杞黃顆粒對大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型組織中ICAM-1蛋白及mRNA表達水平的探討

關(guān)玉雙 梁鳳鳴 王莉 王燕 黎紅梅 王瑩瑩 全穎

·實驗研究·

杞黃顆粒對大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型組織中ICAM-1蛋白及mRNA表達水平的探討

關(guān)玉雙1梁鳳鳴1王莉1王燕2黎紅梅1王瑩瑩1全穎1

目的探討杞黃顆粒對激光誘導(dǎo)脈絡(luò)膜新生血管模型大鼠視網(wǎng)膜色素上皮層(RPE)一脈絡(luò)膜一鞏膜復(fù)合體ICAM-1蛋白含量及其mRNA表達水平的影響。方法選取BN大鼠81只,隨機選取13只為空白對照組,余68只大鼠右眼利用倍率532nm激光(功率300nw、曝光時間0.05s、光斑大小50um)光凝,建立CNV模型。光凝7天后,隨機選取3只大鼠,行FFA和OCT檢查,經(jīng)心臟灌注處死,分別做RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體鋪片檢測CNV的面積,驗證大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型形成。余下65只造模大鼠隨機分為五組,即杞黃顆粒A組、杞黃顆粒B組、雷珠單抗組、杞黃顆粒+雷珠單抗組,模型組。造模成功后開始給藥,用藥60天后總結(jié),杞黃顆粒B組用藥90天總結(jié)。實驗結(jié)束采用心臟灌注處死,摘除右眼球,提取RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體,應(yīng)用Western blot技術(shù)分析ICAM-1蛋白含量,用Real-time PCR獲取ICAM-1 mRNA表達水平。結(jié)果激光誘導(dǎo)大鼠CNV模型組織形成過程中ICAM-1蛋白的表達,5組ICAM-1/tublin差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=22.798,P<0.01);空白對照組ICAM-1/tublin均低于其他各組(P<0.01);模型組,杞黃顆粒組ICAM-1/tublin均高于杞黃顆粒+雷珠單抗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);杞黃顆粒+雷珠單抗組、空白對照組、雷珠單抗組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);杞黃顆粒組和雷珠單抗組ICAM-1/tublin相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);60d杞黃顆粒組和90d杞黃顆粒組ICAM-1/tublin相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)?？瞻讓φ战MICAM-1mRNA表達均低于其他各組(P<0.01);模型組,杞黃顆粒組和雷珠單抗組ICAM-1mRNA表達均高于杞黃顆粒+雷珠單抗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);杞黃顆粒組和雷珠單抗組ICAM-1基因表達相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);90d杞黃顆粒組ICAM-1表達低于60d杞黃顆粒組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論ICAM-1在CNV中存在高表達。雷珠單抗對ICAM-1的高表達有抑制作用,杞黃顆粒+雷珠單抗長時間聯(lián)合使用的效果更好。

杞黃顆粒; 脈絡(luò)膜新生血管; ICAM-1

脈絡(luò)膜新生血管(Choroidal neovascularization,CNV)對視網(wǎng)膜破壞嚴重,常致視力不可逆下降或喪失,為多種眼底疾病的最終結(jié)局,主要發(fā)生CNV的眼底病如年齡相關(guān)性黃斑變性(Age-related macular degeneration,AMD)現(xiàn)已經(jīng)成為西方國家的首要致盲病因,我國發(fā)病率也逐年升高[1-2]。CNV的形成機制尚未完全闡明,已有研究發(fā)現(xiàn)主要有多種細胞因子、細胞外基質(zhì)參與CNV的形成過程,這些新生血管生長因子包括血管內(nèi)皮生長因子(vascular en- dothelial growth factor,VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子、色素上皮衍生因子、胰島素樣生長因子、粒細胞集落刺激因子、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子和其他一些炎性細胞因子等[3-5]。近年發(fā)現(xiàn)VEGF受到上下游通路缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)、細胞間粘附分子-1(ICAM-1)等多因素調(diào)控。本實驗通過建立CNV模型,觀察杞黃顆粒對RPE一脈絡(luò)膜一鞏膜復(fù)合體ICAM-1蛋白含量和基因表達水平的影響。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1動物

健康雄性BN大鼠81只,體重200～250g,北京維通利華實驗動物有限公司提供,實驗前雙眼前節(jié)和眼底檢查均正常。每只大鼠隨機取右眼為實驗眼,左眼為對照眼。

