HPLC法測定山綠茶不同炮制品種中綠原酸和蘆丁的含量

●陳改敏

HPLC法測定山綠茶不同炮制品種中綠原酸和蘆丁的含量

●陳改敏

目的：完善山綠茶綠原酸、蘆丁的含量測定方法，從而優化山綠茶的炮制工藝。方法：以HPLC法為核心，對不同炮制品種下的山綠茶中綠原酸、蘆丁含量進行測量。結果：綠原酸進樣量在0.1032～0.619vg之間，具有良好的線性關系，平均回收率為102.31%。結論：HPLC法具有操作簡便、準確性高的特點，故而能夠作為中綠原酸和蘆丁含量檢測的方法。

HPLC法；山綠茶；炮制品種；綠原酸；蘆?。缓繙y定

1 儀器試劑與材料

1.1 儀器試劑

在借助HPLC方法進行實驗的過程中，實驗人員主要借助型號為Agilent 1260高效液相色譜儀、Agilent 1260 serie色譜工作站進行具體的操作實驗。此外，在試驗樣本分析、處理過程中，實驗人員還要借助LG16-WA高速微量離心機、超聲清洗器、電子分析天平、電熱鼓風干燥箱等設備進行作業。

本次實驗過程中，所使用的試劑主要分為三種，分別是：乙腈、水與分析純。其中，乙腈為Fisher公司生產的色譜純，而水則為為超純水。

1.2 材料

本次實驗過程中所涉及的山綠茶均來源于廣西上林縣，且符合《廣西中藥材標準》中的山綠茶品種。此外，實驗所需的綠原酸、蘆丁對照品均由上海融禾醫藥科技發展有限公司生產。

2 方法和結果

2.1 色譜條件

在進行實驗分析的過程中，工作人員所采用的色譜柱為Phenomenex Gemini C18，該色譜柱的流動相需要依照下表的數據參數進行梯度洗脫處理。在實際的分析處理過程中，該色譜柱的檢測波長為330nm，而其流速則為1.0m l·m in-1。此外，為了確保實驗效果的提升，實驗人員需要確保色譜柱的溫度控制在30℃，而進樣量則控制為10vl。最后，實驗人員還需要對理論塔板數進行管控。在實際的操作過程中，若以綠原酸峰計算，其塔板數需要大于5 000，若以蘆丁計量，則需要大于10 000。總而言之，綠原酸以及蘆丁的分離度需要大于1.5。

表1 流動相洗脫程序

2.2 對照品溶液制備

在實驗分析作業時，實驗人員需要開展對照品溶液的制備工作。在此過程中，工作人員需要分別選取經過干燥處理的綠原酸、蘆丁對照品2.0mg、5.Omg，并將其放置在10m l的量瓶中，并于濃度為50%的乙醇溶液向融合、搖勻，從而由此制備出濃度為0.10mg/m l、0.25mg/m l的綠原酸與蘆丁對照品溶液。

2.3 制備試品溶液

在進行試品溶液制備作業時，試驗人員需要選取凈含量為2.0g的山綠茶干燥粉末進行作業。在處理的過程中，工作人員需要將其放置在容量為100m l的錐形瓶中，并添加40m l濃度為50%的乙醇溶液，并進行攪拌工作。不僅如此，其還需要對錐形瓶進行水浴加熱處理，該處理時間約為40m in。隨后，將其放冷，并用濃度為50%乙醇對減損重量進行補足。在完成了上述的操作之后，試驗人員需要進選取2m l的續濾液，并將其放置在離心機上進行10m in中的離心處理，最后選取上清液為供試品溶液。

2.4 線性關系分析

在進行線性關系分析作業時，實驗人員需要分別吸取經稀釋的混合對照品溶液1、4、8、12、15、20ul，并借助高效液相色譜儀對其進行測定處理工作。在這一過程中，實驗人員以對照品進樣量、峰面積分別為橫、縱坐標進行標準曲線圖的繪制工作，從而由此實現了對綠原酸、蘆丁的標準曲線的計算工作。關于兩種元素的標準曲線方程，筆者總結如下。

通過對于上述的方程式進行分析可以得知：綠原酸、蘆丁對照品分別在0.10～2.00ug、0.25～5.00ug的范圍內，其與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 方法學考察

2.5.1 精密度試驗

由于本次實驗所涉及的試劑、對照溶液的提取量都較小，故而在實驗分析的過程中，實驗人員需要精密的開展溶液吸取工作。在實驗分析時，實驗人員需要對同一混合對照品溶液進行6次樣品的抽取工作，每次抽取的量為10ul，隨后再以此為基礎進行綠原酸、蘆丁的峰面積計算工作。

在此次的分析作業過程中，實驗人員工測量出綠原酸、蘆丁的平均峰面積值為4005.97、3137.77，而上述兩種元素的RSD分別為0.04%、0.09%。該數據的出現則表明，儀器的精密度符合實驗要求。

2.5.2 穩定性試驗

此外，實驗的穩定性對相關結論產生較大的影響。在此過程中，工作人員需要密吸取同一批供試品溶液10ug，并分別在0、2、4、8、12、24h內對其峰面積的數值進行測定。通過對于這些數據的總結分析可以得知：在24h之內，綠原酸、蘆丁的平均峰面積為129.62、923.60，而其RSD則分別為0.20%、1.81%。這一狀況的出現則能夠說明：供試品溶液在24h內具有較強的穩定性。

2.6 樣品含量測定

在開展樣品含量測定的過程中，試驗人員需要選取不同炮制方式的山綠茶樣品進行操作。在實際的處理過程中，試驗人員需要選取試品溶液、對照品溶液各10ul進行實驗分析，并對其峰面積進行測量。關于樣品含量的數值匯總，筆者進行了相關總結，具體內容如下。

表2 不同炮制山綠茶綠原酸、蘆丁含量測定結果

3 實驗總結

通過對于上表的實驗數據進行分析、總結可以得知：傳統炮制方法制備的山綠茶的綠原酸、蘆丁含量最高，其次則清炒炮制藥材、陰干藥材。不僅如此，在相同的烘烤時間下，綠原酸的含量與溫度成正比例關系，其溫度越高，綠原酸的含量最大，但蘆丁的含量狀況則與溫度變化呈拋物線關系。通過實驗數據總結可以得知：山綠茶藥材的最佳烘烤工藝為：在200℃的溫度下進行20m in的烘烤處理。

4 結束語

綜上所述，不同炮制方法處理的山綠茶，其化學成分的含量往往會出現不同程度的變化，故而對其藥效產生一定的影響，故而造成臨床療效出現不同幅度的變化。基于此，有關單位以及人員需要加強對于山綠茶炮制方法、工藝的了解，分析，從而確保其最高藥效的發揮，促進山綠茶藥效功能的提升，保障醫療衛生事業的發展。

（作者單位：南陽醫學高等?？茖W校 ）

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南陽醫專2016年度科學研究基金項目，2016NYYZ001