血管生成素-1與急性期腦梗死病灶周圍側支循環建立的相關性探討

王開，王海軍

血管生成素-1與急性期腦梗死病灶周圍側支循環建立的相關性探討

王開，王海軍

（撫順礦務局總醫院神經內科，遼寧 撫順 113008）

目的 探討血管生成素-1與急性期腦梗死病灶側支循環建立是否存在相關性。方法 收集符合入組標準患者99例，根據入院時腦灌注加權成像（PWI）結果，分成腦側支循環建立組與腦灌注不足組，其中腦灌注不足組又分成尤瑞克林干預組與非尤瑞克林干預組。3組第1天和第10天分別查血管生成素-1水平。結果①血管生成素-1水平腦側支循環建立組[（84.50±38.31）ng/mL vs.（111.00±53.10）ng/mL]和尤瑞克林干預組[（74.45±53.48）ng/mL vs.（103.97±61.53）ng/mL]第1、10天各自組內比較差異有統計學意義（t=-4.450、-3.864，P＜0.05），而非尤瑞克林干預組[（81.94±44.61）ng/mL vs.（104.85±56.07）ng/mL]組內差異無統計學意義（t=-1.756，P＞0.05）。②血管生成素-1水平第1天、第10天腦側支循環建立組與灌注不足組組間以及尤瑞克林干預組與非尤瑞克林干預組組間比較，差異無統計學意義。③第1天血管生成素-1水平與磁共振PWI參數rCBV、rCBF、MTT均無相關性（r=-0.002、0.075、-0.139）。結論 未發現血管生成素-1與急性期腦梗死側支循環建立存在相關性。

血管生成素-1；急性期腦梗死灶；側支循環

血管生成素（ANG）屬于核酸內切酶超家族成員，是存在于血清中的正常人體蛋白，是一種分泌型的生長因子[1-2]。該家族主要由ANG-1，ANG-2，ANG-3，ANG-4四種因子組成，其相對分子量14KDa，結構為123個氨基酸殘基組成的單鏈堿性蛋白，其中ANG-1是血管特異性生長因子，主要參與血管的重塑，成熟及穩定過程[3-5]。本研究探討ANG-1與急性期腦梗死側支循環建立是否存在相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年6月～2016年6月本科住院腦梗死患者99例，男77例，女22例。根據入院時頭顱磁共振腦灌注加權成像（PWI）結果，分成腦側支循環建立組與腦灌注不足組，其中腦灌注不足組根據是否使用尤瑞克林分成尤瑞克林干預組與非尤瑞克林干預組。腦側支循環建立組37例，男27例，女10例，平均年齡（64.32±10.86）歲；灌注不足組（尤瑞克林干預組+非尤瑞克林干預組）共62例，其中尤瑞克林干預組38例，男31例，女7例，平均年齡（63.81±10.55）歲，非尤瑞克林干預組24例，男19例，女5例，平均年齡（64.50±9.89）歲。腦側支循環建立組合并糖尿病3例，高血壓2例，冠心病1例；尤瑞克林干預組合并糖尿病4例，高血壓5例，冠心病1例，高同型半胱氨酸1例；非尤瑞克林干預組合并高血脂2例，高血壓3例。經統計學分析，3組性別，年齡，慢性疾病（糖尿病、高血壓、高血脂、高同型半胱氨酸、心臟病），吸煙史，家族史等資料比較差異無統計學意義，具有可比性。本研究均得到患者知情同意，并通過醫院倫理委員會批準同意。

1.2 入組標準 ①發病時間＜48 h；②入院時有明顯的局灶神經癥狀和體征，NIHSS評分≥3分；③年齡＞18歲；④頭顱CT排除顱內出血；⑤符合第四屆全國腦血管病會議通過的診斷標準。

1.3 排除標準 ①長期慢性病患者（合并全身多系統損害如：慢性腫瘤，尿毒癥，心力衰竭，呼吸衰竭，全身免疫性疾病，血液病等）；②NIHSS評分＜3分或＞21分；③既往有腦出血，腦腫瘤，腦外傷及其他腦部疾病；④短暫性腦缺血發作（TIA），腦栓塞。

