杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的提取工藝研究

李小鋒 杜劍松 康興東（江西普正制藥有限公司吉安331409）

●中西藥苑●

杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的提取工藝研究

李小鋒 杜劍松 康興東
（江西普正制藥有限公司吉安331409）

目的：確定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的最佳提取工藝，為全杜仲膠囊的生產工藝優化提供參考依據。方法：采用正交試驗法，以松脂醇二葡萄糖苷的提取率為評價指標，篩選杜仲的最佳提取工藝。結果：正交試驗結果顯示，提取次數對松脂醇二葡萄糖苷的提取率有明顯的影響，結合大生產工藝的實際情況，最終確定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的最佳提取工藝為6倍量水、提取2次、提取時間2 h/次。結論：本提取工藝研究結果為全杜仲膠囊的生產工藝優化提供了試驗參考依據。

杜仲；松脂醇二葡萄糖苷；提取工藝；正交試驗

杜仲為杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹皮[1]，是常用的滋補藥材，在《神農本草經》中被列為上品，具有補肝腎、強筋骨、安胎、降壓的功效。全杜仲膠囊是杜仲的單方制劑，具有補肝腎、強筋骨、降血壓的功效，用于腎虛腰痛、腰膝無力；高血壓見上述癥狀者。藥典中記載的其提取工藝是先用85%乙醇加熱回流提取2 h，藥渣再加水煎煮2次，2 h/次[1]。現代研究結果顯示，杜仲中的木脂素類化合物是其主要有效成分之一，是杜仲降壓的主要組分[2]。松脂醇二葡萄糖苷是杜仲中含量最豐富的木脂素類化合物之一，也是《中國藥典》控制全杜仲膠囊及杜仲藥材質量的指標性成分。本研究以松脂醇二葡萄糖苷的提取率為評價指標，對杜仲的提取工藝進行了探討性研究，為全杜仲膠囊的生產工藝優化提供了參考依據。先報告如下：

1 材料與儀器

1.1 藥材杜仲藥材購于江西樟樹，由江西普正制藥有限公司吳永忠副研究員鑒定為杜仲。破碎成小段后作為實驗用樣品。

1.2 儀器高效液相色譜儀：Waters2695型高效液相色譜儀；色譜柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm×5μm）（美國Waters公司）；JK-100型超聲波清洗器（合肥金尼克機械制造有限公司）；SHB-ⅢS型循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；E-5203A型旋轉蒸發儀（上海振捷實驗設備有限公司）；HHS-24型電熱恒溫水浴鍋（上海東星建材實驗設備有限公司）；SZ-93自動雙重純水蒸餾器（上海雅榮生化設備儀器有限公司）。

1.3 試劑及試藥松脂醇二葡萄糖苷對照品（中國藥品生物制品檢定研究院，批號111537-201204，純度90.6%），乙腈、甲醇為色譜純，水為雙重蒸餾水，其余試劑為分析純。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件色譜柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm×5μm）（美國Waters公司）；流動相：乙腈-水（13∶87）；檢測波長：277 nm。理論板數按松脂醇二葡萄糖苷峰計算應不低于1 000。分別取對照品及樣品溶液10μl進樣，通過外標法計算松脂醇二葡萄糖苷的含量。

1.4.2 對照溶液的制備精密稱取松脂醇二葡萄糖苷5.30 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇適量使之溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為106.0μg/ml的對照品溶液。

1.4.3 提取溶劑的選擇取杜仲4份，每份各30 g。按照設計方案進行試驗，分別測定提取液中松脂醇二葡萄糖苷的轉移率。提取方案設計見表1。

表1 提取溶劑的選擇試驗設計表

1.4.4 杜仲提取工藝正交設計試驗分別取杜仲藥材30 g，共9份，按L9（34）正交設計表進行9組試驗，提取液合并定容至2 000 ml，得供試品溶液1～9，分別測定溶液中松脂醇二葡萄糖苷的含量，計算松脂醇二葡萄糖苷的提取率。正交試驗的因素水平參數見表2。

表2 杜仲水提正交試驗因素水平表

2 結果

2.1 提取溶劑的選擇試驗結果結果表明“6倍水，提2次，2 h/次”的提取率最高，85%乙醇提取2次的提取率最低。這說明以水為溶劑對松脂醇二葡萄糖苷的提取效果最好。見表3。

表3 杜仲提取溶劑選擇實驗結果

2.2 杜仲提取工藝正交設計試驗結果由松脂醇二葡萄糖苷提取率結果可知，3個因素對松脂醇二葡萄糖苷提取率影響的大小為：提取次數＞提取時間＞加水倍數，主要影響因素為提取次數，且方差分析有顯著性差異；而第3次的提取率小于10%，考慮到成本等因素，最終選擇提取2次；直觀分析結果表明，加8倍量水提取率最高，但與加6倍量水、10倍量水提取率相差不大，考慮到生產成本，最終選擇加6倍量水。結果還表明，提取2 h的提取率最高，故最終確定提取時間為2 h；最終確定的最佳提取工藝為6倍水，提取2次，2 h/次。見表4。

表4 杜仲提取工藝正交設計試驗結果

3 討論

松脂醇二葡萄糖苷是杜仲的主要活性成分，全杜仲膠囊以松脂醇二葡萄糖苷作為質量控制的指標性成分[1]，因此本研究以松脂醇二葡萄糖苷作為指標性成分對提取工藝進行評價是可行的。杜仲提取溶劑選擇實驗結果顯示，用水作為提取溶劑比用乙醇溶液提取效果更好。杜仲中的木脂素類成分在乙醇中的溶解性較在水中好，根據相似相溶的原理，用乙醇溶液進行提取，提取率應更高，但本研究結果顯示水提的效果更好，這可能與杜仲中含有大量的杜仲膠成分有關。

相關文獻報道中，多以超聲提取、微波提取為主，提取溶劑多采用不同濃度的乙醇來提取[3～6]。而本研究基于全杜仲膠囊現有的提取工藝，結合大生產工藝的實際要求，經過溶劑選擇實驗和正交試驗，最終確定杜仲的最佳提取工藝為“加6倍水，提取2次，2 h/次”，這為全杜仲膠囊的生產工藝優化提供了試驗參考依據。

[1]國家藥典委員會.中國藥典2015年版:一部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2015.165,862

[2]吳衛華.杜仲抗高血壓有效部位的制備及降壓效應研究[D].廣州:中南大學,2007

[3]潘亞磊,郭玲麗,謝培,等.杜仲松脂醇二葡萄糖苷的提取工藝優化[J].化學與生物工程,2016,33(2):42-45

[4]呂強.杜仲總木脂素及松脂醇二葡萄糖苷的提取純化研究[D].吉首:吉首大學,2013

[5]鄭雪,劉澤緯,丁來欣,等.杜仲葉中松脂醇二葡萄糖苷的提取分離及含量測定[J].食品科學,2012,33(6):166-170

[6]孫曦曉.從杜仲皮中制備松脂醇二葡萄糖苷及多糖工藝的研究[D].哈爾濱:東北林業大學,2014.8-14

R284.2

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10.13638/j.issn.1671-4040.2017.08.102

2017-06-21）