高效液相色譜指紋圖譜法在測(cè)定白芍質(zhì)量中的應(yīng)用價(jià)值

高喜鳳

（平?jīng)鍪嗅轻紖^(qū)食藥監(jiān)局，甘肅 平?jīng)?744000）

高效液相色譜指紋圖譜法在測(cè)定白芍質(zhì)量中的應(yīng)用價(jià)值

高喜鳳

（平?jīng)鍪嗅轻紖^(qū)食藥監(jiān)局，甘肅 平?jīng)?744000）

目的：探討高效液相色譜指紋圖譜法在測(cè)定白芍質(zhì)量中的應(yīng)用價(jià)值。方法：采用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定33批白芍樣品，總結(jié)高效液相色譜指紋圖譜法在測(cè)定白芍質(zhì)量中的應(yīng)用價(jià)值。以乙腈（A）與磷酸水溶液（PH值為2.7，B）為流動(dòng)相，在Scincehome C18柱的色譜條件下進(jìn)行梯度脫洗。色譜峰的采集范圍為200～400 nm，檢測(cè)波長為230 nm，溫柱為20℃，進(jìn)樣量為10 μl，流速為1.0 ml/min。結(jié)果：成功獲取白芍高效液相色譜指紋圖譜，指認(rèn)出沒食子酸、兒茶素、4-O-沒食子酰白芍苷、白芍苷、沒食子酸甲酯、6-O-沒食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖和芍藥苷、（1，2，3，4，6）-五沒食子酰基葡萄糖、甲苯酸、6'-O-沒食子酰白芍苷、沒食子酸乙酯共計(jì)10個(gè)峰，且33個(gè)白芍樣品高效液相色譜指紋圖譜的相似度與聚類分析的結(jié)果基本近似。用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍的質(zhì)量具有較強(qiáng)的專屬性和較好的重復(fù)性。結(jié)論：用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍的質(zhì)量具有較強(qiáng)的專屬性和較好的重復(fù)性，既能完善白芍藥品的質(zhì)量控制，同時(shí)也能為科學(xué)評(píng)價(jià)白芍藥品的質(zhì)量提供參考和借鑒。

高效液相色譜指紋圖譜法；白芍質(zhì)量；應(yīng)用價(jià)值

白芍具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、柔肝止痛等功效，常用于治療頭痛、眩暈、脅痛、腹痛、四肢攣痛、月經(jīng)不調(diào)及盜汗諸證。另外，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白芍還具有提高免疫力和調(diào)節(jié)女性內(nèi)分泌的作用[1]。在本次研究中，筆者主要探討高效液相色譜指紋圖譜法在測(cè)定白芍質(zhì)量中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 儀器

配置有Waters600型泵的Waters高效液相色譜儀、配置有四元梯度的洗脫泵、柱溫箱、在線脫氣機(jī)、2996型二極管陣列檢測(cè)器、Empower工作站及KQ3200型超聲波洗滌器。

1.2 試劑與材料

試劑：色譜純乙腈、色譜分析水、分析純乙醇、二氯甲烷、磷酸以及筆者自行分離提取的定性用對(duì)照品白芍苷、沒食子酰芍藥苷、芍藥苷、6-O-沒食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖、苯甲酸、4-O-沒食子酰白芍苷、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、（1，2，3，4，6）-五沒食子酰基葡萄糖、6'-O-沒食子酰白芍苷、兒茶素及沒食子酸。材料：33批白芍樣品均購自國內(nèi)各大藥店。

1.3 白芍指紋圖譜的建立

1.3.1 供試品溶液的制備：精密稱取2 g經(jīng)60目篩篩過的白芍粉末。將20 ml濃度為60%的乙醇加入到上述白芍粉末中進(jìn)行回流處理，間隔2 h提取一次溶液，共提取3次。將3次提取的液體混合在一起，進(jìn)行減壓處理，蒸除其中的乙醇，得到白色粉末。用二氯甲烷與乙酸乙酯對(duì)上述白色粉末進(jìn)行萃取，減壓回收乙酸乙酯萃取液。殘?jiān)靡掖歼M(jìn)行溶解并將其定容至10 ml的容量瓶中，晃動(dòng)搖勻，在0.45 μm的濾網(wǎng)上過濾一遍，留置濾過溶液備用[2]。

1.3.2 色譜條件：色譜柱為Scincehome C18柱，以乙腈（A）與磷酸水溶液（PH值為2.7，B）作為流動(dòng)相。檢測(cè)波長為230 nm，進(jìn)樣量為10 μl，柱溫為20℃，流速為1.0 ml/min。

1.4 白芍主要成分含量的測(cè)定

1.4.1 色譜條件：白芍主要成分含量測(cè)定的色譜條件與1.3.2相同。

1.4.2 制備對(duì)照品溶液：分別精密稱取劑量為9.6 mg的沒食子酸、5.1 mg的白芍苷、2.8 mg的沒食子酸乙酯、1.9 mg的兒茶素、6.4 mg的芍藥苷、1.0 mg的沒食子甲酯。用10 ml容量瓶盛裝上述樣品。用甲醇對(duì)上述樣品進(jìn)行溶解，然后將溶液定容至刻度。將上述溶液搖晃均勻，用0.45 μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾，留取濾過溶液備用。

