胃癌組織中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表達的臨床意義

鄭 軍，張春燕，張毅強，馬麗莉，裴晉紅

胃癌組織中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表達的臨床意義

鄭 軍1，張春燕2，張毅強1，馬麗莉3，裴晉紅1

目的探討eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌組織中的表達及與臨床病理特征的關系。方法采用免疫組化SP法檢測eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在168例胃癌和52例癌旁胃組織中的表達。結果eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌組織中的陽性率顯著高于癌旁胃組織(P=0.001,P=0.000)；有淋巴結轉移的胃癌組織中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白陽性率高于無淋巴結轉移的胃癌(P=0.025,P=0.001)；臨床Ⅲ+Ⅳ期胃癌eIF-4E和p-4EBP-1蛋白陽性率高于臨床Ⅰ+Ⅱ期胃癌(P=0.001,P=0.049)；胃癌組織中eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表達呈顯著正相關(r=0.432,P<0.01)；eIF-4E蛋白陰性胃癌患者生存時間明顯高于陽性患者(P=0.012)。結論eIF-4E和p-4EBP-1蛋白共陽性可能在胃癌的發生、發展和侵襲轉移過程中起重要作用，有望成為胃癌判斷預后及診治的新分子靶標。

胃腫瘤；eIF-4E；p-4EBP-1

胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤，雖然手術治療是早期胃癌的主要治療手段，但仍有60%的患者出現復發、轉移，另有50%以上患者發現時已為晚期，5年生存率仍低于30%[1-2]。目前，胃癌的發病機制仍不清楚，細胞信號通路異常活化是腫瘤發生、發展的分子基礎，真核細胞翻譯起始因子-4E(eukaryotic initiation factor 4E, eIF-4E)是多條信號通路的中心集結點，與多種人類惡性腫瘤的發生、發展密切相關。AKT/mTOR信號通路調控的4EBPs磷酸化可促進eIF-4E與eIF-4G相互作用組裝形成eIF-4F復合物，激活帽依賴性腫瘤相關蛋白翻譯[3-6]。目前，eIF-4E和p-4EBP-1在胃癌中的作用機制及與臨床病理特征的相關性少有報道，本文探討eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表達與胃癌臨床病理特征及與患者預后的相關性，為eIF-4E在胃癌中的發病機制研究奠定基礎。

1 材料與方法

1.1一般資料收集長治醫學院附屬和平醫院2009年5月～2015年5月病理科存檔的石蠟標本合計220例(均未進行治療)，其中168例為胃癌組織，52例為癌旁組織標本，165例胃癌患者具有完整的臨床隨訪資料。168例胃癌中，男性98例，女性70例；年齡>55歲者122例，≤55歲者46例；TNM臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期36例，Ⅲ+Ⅳ期132例；有淋巴結轉移者108例，無淋巴結轉移者60例；分化程度：高+中分化65例，低+未分化103例。

1.2免疫組化采用免疫組化SP法檢測eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在組織中的表達。兔抗人單克隆抗體eIF-4E和p-4EBP-1購于Epitomics公司。免疫組化SP法(EnVision+Dual Link System-HRP Kit，辣根過氧化物酶HRP標記)檢測試劑盒購于福州邁新公司。切片脫蠟、水化、3%H2O2阻斷內源性過氧化物酶30 min，置于0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液中，微波爐抗原修復15 min；正常非免疫血清封閉30 min；滴加一抗eIF-4E和p-4EBP-1 4 ℃孵育過夜。加二抗于室溫(25 ℃)30 min。DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封固。試劑提供的陽性對照片作陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3結果判斷eIF-4E蛋白主要表達于細胞核，p-4EBP-1蛋白主要表達于細胞質。結果由兩位資深病理專家評判：(1)根據陽性染色強度判斷：細胞無陽性染色為0分；細胞呈黃、淺棕色為1分；細胞染成棕色并無背景染色，或細胞呈深棕色、有淺棕色背景為2分；細胞呈深棕色，無背景著色為3分。(2)根據陽性細胞數計分：無陽性細胞為0分；陽性細胞數≤25%為1分；25%～50%為2分；>50%為3分。將兩項得分結果相乘：0～1分為陰性，>2分為陽性。