1.1.2儀器設(shè)備

532nm 倍頻Ng YAG激光器(法國Quantel Medical公司);熒光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)和吲哚菁綠血管造影(indocyanine green angiography,ICGA)攝像機(德國Heidelberg公司);光學(xué)相干斷層掃描儀(OCT,德國Heidelberg公司),LV 100激光共焦顯微鏡(日本 Olympus公司);蔡司200眼科手術(shù)顯微鏡等。

1.1.3試劑

復(fù)方托吡卡胺滴眼液(卓比安,沈陽興齊眼藥股份有限公司),1%戊巴比妥鈉(上海泰瑞爾生物技術(shù)有限公司),若丹明標記的蓖麻子凝集素(美國Vector公司),10%熒光素鈉注射液(廣州白云山明興制藥有限公司),吲哚菁綠注射液(河南新華化工貿(mào)易公司),雷珠單抗注射液(Lucentis,Genentech公司),HFI-1一抗、VEGF一抗、ICAM-1一抗(Proteintech公司)等。

1.2 方法

1.2.1CNV動物模型的建立及驗證

選體重200～250g健康雄性BN大鼠81只,隨機選取13只為空白對照組,其余68只大鼠均利用倍率532nm激光(功率300nw、曝光時間0.05s、光斑大小50um)光凝方法,經(jīng)1%戊巴比妥鈉(45mg/kg)腹腔注射麻醉,復(fù)方托吡卡胺滴眼液充分散瞳后,通過裂隙燈和載玻片將倍頻532nm激光導(dǎo)入大鼠眼內(nèi)。避開大血管,每眼距視盤1.5～2.0PD圍繞視盤在視網(wǎng)膜血管之間光凝10個點,激光功率300mw,光凝斑直徑50um,光凝時間0.05S。以光凝后有氣泡產(chǎn)生為度,表示已擊破Bruch膜。造模后第7天,68只大鼠中隨機選取3只大鼠,均行OCT、FFA驗證CNV形成。

1.2.2FFA和OCT檢測

分別于光凝后每組隨機抽取3只大鼠,散瞳及麻醉后,麻醉方法同前,腹腔內(nèi)注射10%熒光素鈉注射液1ml/kg,立即通過德國海德堡眼底血管造影儀連續(xù)觀察,觀察時間為30min,觀察時間點分別為2min,5min,15min,30min。OCT檢查采用視網(wǎng)膜顳側(cè)后極部和視盤中心連線的直線橫向線性掃描,長度2.8mm,深度2mm,每只眼睛重復(fù)5次,以觀察CNV滲漏情況。

1.2.3病理鋪片制作及觀察

3只模型大鼠過量麻醉大鼠,經(jīng)心臟灌注400mL生理鹽水和400mL4%多聚甲醛,摘除右眼球,在4%多聚甲醛中后同定30min,然后置PBS中2h。顯微鏡下去除角膜、晶狀體和視網(wǎng)膜神經(jīng)感覺層。在剩余的RPE一脈絡(luò)膜一鞏膜復(fù)合體做6～8個放射狀切口,使之展平。將鋪片置于1%Triton X-100中室溫放置24h。接著與若丹明標記的蓖麻子凝集素(1:1000)在室溫下避光孵育24h。最后于TBS緩沖液中避光洗滌24h。將鋪片在載玻片上展平,水性封片劑封片后激光共焦顯微鏡下觀察并拍照。

1.2.4動物分組及給藥

除驗證CNV模型成立3只大鼠外,剩余65只模型BN大鼠隨機分為5組,即杞黃顆粒A組、杞黃顆粒B組、雷珠單抗組、杞黃顆粒+雷珠單抗組、模型組。每組均13只。造模后7天開始給藥,用藥2個月后總結(jié)。杞黃顆粒B組用藥90天后總結(jié)。空白對照組、模型組用生理鹽水灌胃,每日1次,每日用量不超過2ml,灌胃周期60天;杞黃顆粒組和杞黃顆粒+雷珠單抗組均行杞黃顆粒灌胃,每日1次,每次每只鼠杞黃顆粒藥量為1g,溶解于水中,灌胃量以1ml/100g體重,以每只鼠灌胃量不超過2ml為標準;雷珠單抗組、杞黃顆粒+雷珠單抗組在造模后行玻璃體內(nèi)注射雷珠單抗注射液,每月1次,注藥量3UL/眼,周期為60天,共計注藥3次。