1.4 方法

1.4.1 記錄所有患者姓名，性別，住院號，年齡，聯系電話，家庭住址。

1.4.2 嚴格按照入選和排除標準，對所有入選患者均按倫理學原則簽署知情同意書。所有入選患者入院24 h內做頭顱MRI+PWI+MRA檢查。測量PWI參數局部腦血流量（rCBF），局部腦血容量（rCBV），達峰時間（TTP），平均通過時間（MTT），入院第1天觀測生命體征（體溫、呼吸、脈博、血壓），查血管生成素-1，（化驗血水、電解質、血糖、血脂、同型半胱氨酸、肝功能、腎功能），心電圖、超聲心動圖檢查。

1.4.3 ANG-1檢測：全血標本請于室溫放置2 h或4℃過夜后于2℃～8℃ 1 000xg離心15 min，取上清即可立即檢測；或進行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣品應再次離心，然后檢測。將各種試劑移至室溫（18℃～25℃）平衡至少 30 min，按前述方法配制試劑，備用。加樣：分別設標準品孔、待測樣本孔。每孔分別加標準品或待測樣本100μL，輕輕晃動混勻，覆上板貼，37℃溫育2 h。棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μL，覆上新的板貼，37℃溫育1 h。棄去孔內液體，甩干，洗板3次。每次浸泡2 min，200μL/每孔，甩干。 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100μL，覆上新的板貼，37℃溫育1 h。棄去孔內液體，甩干，洗板5次。每次浸泡2 min，200μL/每孔，甩干。依序每孔加底物溶液90μL，37℃避光顯色15～30 min。依序每孔加終止溶液50μL，終止反應。在反應終止后5min內用酶標儀在450 nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。

1.4.4 腦側支循環建立組和尤瑞克林非干預組的常規腦梗死治療包括：使用阿司匹林抗血小板聚集，同時予血栓通改善循環，腦蛋白水解物營養腦細胞，阿托伐他汀調脂穩定斑塊，配合康復針灸處理，調控血壓等處理。

1.4.5 尤瑞克林干預治療包括：常規腦梗死治療基礎上，加上0.9%氯化鈉注射液250 mL+尤瑞克林0.15 PNA單位，靜滴，1次/d，共7 d。

1.5 統計學方法 本研究數據均用SPSS19.0統計軟件處理，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用例數（n）表示，計數資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組ANG-1第1天、第10天水平各組內比較 腦側支循環建立組的ANG-1水平第10天顯著增高，與第1天比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。尤瑞克林干預組的ANG-1水平第10天顯著增高，與第1天比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。而非尤瑞克林干預組的ANG-1水平第10天與第1天水平比較差異無統計學意義。見表1。

表1 3組ANG-1第1天、第10天水平各組內比較Table 1 Comparison ofANG-1 levels first days,tenth days between three groups

2.2 腦側支循環建立組與腦灌注不足組第1天血管生成素-1比較 腦側支循環建立組水平（84.58±38.31）ng/mL和腦灌注不足組水平（77.35±49.99）ng/mL之間差異無統計學意義（t=0.760，P＞0.05）。

2.3 尤瑞克林干預組與非尤瑞克林干預組第1天ANG-1比較 尤瑞克林干預組（74.45±53.48）ng/mL與非尤瑞克林干預組（81.94±44.61）ng/mL的水平比較差異無統計學意義（t=0.571，P＞0.05）。

2.4 尤瑞克林干預組與非尤瑞克林干預組第10天ANG-1比較 尤瑞克林干預組（103.97±61.53）ng/mL與非尤瑞克林干預組（104.85±56.07）ng/mL的比較差異無統計學意義（t=0.125，P＞0.05）。

2.5 尤瑞克林干預組與非尤瑞克林干預組第1天與第10天的ANG-1增幅程度比較 尤瑞克林干預組（28.62±28.81）ng/mL與非尤瑞克林干預組（22.90±24.28）ng/mL比較差異無統計學意義（t=0.817，P＞0.05）。

