慢病毒介導(dǎo)RNAi下調(diào)LMP2A基因表達(dá)抑制EB病毒相關(guān)胃癌細(xì)胞的體外生長*

王芳軍 高 昳 劉兵團(tuán) 王文平 劉鵬飛

東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬江陰醫(yī)院消化內(nèi)科(214400)

·論 著·

慢病毒介導(dǎo)RNAi下調(diào)LMP2A基因表達(dá)抑制EB病毒相關(guān)胃癌細(xì)胞的體外生長*

王芳軍#高 昳 劉兵團(tuán) 王文平 劉鵬飛&

東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬江陰醫(yī)院消化內(nèi)科(214400)

EB病毒(EBV)與多種人類腫瘤，如Burkitt淋巴瘤以及鼻咽癌、胃癌等上皮性腫瘤相關(guān)。病毒編碼的潛伏膜蛋白2A(LMP2A)存在于部分EBV相關(guān)胃癌(EBVaGC)中，與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。目的應(yīng)用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾(RNAi)技術(shù)抑制LMP2A基因表達(dá)，探討下調(diào)LMP2A對EBVaGC細(xì)胞體外生長的影響。方法構(gòu)建慢病毒載體pGCSIL-LMP2A-shRNA-LV和陰性對照載體并轉(zhuǎn)染EBVaGC細(xì)胞株GT38，以real-time PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測慢病毒載體的抑制效率，CCK-8實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測GT38細(xì)胞的細(xì)胞生長、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。結(jié)果GT38細(xì)胞轉(zhuǎn)染LMP2A-shRNA-LV后，LMP2A mRNA和蛋白表達(dá)分別下調(diào)65.4%和50.8%，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞體外增殖受抑，克隆形成能力降低，G0/G1期細(xì)胞比例增加，細(xì)胞凋亡率增高，與轉(zhuǎn)染陰性對照慢病毒載體和未予轉(zhuǎn)染慢病毒的GT38細(xì)胞相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論慢病毒介導(dǎo)的RNAi技術(shù)能高效抑制LMP2A基因表達(dá)，進(jìn)而抑制EBVaGC細(xì)胞的體外生長，誘導(dǎo)G0/G1期阻滯，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。LMP2A可作為EBVaGC基因治療的潛在靶點(diǎn)。

潛伏膜蛋白2A； EB病毒感染； 胃腫瘤； RNA干擾； 慢病毒感染； 細(xì)胞增殖； 細(xì)胞凋亡

EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)為人類γ皰疹病毒，可長期存在于人體細(xì)胞內(nèi)但不產(chǎn)生任何癥狀[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，EBV與多種人類腫瘤相關(guān)，如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌、胃癌[2-3]。EBV相關(guān)胃癌(EBV-associated gastric carcinoma, EBVaGC)約占全世界胃癌發(fā)病率的10%[3-5]，此類胃癌很難通過外科手術(shù)、放療、化療等方法完全消除，尋找新的抑制腫瘤細(xì)胞生長的方法對于其治療至關(guān)重要。

潛伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A, LMP2A)是一種由EBV編碼的潛伏蛋白，對于維持病毒在感染B淋巴細(xì)胞內(nèi)潛伏具有重要作用，廣泛表達(dá)于EBV感染細(xì)胞以及EBV相關(guān)上皮性腫瘤如鼻咽癌和胃癌。……