1.2.5免疫組織化學(xué)檢測

具體步驟如下:(1)配制分離膠為10%的SDS-PAGE凝膠(下層分離膠,單面),混勻后,迅速灌膠至玻璃板總高度的約2/3位置,而后在凝膠上方加入水飽和正丁醇1 mL以保證凝膠上層的平整,靜置待膠凝固。(2)配制SDS變性5%聚丙烯酰胺凝膠(上層積層膠,單面),混勻后,迅速灌膠至填滿玻璃板,插入梳子,靜置待膠凝固。電泳前拔去梳子,將凝膠置于1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液中,并用注射器針頭吹凈上樣孔。(3)將蛋白樣品與5×上樣緩沖液(含β-巰基乙醇)混合后,煮沸變性5 min,冰浴5 min。取合適量的蛋白樣品上樣,進行SDS變性10%聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),直至目的蛋白有效分離后停止電泳。(4)電轉(zhuǎn)膜:電泳分離后的蛋白電轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上(Millipore,USA),100mA,90min。(5)封閉:將硝酸纖維素膜做標記以區(qū)分正反面及左右側(cè),浸入Blotto 封閉液中,室溫搖床上輕輕搖動2小時。(6)與一抗的結(jié)合:將膜置于含對應(yīng)一抗的Blotto中在搖床上4℃輕輕搖動過夜。(7)在1×TBST中搖動浸洗3次×5分鐘,洗去非特異結(jié)合的一抗。(8)與二抗的結(jié)合:將膜浸入含相應(yīng)HRP-羊抗兔IgG的Blotto中,室溫輕輕搖動2h。(9)在1×TBST中搖動浸洗3次×5分鐘,洗去非特異結(jié)合的二抗。(10)最后用Western Lightning○R-ECL,Enhanced Chemiluminescence Substrate(Perkin Elmer,NEL100001EA)檢測,顯影。(11)立即將膜置于曝光盒中,并在暗室中對感光膠片進行曝光1 min,而后進行顯影、定影處理。(12)膠片用LabWorksTM凝膠成像及分析系統(tǒng)進行攝像,分析各條帶的亮度值并繪制柱狀圖。

1.2.6RT-PCR分析ICAM-1的mRNA表達水平

杞黃顆粒B組造模90天,余各組干預(yù)60天,處死方法同前,以同樣方法獲取RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體。用紫外分光光度法測定RNA純度及濃度,mRNA的A260/A280的值均在1.8～2.0范圍內(nèi)。取1μg樣品,進行1%瓊脂糖電泳。80V,10～15分鐘。取2ug RNA運用Promega MMLV返轉(zhuǎn)錄酶(Cat No: 9PIM170)及相關(guān)試劑進行返轉(zhuǎn)錄反應(yīng),將總RNA反轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的DNA。

運用Primer Premier 5.0軟件,設(shè)計引物擴增ICAM-1、β-actin的部分CDS區(qū)。ICAM-1-S:5'-CTGCCTCAGGGATCCGTAAAG-3',ICAM-1-AS:5'-CCTCTGCCTCAGGAATGACAT-3',產(chǎn)物長度應(yīng)為299bp。β-actin-S:5'-GCTATTTGGCGCTGGACTT-3',β-actin -AS:5'-GCGGCTCGTAGCTCTTCTC-3',產(chǎn)物長度應(yīng)為78bp。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)采用計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示,組間均值差異性采用軟件進行t檢驗分析。計量資料進行F檢驗,用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析,P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FFA和OCT的觀察

腹腔注入熒光素鈉約2min后開始顯影,正常BN大鼠視網(wǎng)膜血管充盈呈放射狀,光凝后2周,FFA顯示光凝斑中CNV陽性部分為動脈早期呈現(xiàn)血管性強熒光,且造影后期熒光素持續(xù)增強擴散的高熒光區(qū)。OCT可見團塊或不規(guī)則高反射灶。見圖1,圖2。

圖1 FFA檢查示光斑處CNV滲漏情況

圖2 OCT檢查眼底所見

2.2 檢測ICAM-1的蛋白表達:見表1,表2,圖3,圖4

2.2.160天各組ICAM-1的蛋白表達采用單因素方差分析,5組ICAM-1/tublin差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=22.798,P<0.01)。模型組,杞黃組,雷珠單抗組ICAM-1/tublin均高于空白對照組(P<0.01),模型組,杞黃組ICAM-1/tublin均高于杞黃顆粒+雷珠單抗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),杞黃顆粒+雷珠單抗組跟空白對照組和雷珠單抗組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

2.2.260天與90天杞黃顆粒組ICAM-1的蛋白表達采用兩獨立樣本t檢驗,60d杞黃和90d杞黃ICAM-1/tublin相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表1 60天各組RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體ICAM-1蛋白含量比較