1.4統計學處理利用SPSS 18.0軟件進行χ2檢驗，檢測eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的相關性；Spearman相關分析檢測eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌組織中表達的相關性；Kaplan-Meier生存分析eIF-4E和p-4EBP1蛋白表達與胃癌患者存活時間的相關性。

2 結果

2.1eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌及癌旁正常胃組織中的表達eIF-4E蛋白主要表達于細胞核(圖1)。p-4EBP-1蛋白主要表達于細胞質(圖2)。eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌組織中陽性率分別為78%(131/168)、73%(123/168)，在癌旁胃組織中陽性率分別為35%(18/52)、17%(9/52)；eIF-4E和p-4EBP-1在胃癌組織中的陽性率分別顯著高于癌旁胃組織(P=0.001，P=0.000，圖3)。

①②

圖1胃癌細胞核eIF-4E陽性，SP法
圖2胃癌細胞質p-4EBP-1陽性，SP法

圖3 eIF-4E和p-4EBP-1在胃癌及癌旁胃組織中的表達

2.2eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在有淋巴結轉移的胃癌組織中表達高于無淋巴結轉移的胃癌組織(P=0.025，P=0.001)；eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在臨床Ⅲ+Ⅳ期胃癌組織中的表達高于Ⅰ+Ⅱ期(P=0.001，P=0.049)；eIF-4E和p-4EBP-1表達與患者年齡、性別、分化程度無關(P>0.05，表1)。

表1 eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系

2.3eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌中表達的相關性168例胃癌中，eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌中的表達呈顯著正相關(r=0.432，P<0.01，表2)。

表2 eIF-4E和p-4EBP-1蛋白在胃癌中表達的相關性

Spearman相關性分析，*r=0.432，P<0.01

2.4eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表達與胃癌患者生存時間的相關性Kaplan-Meier生存分析顯示(圖4)，eIF-4E蛋白陰性胃癌患者生存時間明顯高于陽性患者，差異具有顯著性(P=0.012)；而p-4EBP-1蛋白陽性和陰性胃癌患者生存時間差異無統計學意義(P=0.134)。

3 討論

腫瘤的發生常常伴隨多條信號轉導通路的異常激活，eIF-4E是多條信號轉導通路的共同銜接點。文獻報道，eIF-4E的表達上調可以促進多種腫瘤相關蛋白(如VEGF、Cyclin D1、Survivin、c-myc和MMP-9等)表達，與腫瘤發生、發展密切相關。eIF-4E蛋白過表達在多種人類惡性腫瘤(如肺癌、乳腺癌、白血病、卵巢癌和頭頸部癌等)中已被證實，并與惡性轉化及不良預后密切相關，抑制eIF-4E表達可有效抑制腫瘤細胞生長、轉化和侵襲[3-7]。Liang等[8-9]報道，eIF-4E在胃癌組織中的表達遠高于癌旁正常胃組織，這與本組實驗結果相同。但eIF-4E的表達與胃癌臨床病理特征的關系尚存在爭議，本組實驗顯示，eIF-4E在有淋巴結轉移和臨床Ⅲ+Ⅳ期胃癌組織中的表達高于無淋巴結轉移和臨床Ⅰ+Ⅱ期的胃癌組織，Liang等[8]認為eIF-4E表達與淋巴結轉移、臨床分期無關，而與遠處轉移相關。提示eIF-4E可能在胃癌的致癌作用中起重要作用，與胃癌的侵襲和惡性轉化的關系還需進一步證實。

