山蠟梅藥材黃酮及生物堿成分TLC鑒別

江西中醫藥大學藥學院，江西 南昌 330004

山蠟梅藥材黃酮及生物堿成分TLC鑒別

鐘宇婷舒任庚*
江西中醫藥大學藥學院，江西 南昌 330004

目的分析山蠟梅藥材的黃酮及生物堿成分的TLC鑒別方法。方法采用硅膠TLC法鑒別山蠟梅藥材中的黃酮類和生物堿類成分，黃酮類成分采用1%三氯化鋁乙醇液顯色，生物堿類成分采用改良碘化鉍鉀試劑顯色。結果分別以石油醚-乙酸乙酯-甲酸(5.5∶3.5∶0.1)和苯-乙酸乙酯-甲醇(4∶3∶1)作為山蠟梅黃酮和生物堿成分的展開劑，山蠟梅藥材薄層鑒別特征明顯，專屬性強。結論該薄層方法可行，重復性好，可作為山蠟梅藥材的薄層鑒別方法。

山蠟梅；黃酮；生物堿；薄層鑒別

山蠟梅(ChimonanthusnitensOliv.)為我國特有的蠟梅科蠟梅屬植物，藥用部位為其干燥葉，主要分布于江西德興大茅山區、婺源懷玉山區及安徽徽州山區齊云山一帶，為山坡、路旁、疏林中的天然植物，當地民間稱之為毛山茶(江西婺源)、香風茶(安徽)[1]，具有清熱解毒、祛風解表之功效，可用于防治感冒、流行性感冒及慢性支氣管炎等[2]。山蠟梅葉中含有豐富的揮發油、黃酮類及生物堿類成分[3-4]。以往的研究主要集中在藥材的性狀鑒別、顯微鑒別及揮發油成分的鑒別[5]，筆者采用TLC技術對山蠟梅中的黃酮類及生物堿類成分進行定性鑒別，以建立山蠟梅藥材中黃酮及生物堿類成分的薄層鑒定方法，為山蠟梅藥材質量標準的制訂提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 RE-52旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；循環水式多用真空泵(蘇州長城科工貿有限公司)；GZX-9140 MBF數顯鼓風干燥箱(上海博訊實業有限公司)。

1.2 材料 95%乙醇溶液、乙酸乙酯、氯仿、濃氨水、石油醚、甲酸、苯、甲醇試劑均為分析純，薄層層析硅膠GF254(山東青島海洋化工廠)，羧甲基纖維素鈉(化學純)(國藥集團化學試劑有限公司)。

山蠟梅葉，分別于2016年4月6日、5月16日、6月27日采摘自江西省婺源縣曉起鎮，經江西中醫藥大學藥用植物教研室葛菲教授鑒定為蠟梅科蠟梅屬植物山蠟梅(ChimonanthusnitensOliv.)。對照品山蠟梅藥材購自江西省食品藥品檢驗所。

2 方法與結果

2.1 硅膠GF254薄層板的制作 參照中華人民共和國藥典[1]，稱取3g羧甲基纖維素鈉粉末，置于1000mL燒杯中，加入1000mL蒸餾水，80 ℃水浴加熱，攪拌溶解，配制成約0.3%的羧甲基纖維素鈉溶液。取一定量的硅膠GF254，倒入適量上述羧甲基纖維素鈉溶液，在研缽中研磨至稀糊狀，均勻鋪在干燥潔凈的玻璃板上，晾干，烘箱中105℃活化30min，備用。

2.2 山蠟梅藥材黃酮成分的薄層色譜鑒別[6]

2.2.1 黃酮成分的提取 取新鮮山蠟梅干葉15g，粉碎，置圓底燒瓶中，加入95%乙醇溶液，用量以浸沒藥材表面1cm為度。水浴鍋上95℃加熱回流1hr.，濾過，藥渣用適量95%乙醇溶液同法再提取1次，合并2次提取液，于旋轉蒸發器中旋干溶劑，殘留物加10mL蒸餾水，溫熱溶解，用10mL乙酸乙酯萃取，重復3次，合并3次EtOAc萃取液，置旋轉蒸發器中旋干溶劑，加3mL甲醇至殘留物中，使其完全溶解，得到山蠟梅黃酮類成分提取液供試品，備用。

取山蠟梅對照藥材15g，重復上述實驗，制成山蠟梅黃酮類成分提取液對照品，備用。

2.2.2 黃酮成分的薄層鑒別[6]按照薄層色譜法( 中國藥典2010 版一部附錄VB)標準要求，分別取上述供試品和對照品溶液點在同一塊硅膠 GF254 薄層色譜玻璃板上, 以石油醚-乙酸乙酯-甲酸 (5.5∶3.5∶0.1) 為展開劑展開，晾干，噴以 1%AlCl3乙醇溶液黃酮成分專屬顯色劑[7]，置105 ℃烘箱中加熱5min，在紫外光燈( 365 nm) 下觀察，供試品與對照品在TLC上顯示出有相同Rf值的黃～紫色黃酮熒光斑點。如圖1所示。

2.3 山蠟梅藥材的生物堿成分薄層色譜鑒別

2.3.1 生物堿成分的提取[8]取新鮮山蠟梅葉15g，粉碎，置圓底燒瓶中，加入濃氨水20mL，加塞，振搖[9]，靜置30min，慢慢加入CHCl3溶液，至液面浸沒藥材表面1cm為止， 水浴鍋上70℃加熱回流1h，濾過，藥渣同法再提取1次，合并兩次提取液，用分液漏斗分出CHCl3層，加無水硫酸鈉脫水，置旋轉蒸發器中濃縮至約2mL，作為山蠟梅生物堿類成分供試品CHCl3液，備用。

