仁壽縣新生兒人群常見耳聾基因位點分布研究

楊旭 韓峰 向英 王菊容 陳雪梅 白玉芹（通訊作者）

（仁壽縣婦幼保健院兒?？?四川 眉山 620020）

先天性耳聾是目前我國新生兒最常見的先天性缺陷之一，發病率約為0.1～0.3%，且部分地區呈明顯上升趨勢，引起人們的關注和重視[1]。目前研究認為[2]，先天性耳聾可由環境因素、基因突變等原因導致，其中50%的兒童期耳聾認為和遺傳等因素有關。因此對新生兒進行耳聾篩查尤為重要。本文對我院新生兒采用耳聾基因芯片法進行篩查，分析仁壽縣新生兒常見耳聾基因突變的位點分布情況，現報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本次選取958例2016年1月至2012年12月期間在我院行常規耳聾基因檢測的新生兒作為研究對象，采取新生兒足跟血提取DNA。所有研究對象均經家屬同意并簽字入組研究。被檢測DNA組符合100～200ng/ul，純度D（260）/D（280）=1.7～2.0。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 由深圳華大基因有限公司提供的遺傳性耳聾基因檢測試劑盒。洗液配置：洗滌液I（0.3×SSC，0.1%SSD）；洗滌液II（0.06×SSC）。雜交緩沖液，雜交芯片。

1.2.2 PCR擴增 PCR反應體系為20ul，每個DNA分別配置A、B反應體系。A：12.5ul引物混合物A1，4.5ul引物混合物A2，3.0ul模板DNA。B：12.5ul引物混合物B1，4.5ul引物混合物B2，3.0ul模板DNA。

1.2.3 PCR擴增步驟 在37℃下預變10min，95℃下預變15min，96℃下預變1min。之后94℃下30s，55℃下30s，72℃下45s為一個循環，共進行32個循環。72℃下45s，60℃下10min。94℃到55℃速率為0.4℃/s，55℃至70℃速率為0.2℃/s。

1.2.4 雜交 PCR產物95℃下變性5min，放入冰水混合物冰浴3min。將雜交緩沖液加入融化（50℃），分為10ul每份，相同樣品模板A、B體系各取2.5ul產物，加入各個雜交緩沖液中，混勻后加入芯片微陣列區域，封閉后放置于50℃水浴中1h。

1.2.5 洗片 分別將洗滌劑I和II在42℃下進行混勻，80r/min。取出芯片后分別加入洗滌劑I和II，每加入一種均在80r/min下震蕩搖勻，洗滌2次。甩干后采用微陣列芯片法進行檢測，以晶芯LuxScanTM 10K-B微陣列芯片進行掃描。

1.3 統計學處理

2.結果

2.1 檢出率

所有研究對象中檢測GJB2基因突變頻率為2.8%，SLC26 A4基因突變頻率為2.1%。12S rRNA基因突變頻率為0.1%。

2.2 耳聾基因突變在新生兒人群中的分布情況

其中GJB2基因以235 del C位點最為常見，SLC26 A4基因以IVS 7-2 A＞G位點突變最為常見，均高于其他基因位點的突變率，P＜0.05。見表1。

表1 耳聾基因突變在新生兒人群中的分布情況

3.討論

聽力是人體五大感官之一，與語言能力息息相關。據研究顯示[3]，通過早期診斷和干預聽力障礙兒童可有效提高患兒的語言水平。流行病學顯示不同地區的耳聾突變基因不同，多數是有GJB2基因突變導致，占耳聾基因突變患兒的20%以上，另一部分是由線粒體DNA 12S rRNA 1555 A＞G突變引起，占耳聾患兒的10%左右。還有部分地區主要由SLC26 A4基因突變引起，占到耳聾患兒的9%左右。因此針對部分地區耳聾患兒基因突變的研究，可有效制定篩查方式，從而提高耳聾的早期診斷率。

GJB2是常見的耳聾突變基因之一，在本文研究中顯示，仁壽縣兒童通過篩查，其中GJB2基因突變頻率高達2.8%，其中以235 del C位點突變為主，占2.0%，可見GJB2基因突變是仁壽縣患兒最常見的基因突變之一，其中以235 del C位點突變為主。SLC26 A4屬于離子轉運體家族，認為在耳聾中是僅次于GJB2突變的基因。

綜上所述，仁壽縣新生兒人群中GJB2、SLC26 A4基因突變率較高，GJB2基因以235 del C位點突變率最高，SLC26 A4基因以IVS 7-2 A＞G位點突變率最高。

[1]呂康模,熊業華,俞皓等.17000名新生兒遺傳性耳聾基因突變篩查[J].中華醫學遺傳學雜志,2014,31(5):547-552.

[2]唐軍,胡敏,蘇艷等.518例新生兒聽力及耳聾基因聯合篩查結果分析[J].聽力學及言語疾病雜志,2017,25(2):197-200.

[3]相麗麗,林倩,聶文英等.濟南市部分新生兒聽力和耳聾基因聯合篩查結果分析[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2015,50(5):401-405.