TNF-α/ActD協同內質網應激通過調控糖原合成酶激酶3β促進肝細胞凋亡

時紅波， 時紅林， 張向穎， 陳德喜， 段鐘平， 任 鋒

首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院 北京市肝病研究所，北京 100069

TNF-α/ActD協同內質網應激通過調控糖原合成酶激酶3β促進肝細胞凋亡

時紅波， 時紅林， 張向穎， 陳德喜， 段鐘平， 任 鋒

首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院 北京市肝病研究所，北京 100069

目的研究腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor α, TNF-α)和放線菌素D(Actinomycin D, ActD)與內質網應激(endoplasmic reticulum stress, ERS)誘導肝細胞凋亡的相互作用及分子機制。方法分離小鼠原代肝細胞，應用TNF-α和ActD聯合誘導的肝細胞凋亡，分別給予ERS激活劑(Tunicamycin, TM)和抑制劑(4-phenylbutyrate, 4-PBA)，檢測細胞上清中分泌的乳酸脫氫酶(LDH)和細胞中caspase-3的表達；在TNF-α/ActD誘導凋亡的基礎上，加入4-PBA抑制ERS，檢測ERS相關蛋白和糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)的表達情況。最后在TNF-α/ActD誘導凋亡和TM激活ERS的基礎上，加入GSK3β抑制劑(SB216763)，檢測原代肝細胞凋亡情況。結果TNF-α/ActD可以明顯誘導肝細胞分泌LDH，加入TM后，肝細胞分泌LDH和表達的caspase-3明顯增多，而加入4-PBA后，肝細胞分泌LDH和表達的caspase-3明顯減少。TNF-α/ActD明顯促進了Grp78和CHOP的表達，促進ERS的活化；ERS抑制增強GSK3β磷酸化水平，降低GSK3β活性，但TNF-α/ActD對GSK3β活性無明顯影響；TNF-α/ActD可以直接誘導肝細胞發(fā)生凋亡，加入TM后，凋亡的細胞明顯增多，但是加入GSK3β抑制劑后，細胞凋亡明顯減少。結論TNF-α/ActD協同ERS誘導了肝細胞的凋亡，其分子機制可能與GSK3β的活化有關。

內質網應激；腫瘤壞死因子；放線菌素D；細胞凋亡；糖原合成酶激酶3β

內質網(endoplasmic reticulum, ER)是真核細胞中一種重要的細胞器，由于各種原因引起的錯誤折疊或未折疊蛋白在內質網腔內聚集及Ca2+平衡紊亂的狀態(tài)，稱為內質網應激(ER stress, ERS)[1]。ERS可激……