取山蠟梅對照藥材15g，同法制成山蠟梅生物堿類成分的對照品CHCl3液，備用。

2.3.2 生物堿成分的薄層鑒別 按照薄層色譜法( 中國藥典 2010 版一部附錄VB)[1]標準要求，分別用毛細管吸取上述山蠟梅生物堿類成分供試品和對照品CHCl3液，點在同一硅膠 GF254 薄層色譜玻璃板上，在雙槽展開槽的另一邊加入等量的二乙胺溶液使其預飽和15min，再以苯-乙酸乙酯-甲醇 ( 4∶3∶1) 為展開劑展開，自然晾干后噴以改良碘化鉍鉀生物堿專屬顯色劑，供試品與對照品在TLC上顯示出有相同Rf值的紅棕色生物堿斑點。如圖2所示。

3 討論

3.1 硅膠板的制作 薄層色譜法鑒別化學成分的關鍵在于硅膠板的制作和展開劑的選擇[10]。本實驗鑒別黃酮和生物堿兩類成分所用的薄層板略有不同，黃酮類成分具酸性，生物堿類成分顯堿性，鑒別黃酮成分的硅膠GF254薄層板僅用0.3%羧甲基纖維素鈉溶液，而鑒別生物堿類成分用的硅膠GF254薄層板在制作時需要另外加入了一定量的濃氨溶液，制成堿性硅膠薄層。

3.2 展開劑的選擇 層析用展開劑決定了藥材中各有效成分的分離度，本實驗中，黃酮成分的鑒別首先嘗試了文獻中報道較多的甲苯-甲酸乙酯-甲酸、苯-甲醇、氯仿-甲醇等各種比例組合液，但從結果看其分離度均不甚理想，最終發現石油醚-乙酸乙酯-甲酸(5.5∶3.5∶0.1)系統是分離山蠟梅黃酮成分較為理想的展開劑。山蠟梅生物堿成分的鑒別首先嘗試了氯仿-丙酮、氯仿-苯等文獻記載的各種比例混合液，但最終發現分離山蠟梅生物堿最理想的溶劑系統是苯-乙酸乙酯-甲醇(4∶3 ∶1)。這兩個展開劑系統分別分離山蠟梅藥材中的黃酮和生物堿類成分分離效果好，斑點清晰可見，結果重現性好。

綜上，實驗尋找到硅膠薄層層析法分離山蠟梅藥材中黃酮和生物堿兩類有效成分的展開劑系統，黃酮和生物堿相對于藥材中的另一大類有效成分-揮發油，具有穩定性好、不易變化等特點，以此作為山蠟梅藥材的定性鑒別，方法簡便快速、重現性好、專屬性高等優點，可用作藥材質量標準的制定。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[2]王國強.全國中草藥匯編[M].3版.北京:人民衛生出版社，2014.

[3]舒任庚，李莎莎，胡浩武.山蠟梅化學成分研究[J].中國藥學雜志，2010(15):1134-1135.

[4]胡文杰，楊書斌.山蠟梅化學成分及其藥用研究進展[J].江西林業科技，2008，10(6):59-61

[5]舒任庚,李莎莎,張普照.采收時間及提取方法對山蠟梅揮發油成分的影響[J].中國醫院藥學雜志，2010,30(9):761-765.

[6]李廣，王清光，王義明，等.黃酮類化合物的定量色譜分析[J].食品科學，2001，22(2)57-61.

[7]馬陶陶，張群林，李俊，等.三氯化鋁比色法測定中藥總黃酮方法的探討[J].時珍國醫國藥，2008，19(1)：51-56.

[8]周文華，楊輝榮，岳慶磊.生物堿提取和分離方法的研究新進展[J].當代化工，2003，32(2):111-114.

[9]羅勇慧.廣金錢草黃酮和生物堿成分薄層色譜鑒別的研究[J].廣東藥學院學報，2004，20(6)：596-597.

[10]曾鎮廣.薄層色譜中展開劑的選擇[J].學術教育，2010(7)：140.

StudyonTLCIdentificationMethodsfortheFlavonoidsandAlkaloidsofChimonanthusNitensOliv

ZHONG Yuting SHU Rengeng*

College of Pharmacy, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nangchang 330004, China

ObjectiveTo establish a TLC identification method for the flavonoids and alkaloids of theChimonanthusNitensOliv.Methodsflavonoids and alkaloids ofChimonanthusNitensOliv were application identified by Silica gel TLC, flavonoids were treated with 1% AlCl3ethanol solution, alkaloids were stained with improved bismuth potassium iodide reagent.ResultTLC identification for flavonoids and alkaloid components ofChimonanthusNitensOliv. was high specific with petroleum ether -ethyl acetate - formic acid (5.5∶3.5∶0.1) and benzene - ethyl acetate-methanol(4∶3∶1)as the deployment system, respectively.ConclusionThe established method is feasible and reproducible and could be used asChimonanthusNitensOliv. identification.

ChimonanthusNitensOliv; Flavonoid; Alkaloid; TLC

R284

A

1007-8517(2017)17-0009-03

2017-06-30 編輯：陶希睿)

國家自然科學基金資助項目(81360631)；江西省科技支撐計劃資助項目(2010BSA17600)。

鐘宇婷(1993-)，女，漢族，碩士研究生，研究方向為中藥學。

舒任庚(1964-)，男，漢族，博士，教授，研究方向為中藥學。E-mail: shurg@163.com