解剖所有動物，內部臟器[17]未見肉眼可見異常。

首次涂抹光核桃仁油后，兔無死亡和中毒反應，外觀體征無異常，皮膚無刺激性表現。第14天解剖所有兔，內部臟器未見肉眼可見異常。

2.2 體重及飼料消耗量

2.2.1 小鼠 由表2可見，與空白對照組同性別動物比較，小鼠服用光核桃仁油7 d后，雄性小鼠體重明顯增加。由表3可見，與空白對照組比較，光核桃仁油組在給藥后第1天小鼠飼料消耗量降低（P < 0.01），但在第7天后，小鼠飼料消耗量又逐漸增高。

2.2.2 大鼠 由表4可見，與空白對照組同性別動物比較，雌性大鼠服用光核桃仁油1 d后，雌性大鼠體重增加，雄性大鼠體重降低（P < 0.01）；在給藥后第7天雄性大鼠體重明顯降低（P < 0.01）。由表5可見，與空白對照組比較，光核桃仁油組大鼠飼料消耗量無明顯變化（P > 0.05）。

2.2.3 兔 由表6可見，與空白對照組同性別動物比較，雌兔皮膚涂抹光核桃仁油第2天體重明顯下降（P < 0.05）；而雄兔體重無明顯變化。由表7可見，與空白對照組比較，光核桃仁油組兔的飼料消耗無明顯變化（P > 0.05）。

2.3 血常規

2.3.1 小鼠 由表8可見，與空白對照組比較，光核桃仁油組雌雄小鼠的平均血紅蛋白濃度均增加（P < 0.05），其他指標均無明顯變化（P > 0.05）。

2.3.2 大鼠 由表9可見，與空白對照組比較，光核桃仁油組雄性大鼠的紅細胞寬度變異系數減少（P < 0.05），中間細胞百分比明顯減少（P < 0.01）；雌性大鼠的血小板數和血小板比積含量增加（P < 0.05）；其他指標均無明顯變化（P > 0.05）。

2.3.3 兔 由表10可見，與空白對照組比較，光核桃仁油組雌兔的血小板數、粒細胞絕對值和血小板比積均增加（P < 0.05），中間細胞百分比和血小板分布寬度減少（P < 0.05）；雄兔的淋巴細胞百分比減少（P < 0.05），粒細胞百分比增加（P < 0.05）；其他指標均無明顯變化（P > 0.05）。

2.4 血液生化指標

2.4.1 小鼠 由表11可見，與空白對照組比較，光核桃仁油組小鼠的血液生化指標均無明顯變化（P > 0.05）。

2.4.2 大鼠 由表12可見，與空白對照組比較，光核桃仁油組雄性大鼠的白蛋白含量增加（P < 0.05）；雌性大鼠的總蛋白、白蛋白、球蛋白、膽固醇、尿素氮和肌酐的含量減少（P < 0.05或P < 0.01），但總膽紅素和三酰甘油的含量增加（P < 0.05）；其他指標均無明顯變化（P > 0.05）。

2.4.3 兔 由表13可見，與空白對照組比較，光核桃仁油組雌兔的谷草轉氨酶活性增強（P < 0.05），肌酐減少（P < 0.05），其他指標均無明顯變化（P > 0.05）。

3 討論

大鼠灌胃給予光核桃仁油的最大劑量為144.612 g生藥/（kg·d），小鼠為289.224 g生藥/（kg·d）。光核桃仁油的成人日用劑量為5 g[18]，即5 g/60 kg，故上述給藥劑量分別為成人日用劑量的1735.344倍和3470.688倍。兔皮膚給予的最大劑量為482.28 mg/（cm2·d）。

光核桃仁毒性主要是苦杏仁苷在體內分解出較多的氫氰酸[19]。苦杏仁苷的另一個水解產物為苯甲醛[20]，具有良好的抑菌和抗癌作用，也作食品添加劑使用[10]，可降低光核桃仁油的毒性。本文發現光核桃仁油對實驗鼠與兔的毒性較低，推測可能與光核桃仁油中氫氰酸和苯甲醛的比例有一定的關系，有待進一步研究。

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