2.6 ANG-1水平與rCBV相關性分析 ANG-1與CBV的線性相關顯著性檢驗P＞0.05，因而ANG-1與CBV變量之間不存在顯著的線性相關，ANG-1與CBV pearson相關系數r1=-0.002（相關系數絕對值越接近于0，絕對值皆小于0.2，相關度極弱或無相關）。

2.7 ANG-1與rCBF線性相關分析 ANG-1與rCBF的線性相關顯著性檢驗P＞0.05，因而ANG-1與rCBF、變量之間不存在顯著的線性相關，ANG-1與rCBF的pearson相關系數r2=0.075，（相關系數絕對值越接近于0，絕對值皆小于0.2，相關度極弱或無相關）。

2.8 ANG-1與MTT的線性相關分析 ANG-1與MTT的線性相關顯著性檢驗P＞0.05，因而ANG-1與MTT變量之間不存在顯著的線性相關，而且ANG-1與MTT pearson相關系數r3=-0.139（相關系數絕對值越接近于0，絕對值皆小于0.2，相關度極弱或無相關）。

3 討論

腦側支循環的形成始于胚胎期[6]，是連接腦動脈之間的許多血管吻合支，出生后，其中一部分吻合支退化閉鎖，一部分保留下來，形成了腦側支循環的解剖基礎。腦血管閉塞后側支循環開放分三級[7]：首先開放的是Wiliis環。Wiliss環雖然為腦梗死患者的腦血管重新分配提供了一種有效的途徑，但是完全依賴于Wiliss環代償罕見。常見的是以軟腦膜支吻合支代償或其他多種代償。二級側支循環是指一系列軟腦膜側支形成和眼動脈逆流。雖然次級側支循環提供的血流不如Wiliss環，但缺血病灶都存在不同形式的繼發側支循環代償。遠端供血如果此時仍不能得到滿足，機體就會使用三級側支循環，即新生血管[8]。血管新生是指新生的毛細血管從已存在的血管側支的出芽與再塑，包括：①血管舒張，內皮通透性增加，基底膜溶解。②內皮細胞增生，遷徙。③管腔形成，再塑，內皮細胞分化成熟，動脈形成包括血管平滑肌的增生，遷徙，分化及再塑，即血管平滑肌細胞與內皮細胞的相互作用[9]。腦缺血后的血管生成是一個復雜的精細的調控過程，研究證實[10-11]，腦缺血后機體“自身代償性的血管生成”所形成的側支循環與局部組織釋放的內源性促血管生長因子有關。它們在腦缺血后血管新生過程中發揮重要作用。目前對ANG-1及其受體Tie-2通路（ANG-1/Tie-2）的研究較為透切。腦缺血后，ANG-1/Tie-2通路能促進缺血腦組織周圍側支循環建立，抑制神經細胞凋亡，保護神經元，同時穩定血管，增強內皮細胞間緊密連接，延緩血管退化，維持血腦屏障的完整性，從而改善腦缺血的神經功能[12-14]。國外有研究發現[15]，Ang-1與Tie-2表達缺失小鼠表現為血管分支減少，血管叢稀疏，血管通透性增加，血管直徑變小，血管網絡復雜性明顯下降，存在嚴重血管發育缺陷，其血管生長明顯受阻，并最終導致胚胎死亡。Ang-1轉基因小鼠則表現為血管腔增大，毛細血管，小靜脈數量和分支增多，還能通過調節內皮細胞和血管周圍間質細胞的相互作用維持管腔的完整性和穩定性，可以形成穩定的不滲漏的血管，并能對抗血小板活化因子PAF等炎性因子產生的內膜滲漏[16]。動物實驗模型亦發現[17]：ANG水平在腦缺血6小時后明顯上升，如果缺血持續24 h，則ANG水平進一步升高。Lin[18]等發現，ANG蛋白在腦梗死后2周內可持續升高，與正常對照組對比，ANG蛋白可增加8倍。國內劉媛媛等[19]對急性期腦梗死患者的Ang-1進行動態觀察，發現：Ang-1水平在發病48 h內及3 d，稍低于對照組，7 d后顯著升高，14 d達到高峰。同時大梗死灶患者7 d和14 d的Ang-1均高于中小梗死灶患者。上述國內外一系列報道均說明ANG-1有促進血管新生，參與三級側支循環建立的作用。但我們能否通過ANG-1水平的高低或者變化，推測腦梗死灶周圍側支循環建立與否，兩者是否存在相關性，目前國內外研究較少。