注：與空白對照組比較,☆P<0.01;與杞黃顆粒+雷珠單抗組比較,△P<0.01

表2 60天與90天杞黃顆粒組ICAM-1蛋白含量比較

2.2.360天各組兩兩比較ICAM-1的蛋白表達

空白對照組與模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.01);空白對照組與杞黃顆粒組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.01);空白對照組與雷珠單抗組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002<0.01);空白對照組與杞黃顆粒+雷珠單抗組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.148>0.05);杞黃+雷抗組與模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.01);杞黃+雷抗組與杞黃顆粒組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.06>0.05);杞黃+雷抗組與雷抗組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.070>0.05);杞黃顆粒組和雷珠單抗組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.307>0.05)。

2.3 檢測ICAM-1的mRNA表達水平：見表3,表4,圖5,圖6。

2.3.160天各組RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體mRNA表達采用單因素方差分析,5組ICAM-1表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=55.396,P<0.01)。模型組,杞黃顆粒組,雷珠單抗組和杞黃顆粒+雷珠單抗組ICAM-1表達均高于空白對照組(P<0.01),模型組,杞黃顆粒組和雷珠單抗組ICAM-1表達均高于杞黃顆粒+雷珠單抗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

圖3 60天各組RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體中ICAM-1的蛋白表達

圖4 60天與90天杞黃顆粒組RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體中ICAM-1蛋白的表達

表3 60天各組RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體mRNA表達比較

注：與空白對照組比較,☆P<0.01;與杞黃顆粒+雷珠單抗組比較,△P<0.01

2.3.260天與90天杞黃顆粒組RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體mRNA表達采用兩獨立樣本t檢驗,90d杞黃ICAM-1表達低于60d杞黃,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

表4 60天與90天杞黃顆粒組mRNA表達比較

2.3.360天各組兩兩比較RPE-脈絡(luò)膜-鞏膜復(fù)合體mRNA表達

空白對照組與模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.01);空白對照組與杞黃顆粒組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.01);空白對照組與雷珠單抗組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.01);空白對照組與杞黃顆粒+雷珠單抗組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.010<0.05);杞黃+雷抗組與模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.01);杞黃+雷抗組與杞黃顆粒組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.01);杞黃+雷抗組與雷抗組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.013<0.05);杞黃顆粒組和雷珠單抗組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000<0.01)。

圖5 60天各組ICAM-1的表達

3 討論

目前發(fā)現(xiàn)VEGF下游調(diào)控因子有ICAM-1和骨髓來源細胞(BMCs),其中ICAM-1為主要的下游調(diào)控因子。ICAM-1是一種具有廣泛生物學(xué)活性的免疫調(diào)節(jié)因子[6]。在VEGF調(diào)控下,ICAM-1介導(dǎo)中性粒細胞的粘附,釋放各種酶和自由基,增加血管通透性并損傷內(nèi)皮細胞,最終導(dǎo)致CNV形成。VEGF是一種促炎細胞因子,在增加血管滲透性及新生血管形成過程中發(fā)揮重要作用。玻璃體腔注射VEGF可以誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜組織白細胞聚集,內(nèi)皮細胞黏附增強,血管通透性增加,毛細血管無灌注,同時引起視網(wǎng)膜組織中ICAM-1水平升高,VEGF一方面可能通過增加視網(wǎng)膜ICAM-1的表達,使白細胞黏附于視網(wǎng)膜血管,從而引起血管破壞;另一方面可能通過加強主動運輸誘血管滲透性增加[7]。

中醫(yī)認為,CNV形成主要與肝火旺,腎精虧,以致氣虛無以攝血,陰虧血熱妄行所致[8]。然而CNV屬于“血證”“久病入絡(luò)”、“敗絡(luò)叢生”,為惡證,預(yù)后不良。杞黃顆粒方藥主要成分是枸杞子,楮實子,茺蔚子,丹參等。梁鳳鳴教授認為方中枸杞子補肝益腎兼以明目,楮實子,茺蔚子以清肝明目,丹參等藥等活血化瘀理念貫穿始終,從而達到標本兼治的目的[9]。應(yīng)用杞黃顆粒能使眼脈通暢,敗絡(luò)消退,則脈絡(luò)膜新生血管有望得到良好防治。