1.4.3 制備供試品溶液：精密稱取2 g經(jīng)60目篩篩過的白芍粉末。將10 ml濃度為60%的乙醇加入到上述白芍粉末中進(jìn)行回流處理，間隔2 h提取一次溶液，共提取3次。將3次提取的液體混合在一起，進(jìn)行減壓處理，蒸除其中的乙醇，得到白色粉末。分別使用二氯甲烷與乙酸乙酯對(duì)上述白色粉末進(jìn)行萃取，減壓回收乙酸乙酯萃取液。殘?jiān)靡掖歼M(jìn)行溶解并將其定容至10 ml的容量瓶中，晃動(dòng)搖勻，在0.45 μm的濾網(wǎng)上過濾一遍，留置濾過溶液備用。

1.4.4 白芍主要成分含量測(cè)定方法的驗(yàn)證 將0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml、1.6 ml、2.0 ml的對(duì)照品溶液分別裝入10 ml的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，并搖晃均勻。取上述溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣3次，注入高效液相色譜儀中，測(cè)量色譜的峰面積。橫坐標(biāo)取對(duì)照溶液濃度，縱坐標(biāo)取峰面積，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，獲取回歸方程的線性范圍。

2 結(jié)果

2.1 用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍質(zhì)量的專屬性

通過向高效液相色譜儀中注入10 μl的白芍提取溶劑后所獲得的色譜圖得知，測(cè)定白芍樣品并未受到提取溶劑與液相系統(tǒng)的影響，這充分說明用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍的質(zhì)量具有較強(qiáng)的專屬性。

2.2 用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍質(zhì)量的重復(fù)性

參考1.3.1項(xiàng)的操作步驟制備供試品溶液，進(jìn)樣后獲得的色譜圖顯示各共有峰相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的RSD均低于3.0%，這充分說明用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍的質(zhì)量具有較好的重復(fù)性。

2.3 白芍高效液相色譜指紋圖譜的建立

參照1.3.2項(xiàng)的色譜條件依次進(jìn)33批白芍樣品與11批對(duì)照品，獲得相應(yīng)的色譜圖像。指認(rèn)出沒食子酸、兒茶素、4-O-沒食子酰白芍苷、白芍苷、沒食子酸甲酯、6-O-沒食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖和芍藥苷、（1，2，3，4，6）-五沒食子酰基葡萄糖、甲苯酸、6'-O-沒食子酰白芍苷、沒食子酸乙酯共計(jì)10個(gè)峰。

2.4 白芍樣品高效液相色譜指紋圖譜的相似度

參照1.3.1項(xiàng)的操作方法將33批白芍樣品制備成供試品溶液，根據(jù)各樣本圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度可將這33批白芍樣品的相似度分為相似度在0.750～1.00之間（第1類）與相似度低于0.750（第2類）兩種。

2.5 白芍樣品的聚類分析

分析33批白芍樣品的指紋圖譜，對(duì)各指紋圖譜相對(duì)于樣品稱樣量的表觀含量進(jìn)行計(jì)算，得到9×33階原始數(shù)據(jù)矩陣。據(jù)此矩陣得知33批白芍樣品分布在九維特征空間，同類相聚，異類相分。聚類分析顯示白芍樣品可分兩大類，S1、S4～S30、S32、S33為第1類樣品，S2、S3、S31為第2類樣品。第1類樣品的質(zhì)量良好，化學(xué)成分相似；第2類樣品化學(xué)成分的差異較大，質(zhì)量一般。

2.6 用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍樣品中6種化合物的回歸方程與線性范圍

用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍樣品中6種化合物的回歸方程與線性范圍詳見表1。

表1 用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍樣品中6種化合物的回歸方程與線性范圍

3 討論

白芍的有效成分主要包括芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等。但這些有效成分的含量受白芍的產(chǎn)地、采收時(shí)間、品種、氣候、加工方法等多種因素的影響。因此，采用有效的方法對(duì)白芍進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)十分必要[3]。近年來的臨床研究表明，用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍質(zhì)量的效果顯著。

本次研究的結(jié)果證實(shí)，用高效液相色譜指紋圖譜法測(cè)定白芍的質(zhì)量具有較強(qiáng)的專屬性和較好的重復(fù)性，既能完善白芍藥品的質(zhì)量控制，同時(shí)也能為科學(xué)評(píng)價(jià)白芍藥品的質(zhì)量提供參考和借鑒。

[1] 嚴(yán)倩茹,鄔偉魁.基于HPLC指紋圖譜技術(shù)的白芍及其制劑質(zhì)量控制[J].中國執(zhí)業(yè)藥師,2016,13(11)：35-38.

[2] 童黃錦,白發(fā)平,汪小莉,等.不同產(chǎn)地白芍藥品的指紋圖譜研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào) ,2014,29(9)：1326-1329.

[3] 馬玉,郭力,黃玉慧,等.白芍原藥材與不同炮制加工品的高效液相色譜對(duì)比研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,35(4)：42-45.

R927.2

B

2095-7629-（2017）14-0069-03

高喜鳳，女，1974年4月出生，甘肅平?jīng)鋈耍究茖W(xué)歷，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴庤b定與制劑