杭白菊提 取物效應成分木犀草素和芹菜素在大鼠肝組織中分布情況的測定方法

陳 婷

（杭州醫學院藥學院，浙江 杭州 310053）

杭白菊提 取物效應成分木犀草素和芹菜素在大鼠肝組織中分布情況的測定方法

陳 婷

（杭州醫學院藥學院，浙江 杭州 310053）

目的：分析用HPLC（高效液相色譜）法測定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的效果。方法：對大鼠的肝組織進行處理，并用HPLC法測定其肝組織中木犀草素和芹菜素的水平。結果：用HPLC法測定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的準確度、精密度及專屬性均符合要求。結論：用HPLC法可準確、靈敏地測定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素的水平。

杭白菊提取物；高效液相色譜法；木犀草素；芹菜素

杭白菊（Chrysanthemum morifolium Ramat，CME）是一種菊科多年生草本植物的頭狀花序，多產于浙江桐鄉、海寧、嘉興等地。中醫認為，杭白菊具有疏風散熱、養肝明目、清心補腎的功效。現代藥理學研究證實，杭白菊提取物具有抗氧化、抗炎、保護心血管和抗癌等作用[1-4]。木犀草素和芹菜素是杭白菊提取物的主要效應成分。為了分析用HPLC法測定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的效果，筆者進行了以下研究。

1 實驗儀器、藥品和實驗動物

1.1 實驗儀器

1）Agilent 1100型高效液相色譜儀。2）Spectra Max M2型熒光分光光度儀。

1.2 實驗藥品

1）木犀草素對照品和芹菜素對照品（均由中國藥品生物制品檢定所提供，對照品純度＞99%）。2）杭白菊提取物。

1.3 實驗動物

Sprague-Dawley大鼠，雄性，體重為200～230 g（由浙江醫學科學院實驗動物中心提供，動物質量合格證：醫動字第22-2001001號）。嚴格按照實驗動物的飼養、管理標準對大鼠進行飼養和管理。飼養、管理方法是：將大鼠置于溫度為22±2 ℃、濕度為50±10%的空調間內進行飼養。在實驗前12 h，對大鼠進行禁食處理。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

1）分析柱為Agilent SB-C18型分析柱 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm)。2）保護柱為Agilent SB-C18型保護柱(10 mm× 4.6 mm, 5 μm)。3）流動相為甲醇、乙腈和0.2%的磷酸溶液(35：10：55，v/v/v)。4）檢測流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為350 nm，檢測柱溫為30 ℃，進樣量為50 μl。

2.2 對照品混合液的制備

用甲醇將適量的木犀草素對照品配制成508.0 μg·mL-1的木犀草素對照品單一儲備液。用甲醇將適量的芹菜素對照品配制成502.0 μg·mL-1的芹菜素對照品單一儲備液。2）用甲醇將木犀草素對照品單一儲備液和芹菜素對照品單一儲備液稀釋成不同濃度的對照品混合液將上述對照品混合液置于4℃的低溫箱中待用。

2.3 大鼠肝組織樣品的采集

采用腹主動脈放血法處死大鼠，迅速取出其肝組織，并將其肝組織置于生理鹽水中。2）將肝組織從生理鹽水中取出，用濾紙吸干肝組織表面上的水分，然后對其進行稱重。3）用生理鹽水將肝組織制成肝組織勻漿液，并將肝組織勻漿液置于－20 ℃的低溫箱中待用。

2.4 肝組織勻漿液的預處理

1）將1.0 ml濃度為6.0 mol·L-1的鹽酸溶液緩慢加入到0.5 ml的肝組織勻漿液中，邊加邊漩渦振蕩肝組織勻漿液。2）對肝組織勻漿液進行80 ℃的水浴水解，并不時對其進行振搖。1.5 h后，將肝組織勻漿液置于冰浴中冷卻。3）在肝組織勻漿液中加入3.0 ml的提取溶劑（乙酸乙酯：正己烷＝80：20），并對肝組織勻漿液進行5 min的漩渦振蕩。3）對肝組織勻漿液進行10 min的離心處理，離心速度為3500 rpm。4）完成離心處理后，取肝組織勻漿液的上清液2.0 ml。

2.5 測定方法

用HPLC法測定肝組織勻漿液中木犀草素和芹菜素的水平。

3 實驗結果

3.1 系統適用性試驗結果

木犀草素和芹菜素的理論板數均不低于8000，兩者的分離度均符合要求（大于1.5），兩者儀器精密度試驗的RSD分別為0.88%和0.89%。

3.2 肝組織樣品中木犀草素和芹菜素水平測定方法的專屬性

在本實驗的色譜條件下，木犀草素和芹菜素的分離度良好，組織樣品中內源性物質不干擾測定結果，可確保分析方法的專屬性。

3.3 測定肝組織樣品中木犀草素和芹菜素水平的標準曲線

測定木犀草素的標準曲線為A＝0.7557C-20.52（n=7,r=0.9993），線性范圍為27.60～1473ng·mL-1。測定芹菜素的標準曲線為A＝0.7933C-0.7063（n=7, r=0.9998）,線性范圍為28.20～1506ng·mL-1。

3.4 肝組織樣品中木犀草素和芹菜素的回收率和測定精密度

理論濃度為110.5 ng·mL-1的木犀草素溶液中木犀草素的絕對回收率為77.9%，方法回收率為97.3%，日內測定精密度為5.1%，日間測定精密度為4.3%。理論濃度為442.0 ng·mL-1的木犀草素溶液中木犀草素的絕對回收率為72.9%，方法回收率為95.0%，日內測定精密度為2.9%，日間測定精密度為2.6%。理論濃度為1104 ng·mL-1的木犀草素溶液中木犀草素的絕對回收率為74.3%，方法回收率為103.8%，日內測定精密度為1.6%，日間測定精密度為1.3%。理論濃度為113.0 ng·mL-1的芹菜素溶液中芹菜素的絕對回收率為77.5%，方法回收率為96.4%，日內測定精密度為5.0%，日間測定精密度為4.3%。理論濃度為451.8 ng·mL-1的芹菜素溶液中芹菜素的絕對回收率為73.5%，方法回收率為95.9%，日內測定精密度為4.1%，日間測定精密度為4.8%。理論濃度為1130 ng·mL-1的芹菜素溶液中芹菜素的絕對回收率為76.4%，方法回收率為102.4%，日內測定精密度為1.6%，日間測定精密度為3.4%。詳見表1。

表1 肝組織樣品中木犀草素和芹菜素的回收率和測定精密度 (n=5)Tab 1 Recovery and precision for luteolin and apigenin in liver sample（n=5）

4 討論

杭白菊是一種菊科多年生草本植物的頭狀花序。木犀草素和芹菜素是杭白菊提取物的主要效應成分。為了分析用HPLC法測定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的效果，筆者對SD大鼠的肝組織進行處理，并用HPLC法測定其肝組織中木犀草素和芹菜素的水平。本次研究的結果顯示，用HPLC法測定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素水平的準確度、精密度及專屬性均符合要求。

綜上所述，用HPLC法可準確、靈敏地測定大鼠肝組織中木犀草素和芹菜素的水平。

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R917

B

2095-7629-（2017）14-0149-02

浙江醫學高等專科學校科研項目（菊花提取物（CME）效應成分的分布和代謝物研究2009XZA02）

陳婷，女，1982年10月出生，浙江杭州人，漢族，碩士學位，副教授，研究方向為藥物分析