本實驗中90d杞黃顆粒組ICAM-1表達低于60d杞黃顆粒組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.928,P<0.01),提示使用杞黃顆粒90天對于改善CNV有一定的作用。杞黃顆粒組,雷珠單抗組和杞黃顆粒+雷珠單抗組ICAM-1表達均高于空白對照組(P<0.01),杞黃顆粒組和雷珠單抗組ICAM-1表達均高于杞黃顆粒+雷珠單抗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示雷珠單抗對ICAM-1的表達有抑制作用,杞黃顆粒聯(lián)合雷珠單抗長時間使用的效果更強。杞黃顆粒通過改善組織缺氧狀態(tài),通過下調(diào)下游通路ICAM-1表達,使中性粒細胞的粘附作用減弱,血管內(nèi)皮細胞損傷減輕,血管通透性下降,CNV形成減少。中醫(yī)藥治療AMD具有悠久的歷史和獨特優(yōu)勢,雖然目前中醫(yī)藥治療仍然難以清除脈絡(luò)膜新生血管,但在血管新生關(guān)鍵因子的調(diào)節(jié)方面能夠起到積極作用,尤其在防止黃斑反復(fù)出血和提高視覺質(zhì)量方面有效,因此通過研究開發(fā)中藥來尋找治療AMD的有效藥物不失為一種好的方向和思路[10-12]。

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StudyontheexpressionlevelsofICAM-1proteinandmRNAofratmodelofchoroidalneovascularizationtissuesaffectedbyQiHuanggranule

GUANYu-shuang,LIANGFeng-ming,WANGLi,WANGYan,LIHong-mei,WANGYing-ying,QUANYing

(1.FirstTeachingHospitalofTianjinUniversityofTCM,Tianjin,China,300000;2.GuangdongProvinceTraditionalChineseMedicalHospital,Guangdong,China,510000)

ObjectiveAims:To study the effect on ICAM-1 protein and mRNA of Retinal pigment epithelium(RPE)-choroid-sclera complex of Laser-induced Choroidal neovascularization rat model affected by Qi Huang granule.MethodsWe selected 81 BN rats in which 13 rats were selected to be blank control group randomly and other 68 rats whose right eyes were photocoagulated by laser of 532nm magnification(300nw power,0.05s exposure time,the beam size of 50um)to establish CNV model.After 7 days photocoagulation,3 rats were selected to be examined by FFA and OCT and undergo cardiac perfusion to death and then RPE-choroid- sclera complex surface preparation were made respectively detecting the CNV area to verify that the formation of Choroidal neovascularization model in rats.The other 65 rats were randomly divided into five groups,which were Qi Huang granule A group,Qi Huang granule B group,Lei Zhu monoclonal antibody group,Qi Huang granule plus Lei Zhu monoclonal antibody group and model group.Drugs were given after successful model and summed up after 60 days,while Qi Huang granule B group was summed up after 90 days.At the end of the experiment cardiac perfusion of death was used,right eyeballs were removed and RPE-choroid- sclera complex was retracted,and,we used Western Blot to analyze ICAM-1 protein levels and Real-time PCR to attain ICAM-1 mRNA expression level.Resultslaser induced the expression of ICAM-1 protein of CNV model of rats during the process of tissue formation.The difference of ICAM-1/tublin in five groups was statistically significant(F=22.798,P<0.01).ICAM-1/tublin in the blank control group was lower than that in all of the other groups(P<0.01).ICAM-1/tublin in the model Group and Qi Huang granule group were both higher than that in the Qi Huang granule+ Ranibizumab group and the difference was statistically significant(P<0.01).There was no significant difference among Qi Huang granule+ Ranibizumab group,blank control group and Ranibizumab group(P>0.05).The difference of ICAM-1/tublin between Qi Huang granule group and Ranibizumab group was not statistically significant(P>0.05).The difference of ICAM-1/tublin between 60d and 90d Qi Huang granule group was not statistically significant(P>0.05).The expression of ICAM-1mRNA in blank control group was lower than that in all of the other groups(P<0.01).The expression of ICAM-1mRNA in model Group,Qi Huang granule group and Ranibizumab group were higher than that in Qi Huang granule+ Ranibizumab group and the difference was statistically significant(P<0.05).The difference of the expression of gene between Qi Huang granule and Ranibizumab group was statistically significant(P<0.01).The expression of ICAM-1 in 90d Qi Huang granule group was lower than that in 60d Qi Huang granule group and the difference was statistically significant(P<0.01).ConclusionThere is high expression of ICAM-1 existing in CNV.Ranibizumab could suppress the high expression of ICAM-1.Qi Huang granule+ Ranibizumab long used in conjunction is more effective.

Qihuang granule; Choroidal neovascularization; ICAM-1

國家自然基金面上項目:基于VEGF上下游調(diào)控通路探討杞黃顆粒對脈絡(luò)膜新生血管形成的干預(yù)機制(項目批準號:81373694)

1.300000,中國天津,天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院;2.510000,中國廣東,廣東省中醫(yī)院

梁鳳鳴,E-mail:liangfm66@163.com

10.3969/j.issn.1674-9006.2017.04.001

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