本研究將3組第1天和第10天ANG-1水平進行組內比較，我們發現腦側支循環建立組和尤瑞克林干預組第1天和第10天查ANG-1水平組內差異有統計學意義，而非尤瑞克林干預組的組內差異無統計學意義。ANG-1水平在腦梗死過程中出現變化，這與目前國內外研究是一致的。而非尤瑞克林干預組無差異，考慮與病例數偏少有關。我們還發現第1天腦側支循環建立組和腦灌注不足組之間的ANG-1水平組間差異無統計學意義，說明腦側支循環建立組的ANG-1水平并沒有高于腦灌注不足組的水平。尤瑞克林干預組和非干預組之間的差異亦無統計學意義，第10天復查3組之間的差異亦無統計學意義。我們再比較尤瑞克林干預組和非尤瑞克林干預組第1天和第10天組內ANG-1水平的增幅的組間差異。因為尤瑞克林藥效學試驗顯示：在臨床劑量下，該藥選擇性擴張缺血部位細小動脈，促進缺血部位的微血管新生和側支循環的形成[20]，我們推測尤瑞克林干預組經藥物干預后會誘發側支循環建立，設想在尤瑞克林干預組中ANG-1水平升高幅度可能會與非尤瑞克林干預組存在差異，但結果兩者差異亦無統計學意義。我們再嘗試將ANG-1分別和PWI中參數“rCBV，rCBF，MTT”分別做線性相關性分析，結果均是陰性。

綜上所述，結合本研究病例，ANG-1暫未發現能作為評估腦側支循環是否建立的量化指標。ANG-1與腦側支循環是否建立暫未發現存在相關性。由于本研究病例數不多，其結果僅能代表部分樣本的情況，下一步仍需繼續收集病例，做進一步探討。

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The study of the correlation betweenAngiogenin-1 and the establishment of collateral circulation around the acute cerebral infarction focus

Wang Kai,Wang Hai-jun
(Department of Neurology,General Hospital of Fushun Mining Bureau,Fushun,Liaoning,113008,China)

Objective Investigate whether there is correlation between Ang-1 and the establishment of collateral circulation in acute cerebral infarction.Methods 99 patients were collected,ultimately the 99 cases were into the group.All the patients were performed on the head MR within 24 hours.According to the PWI,all the patients were divided into the cerebral collateral circulation group and the cerebral hypoperfusion group,the latter was divided into the Urinary Kallidinogenase intervention group and non intervention group.All patients were checked the angiopoietin-1 and do it again after 10 days.Results ①There was statistically significant difference between 1 day and 10 days both in the cerebral collateral circulation group[(84.50±38.31)ng/mLvs.(111.00±53.10)ng/mL,t=-4.450,P＜0.05]and the Urinary Kallidinogenase intervention group[(74.45±53.48)ng/mL vs.(103.97±61.53)ng/mL,t=-3.864,P＜0.05].But no statistically significant existed in the non urinary kallidinogenase intervention group[(81.94±44.61)ng/mL vs.(104.85±56.07)ng/mL,t=-1.756,P＞0.05].② In the first day No statistically significant difference was found between the cerebral collateral circulation group and cerebral hypoperfusion group,so did the Urinary Kallidinogenase intervention group and non intervention group.There were no statistically differences between the Urinary Kallidinogenase intervention group and non intervention group after 10 days.The increases between 1 day and 10 day was no statistically significant between the Urinary Kallidinogenase intervention group and non intervention group.③The level of the Ang-1 was not correlated with rCBV,rCBF and MTT in the first day(r=-0.002、0.075、-0.139).Conclusion There isn’t correlation betweenAng-1 and the establishment of collateral circulation in acute cerebral infarction according to the cases.

Angiogenin-1;The acute cerebral infarction;Collateral circulation

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.28.006