洋參蟲草顆粒對小鼠免疫功能及學習記憶的影響

楊玉奇 羅維 聶晶 魏云 賀雙艷 唐笑鳳 李琴玲

（1湖南斯萊克景達實驗動物有限公司 湖南 長沙 410125)

（2湖南醫藥工業研究所 湖南 長沙 410014）

洋參蟲草顆粒處方由西洋參、蟲草孢子體等組成。功能益氣養陰，健腦益神，用于氣陰不足或腎精虧虛所致的頭暈耳鳴，困乏無力，記憶衰退，健忘失眠等，神經衰弱癥見上述癥候者。

1.實驗材料

1.1 實驗藥物

洋參蟲草顆粒，湖南康壽制藥有限公司提供，批號：150201。古漢養生精口服液，批號：130306。紫光古漢集團衡陽中藥有限公司產品。

1.2 實驗動物

ICR小鼠，18～22g。110只。雌、雄各半。湖南斯萊克景達實驗動物有限公司供應。動物生產許可證號：SCXK（湘）2013-0004。動物使用許可證號：SYXK（湘）2014-0012。

1.3 儀器與試劑

MA2014電子分析天平，上海舜宇恒平科學儀器有限公司。721型分分光度計，上海菁華科技儀器有限公司。DT-200小鼠跳臺自動測試箱，成都泰盟科技有限公司。

2.實驗方法

2.1 碳粒廓清實驗

方法[1-3]，ICR小鼠，50只，雌、雄各半，體重18～22g，隨機分成5組：空白對照組，洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組，古漢養生精組。分別給予下列藥物：空白對照組（給予蒸餾水），洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組（1.95、3.90、7.80g 生藥/kg），古漢養生精組（7.80ml/kg），均按20ml/kg灌胃給藥，每天給藥1 次，連續7 天。末次給藥60min后，從小鼠尾靜脈注射印度墨水0.1ml/10g。注射后1min、5min，眼眶采血20μl，溶于2.0ml 0.1% Na2CO3溶液中，于680mm處，測定吸收值（OD），以Na2CO3溶液作為空白對照。取血后，將小鼠處死，摘取胸腺、肝臟、脾臟，吸干臟器表面血污，稱質量（mg）。計算胸腺指數，廓清指數K，校正廓清指數α。胸腺指數（mg/10g）=10×器官重量（mg）÷小鼠體重（g），K=(LogOD1－LogOD2)÷(t2-t1)，α=×體重÷(肝重 + 脾重)。

2.2 對東莨菪堿所致的小鼠學習記憶獲得障礙影響

參考文獻方法[1、2、6]，選ICR小鼠，60只，雌、雄各半，體重18～22g，隨機分成6組：空白對照組，模型組，洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組，古漢養生精組。分別給予下列藥物：空白對照組（給予蒸餾水），模型組（給予蒸餾水），洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組（1.95、3.90、7.80g 生藥/kg），古漢養生精組（7.80ml/kg），均按20ml/kg 灌胃給藥，每天給藥1 次，連續7天。第6天給藥60min后，將6格跳臺儀的電壓調至32V，將小鼠分批在放入DT-200小鼠跳臺自動測試箱內進行訓練，訓練前10min，空白對照組腹腔注射生理鹽水10ml/kg，其余各組腹腔注射東莨菪堿2mg/kg。訓練時先適應環境3min，通電，小鼠受電擊后跳上跳臺，跳下時以小鼠雙足同時接觸跳臺儀銅柵為觸電，視為錯誤反應，訓練5min。觀察并記錄小鼠學習中觸電潛伏期及5min 內錯誤次數。給藥第7天60min 后，將小鼠放在跳臺上，記錄小鼠錯誤潛伏期和5min 內錯誤反應次數，作為記憶指標。

2.3 數據處理方法

采用SPSS 17.0 軟件進行數據統計，實驗數據均以x-±SD表示，并進行單因素方差分析，P＜0.05 具有統計學意義，P＜0.01 具有高度統計學意義。

3、實驗結果

3.1 洋參蟲草顆粒對小鼠胸腺指數、碳廓清指數、校正廓清指數影響：與空白組比較，洋參蟲草顆粒低、中、高劑量組和古漢養生精對照組胸腺指數、碳廓清指數、校正廓清指數均無明顯差異（P＞0.05）。結果見表1。

表1 洋參蟲草顆粒對胸腺指數（x-±SD，n=10）

表2 洋參蟲草顆粒對廓清指數、校正廓清指數的影響（x-±SD，n=10）

3.2 對東莨菪堿所致小鼠學習記憶獲得障礙影響

與空白組比較，模型組潛伏期顯著縮短、錯誤次數顯著性增多（P＜0.01）；與模型組比較，洋參蟲草顆粒高劑量組潛伏期顯著延長（P＜0.01），洋參蟲草顆粒高劑量組錯誤次數明顯減少（P＜0.05）。結果見表3。

表3 洋參蟲草顆粒對東莨菪堿所致的小鼠學習記憶獲得障礙的影響（x-±SD，n=10）

4.討論

影響非特異性免疫功能的研究方法較多，免疫藥理實驗，常以藥物對實驗動物免疫器官重量的影響作為初步觀察藥物對免疫功能影響的指標，當機體的整體免疫功能增強時，其質量有所增加，臟器系數增加[1、4]。向小鼠血流中注射一定量的碳顆粒，迅速被單核吞噬細胞所清除，主要被定居在肝和脾臟的巨噬細胞所吞噬[1-2]。觀察其血流中清除的速率，即可反映肝臟和脾臟中的巨噬細胞的吞噬功能[2]。本研究主要采用了免疫器官重量法和單核吞噬細胞功能測定法（小鼠碳廓清法）來探討洋參蟲草顆粒對小鼠免疫功能的影響。結果洋參蟲草顆粒各劑量組對小鼠胸腺指數、碳廓清指數、校正廓清指數有增加趨勢，提示具有增強免疫功能的作用。

學習和記憶是腦的重要功能之一，觀察藥物的益智作用時常需采用記憶障礙動物進行實驗。本法即可觀察藥物對記憶過程的影響，也可觀察對學習的影響，有較高的敏感性[3、6]，尤適合于初篩藥物。另外跳臺法在電擊前經條件刺激，可同時觀察被動和主動回避性反應。本研究采用在動物訓練前10min腹腔注射東莨菪堿2mg/kg，造成記憶損傷模型，與模型組比較，洋參蟲草顆粒高劑量組錯誤潛伏期顯著延長，洋參蟲草顆粒高劑量組錯誤次數明顯減少，提示洋參蟲草顆對東莨菪堿所致的小鼠學習記憶獲得障礙具有改善作用。

【參考文獻】

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