圖4 eIF-4E(A)和p-4EBP-1(B)蛋白表達與胃癌患者生存時間的相關性

4EBP1是負性調控蛋白，受AKT/mTOR信號轉導通路的調控。4EBP1高表達抑制細胞的生長和增殖，而磷酸化4EBP1失去與eIF-4E的結合，從而促進致瘤相關蛋白的合成。許多研究認為Rapamycin 抑制mTOR mRNA的表達，進而抑制4EBP1磷酸化水平，可有效地抑制淋巴瘤、胃癌、骨肉瘤等腫瘤細胞的增殖，誘導其凋亡[4,10-11]。本組結果與Tapia等[9]的研究均顯示p-4EBP-1高表達于胃癌組織，說明p-4EBP-1可能表現出致癌的潛能。本組實驗結果顯示，p-4EBP-1與淋巴結轉移和臨床分期相關，這與Lee等[12]的研究結果一致，說明p-4EBP-1可能在細胞信號轉導通路中起瓶頸作用，在胃癌的臨床進展中起重要作用。對eIF-4E和p-4EBP-1蛋白表達相關性分析顯示，兩者在胃癌組織中的表達呈顯著正相關，且eIF-4E陽性的胃癌組織惡性程度高患者生存時間短。因此，eIF-4E和p-4EBP-1蛋白可能協同促進胃癌的發生、發展，有望為胃癌的臨床診治提供新的分子靶標。作者下一步準備通過體外實驗靶向抑制eIF-4E的活性，探討eIF-4E在胃癌發生、發展中的具體分子機制，從而尋找靶向治療胃癌的新策略。

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ClinicalsignificanceofexpressionofeIF-4Eandp-4EBP-1proteininthegastriccarcinoma

ZHENG Jun1, ZHANG Chun-yan2, ZHANG Yi-qiang1, MA Li-li3, PEI Jin-hong1

(1DepartmentofBiochemistry,ChangzhiMedicalCollege,Changzhi046000,China;2DepartmentofObstetrics,ChangzhiMedicalCollege,Changzhi046000,China;3DepartmentofPathology,ChangzhiMedicalCollege,Changzhi046000,China)

PurposeTo study the expression of eIF-4E and p-4EBP-1 and its clinical significance in the gastric carcinoma.MethodsExpression of eIF-4E and p-4EBP-1 was detected in tissue array including 168 cases of gastric carcinoma and 52 cases of peri-cancer tissues by immunohistochemical SP method.ResultsThe positive expression of eIF-4E and p-4EBP-1 in the gastric carcinoma was significantly higher than that of peri-cancer tissues (P=0.001,P=0.000). There was significantly higher expression of eIF-4E and p-4EBP-1 with lymph node metastases than without lymph node metastases in the gastric carcinoma (P=0.025,P=0.001). Also, there was significantly higher expression of eIF-4E and p-4EBP-1 with clinical stages Ⅲ+Ⅳ than that of stagesⅠ+Ⅱ(P=0.001,P=0.049). In addition, there was a significantly positive correlation between the expression of eIF-4E and p-4EBP-1 in the gastric carcinoma (r=0.432,P<0.01). The overall survival rates for patients with negative expression of eIF-4E protein was higher than that with positive expression (P=0.012).ConclusionThe abnormal co-expression of eIF-4E and p-4EBP-1 may be related to the tumorgenesis, development, metastasis and invasion of gastric carcinoma, and eIF-4E and p-4EBP-1 may act as the new molecular targets for the therapy and diagnosis of gastric carcinoma.

gastric neoplasms; eIF-4E; p-4EBP-1

R 735.2

A

1001-7399(2017)10-1078-04

時間：2017-10-23 13:30 網絡出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20171023.1330.004.html

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.10.004

接受日期：2017-04-09

長治醫學院科技創新項目(CX201502)

1長治醫學院生化教研室，長治 046000

2長治醫學院附屬和平醫院婦科，長治 046000

3長治醫學院病理科，長治 046000

鄭 軍，男，碩士，講師。E-mail: zhengjun8983@163.com

裴晉紅，女，碩士，副教授，通訊作者。E-mail: 13096562305@163.com