HPV E6/E7 mRNA與HPV—DNA檢測技術在宮頸病變篩查中的診斷效度比較

沈麗蕊　游平弟　毛瑛玉　王海月　吳秋珍　韋翠花

【摘要】 目的：比較HPV E6/E7 mRNA與HPV-DNA兩種檢測技術在宮頸病變篩查中的臨床效度。方法：回顧性分析筆者所在醫院婦產科門診在筆者所在科行HPV檢測并行組織活檢病理學檢查的患者826例，其中HPV E6/E7 mRNA組420例，HPV-DNA組406例，比較兩組方法在篩查CIN1及以上病變的陽性率、靈敏度、特異度。結果：兩種方法在篩查CIN1及以上病變的陽性率的效果相當，兩組間陽性率比較差異無統計學意義（P>0.05），而HPV E6/E7 mRNA檢測組的靈敏度（96.1%）高于HPV-DNA組（90.9%），特異度（89.4%）明顯高于HPV-DNA組（71.4%），兩組間靈敏度及特異度比較，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：HPV E6/E7 mRNA作為一種新型的檢測技術，其假陽性率低，結果更靠性切實，更能精準地篩查宮頸癌前病變，值得臨床推廣應用。

【關鍵詞】 HPV E6/E7 mRNA檢測； HPV-DNA檢測； 宮頸癌前病變； 效度

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.29.037 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）29-0075-03

The Diagnostic Validity of HPV E6/E7 mRNA and HPV-DNA Testing in Screening of Cervical Lesions/SHEN Li-rui，YOU Ping-di，MAO Ying-yu，et al.//Chinese and Foreign Medical Research，2017，15（29）：75-77

【Abstract】 Objective：To compare the clinical validity of HPV E6/E7 mRNA and HPV-DNA in screening of cervical lesions.Method：Regression analysis outpatient obstetrics and gynecology hospital in our department of HPV testing in parallel biopsy pathology examination of 826 cases，including HPV E6/E7 mRNA group 420 cases，HPV DNA-group 406 examples.The positive rate，sensitivity and specificity of the two groups were compared in the screening of CIN1 and above lesions.Result：The effect of two methods on the screening of the positive rate of CIN1 and above lesions was comparable，the positive rate comparison between the two groups had no statistical significance（P>0.05），and HPV E6/E7 mRNA detection sensitivity（96.1%） than HPV-DNA group（90.9%），specific degrees（89.4%） were significantly higher than those of HPV-DNA group（71.4%），sensitivity and specific comparison between the two groups， the significant difference（P<0.05）.Conclusion：HPV E6/E7 mRNA as a new kind of detection technology，has low false positive rate，and results in more sexual and accurate screening of precancerous lesions，which is worthy of clinical application.

【Key words】 HPV E6/E7 mRNA detection； HPV-DNA testing； Precancerous lesion； Validity

First-authors address：The Affiliated Mindong Hospital of Fujian Medical University，Fuan 355000，China

宮頸癌是女性婦科疾病中最常見惡性腫瘤疾病之一，其發病率高居第二位[1]，給女性身心健康帶來極大威脅。對宮頸癌前病變進行準確的早期篩查及合理地干預是降低宮頸癌發生率的有效方法。因而對其進行早期篩查需要更有效的篩查技術。目前研究表明，高危型HPV感染與宮頸癌密切相關[2-3]，而HPV E6/E7 mRNA檢測作為一種宮頸癌前病變早期篩查的新型技術，是否更適合于宮頸癌前病變的初篩手段仍有待于進一步研究，故本研究回顧性分析閩東地區826例宮頸病變患者的資料，比較兩組檢測方法在宮頸癌病變早期篩查中的臨床診斷效度。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究回顧性搜集筆者所在醫院2014年8月-2017年1月在閩東地區婦科門診就診并行HPV E6/E7 mRNA及HPV-DNA檢測，并有行組織病理學檢查及診斷結論的826例患者，年齡20～60歲，平均（39.5±9.1）歲，不包括妊娠患者，將826例患者分為HPV E6/E7 mNRA組420例，年齡23～55歲，平均（39.05±10.10）歲及HPV-DNA組406例，年齡25～58歲，平均（40.02±9.30）歲。本研究收集患者的年齡、吸煙情況、飲酒情況、分娩次數（≥2次）、人流次數（≥1次）、有性生活3年以上等資料，并對以上資料進行比較，兩組患者年齡、吸煙情況、飲酒情況等基本資料間比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表1。endprint

1.2 納入、排除標準

1.2.1 納入標準 （1）HPV E6/E7 mRNA、HPV-DNA檢測及陰道鏡下宮頸活檢均在筆者所在醫院進行；（2）無子宮切除史、宮頸手術史、盆腔放化療史及HPV感染治療史；（3）無臨床妊娠癥狀或妊娠結束8周以上者。

1.2.2 排除標準 （1）病例資料完整低于80%；（2）月經期、嚴重內外科疾病或無法配合調查者；（3）既往有宮頸局部不明腫瘤病史或宮頸癌史或標本量過少或標本不合格者。

1.3 方法

1.3.1 樣本采取 按照知情同意原則，患者須被告知并自愿接受檢查，患者行HPV E6/E7 mRNA及HPV-DNA檢測需符合以下條件：檢查前3 d內避免行陰道鏡檢查及放置陰道內栓劑；檢查前24 h內避免性生活；檢查者應在非月經期內進行。宮頸脫落細胞標本均由有經驗的婦產科醫師采集的。將宮頸刷緊貼宮頸口黏膜，沿著順時針方向用宮頸刷旋轉6～8圈，然后將宮頸刷放入細胞保存液中充分漂洗后丟棄，裝入有專用收集瓶內，旋緊瓶蓋，寫好患者姓名及編號備用，放置4 ℃冰箱保存待檢。

1.3.2 檢測方法 HPV-DNA檢測，應用HPV-DNA專用試劑盒進行分型檢測，將細胞保存液中HPV提取后進行PCR擴增和導流雜交，所有步驟均嚴格按照操作手冊進行檢測；另外E6/E7 mRNA檢測采用Gen-Probe Technology and the PANTHER System進行檢測。將HPV保存液中的HPV提取后采用E6/E7 mRNA試劑盒進行檢測，其結果為光子數，利用計算機軟件判斷結果，低風險（<4000拷貝）；中度風險（4000～10 000拷貝）；高度風險（>10 000拷貝），將低風險以上的病例定為陽性。

1.3.3 其他 所有患者均用陰道鏡下多點活檢，然后進行病理組織學檢查，然后根據病理結果進行分型。

1.4 統計學處理

對本研究臨床資料的所有數據均采用SPSS 18.0系統進行統計學分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，計數資料采用字2檢驗，檢驗水準設定為0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

HPV E6/E7 mRNA組及HPV-DNA組對CIN1及以上類型診斷的陽性率分別為75.9%及73.1%。，兩組間陽性率比較差異無統計學意義（P>0.05）。從方法學方面比較，HPV E6/E7 mRNA組的靈敏度為96.1%，特異度為89.4%；而HPV-DNA組靈敏度為90.9%，特異度為71.4%；與HPV-DNA組相比較，HPV E6/E7 mRNA組的靈敏度及特異度更高，差異有統計學意義（P<0.05）；另外HPV E6/E7 mRNA組假陽性率明顯低于HPV-DNA組，兩者相比差異有統計學意義（P<0.05），見表2和表3。

3 討論

目前宮頸癌是女性生殖系統中最容易發生病變的腫瘤，其發病率高居第二位，對女性身心健康帶來極大威脅，對社會生活帶來嚴重負擔，根據有關資料統計，在美國14～60歲的女性當中有2900萬患者感染HPV，且超過80%的女性在50歲前有關獲得感染機會[4]。另外大量資料研究顯示，宮頸疾病發生發展與HPV感染密切相關[5]。因此宮頸疾病發病率雖然較高，但是可以通過預防及早期診斷篩查來降低其發生率，隨著人們對宮頸疾病認識研究不斷深入，通過阻斷宮頸上皮內瘤樣變向宮頸癌發展的過程以降低宮頸癌發病率已經取得不錯效果，那么如何通過一種切實可行的技術手段來早期發現癌前病變，以提高診斷陽性率，同時降低漏診概率，這是業內研究及關注焦點。

有研究顯示，接近90%CIN患者多有HPV感染，大約20%有性生活婦女感染HPV，如果在吸煙、性傳播疾病等因素作用下，HPV持續感染能夠誘使宮頸上皮發生內瘤變甚至癌變[6]。但Crosbie等[7-8]表示其感染多不能持久，且90%以上的感染均是一過性，常可自然消退而不伴臨床癥狀。本研究顯示，HPV E6/E7 mRNA檢測技術比起HPV-DNA技術有更高臨床敏感性（P<0.05），可實現對CIN2等高級別癌前病變檢出，且其特異性明顯高于HPV-DNA技術（P<0.05），大大地減少“假陽性”結果出現概率，也由此更大程度減少給患者帶來心理負擔等不必要麻煩。另外單項HPV-DNA檢測的靈敏度偏低，與HPV E6/E7 mRNA技術相比，漏診率高（P<0.05），不適于單獨應用宮頸癌前病變篩查，故當前更推薦兩種檢測技術聯合應用，這與相關臨床研究結果顯示一致[9]。

大量研究顯示，高危型HPV病毒存在，不一定會導致細胞發生癌變，只有大量HPV病毒被持續轉錄成E6/E7 mRNA時，才能大量表達癌蛋白，誘發細胞癌變的風險成倍增加[10-11]。由此可見E6/E7 mRNA是病毒兩個致癌基因“活躍程度”的重要指標，其含量可以明確地反應致癌基因的活動程度，可以更直觀的評估宮頸癌發生風險及評估預后[12-13]。另外本研究顯示，HPV E6/E7 mRNA檢測技術有更高特異性及更少假陽性，因此，HPV E6/E7 mRNA檢測作為一種新型技術，能更加精準地篩查病變，有效降低一過性感染率檢出，對于宮頸癌前病變的篩查具有重要臨床意義，值得推廣應用。

參考文獻

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（收稿日期：2017-06-11）endprint