清熱益氣化瘀通絡(luò)方對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的作用

張 嬿,葉學(xué)鋒,詹華奎,胡 泉,呂春燕

(成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院/臨床醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610075)

清熱益氣化瘀通絡(luò)方對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的作用

張 嬿,葉學(xué)鋒,詹華奎,胡 泉,呂春燕

(成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院/臨床醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610075)

目的探討清熱益氣化瘀通絡(luò)方對(duì)糖尿病腎病(DN)大鼠足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化即上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用。方法將40只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、糖尿病腎病組、清熱益氣化瘀通絡(luò)組、厄貝沙坦組，每組10只。除正常組大鼠外，其余組大鼠均采用腹腔注射鏈脲佐菌素方法制作DN模型。造模成功后，清熱益氣化瘀通絡(luò)組和厄貝沙坦組給予相應(yīng)藥物灌胃，正常組和糖尿病腎病組給予等量生理鹽水灌胃，均連續(xù)12周。灌胃結(jié)束后，檢測(cè)各組大鼠血糖、血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白定量，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)腎皮質(zhì)中Wilms腫瘤抑制因子(WT1)、鈣黏蛋白(P-Cadherin)、結(jié)蛋白(desmin) mRNA表達(dá)情況。結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各造模組的血糖水平均明顯高于正常組(P均<0.05)，但各造模組間血糖水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；各造模組的24 h尿蛋白定量也均明顯高于正常組(P均<0.05)，但厄貝沙坦組和清熱益氣化瘀通絡(luò)組24 h尿蛋白定量均明顯低于糖尿病腎病組(P均<0.05)，且清熱益氣化瘀通絡(luò)組明顯低于厄貝沙坦組(P均<0.05)。WT1 mRNA表達(dá)(2-△Ct)及相對(duì)定量(2-△△Ct)結(jié)果顯示從高到低依次為正常組、厄貝沙坦組、清熱益氣化瘀通絡(luò)組、糖尿病腎病組，但4組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；正常組、厄貝沙坦組、清熱益氣化瘀通絡(luò)組P-Cadherin mRNA表達(dá)(2-△Ct)及相對(duì)定量(2-△△Ct)均明顯高于糖尿病腎病組(P均<0.05)，desmin mRNA表達(dá)(2-△Ct)及相對(duì)定量(2-△△Ct)均明顯低于糖尿病腎病組(P均<0.05)，但3組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。結(jié)論清熱益氣化瘀通絡(luò)方可增加足細(xì)胞P-Cadherin表達(dá)而降低desmin表達(dá)，具有拮抗糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的作用。

糖尿病腎病；足細(xì)胞；表型轉(zhuǎn)化；清熱益氣化瘀通絡(luò)方

足細(xì)胞即腎小球臟層上皮細(xì)胞，是一種高度分化的上皮細(xì)胞，在腎小球?yàn)V過(guò)屏障的構(gòu)成中起著舉足輕重的作用，而這些作用的維持依賴于足細(xì)胞的分化成熟并獲得表面特殊蛋白分子的表達(dá)，即足細(xì)胞表型。當(dāng)足細(xì)胞上皮細(xì)胞表型標(biāo)志物表達(dá)下調(diào)，而間充質(zhì)細(xì)胞表型標(biāo)志物表達(dá)上調(diào)時(shí)，表明足細(xì)胞發(fā)生了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(EMT)，即表型轉(zhuǎn)化。研究發(fā)現(xiàn)，在高糖環(huán)境下足細(xì)胞存在EMT[1-3]，在糖尿病腎病( DN)發(fā)生發(fā)展過(guò)程中足細(xì)胞也存在EMT現(xiàn)象[4-5]，故足細(xì)胞EMT成為DN蛋白尿形成和腎臟纖維化機(jī)制研究中的重要切入點(diǎn)。清熱益氣化瘀通絡(luò)方是葉學(xué)鋒導(dǎo)師總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)方，用于治療DN患者蛋白尿效果較好，且此方可降低DN大鼠24 h尿蛋白并拮抗足細(xì)胞nephrin、podocin表達(dá)下調(diào)[6-8]。本研究以西藥血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑厄貝沙坦為對(duì)照，觀察了清熱益氣化瘀通絡(luò)方對(duì)DN大鼠足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化即EMT的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4周齡健康雄性Wistar大鼠30只，體質(zhì)量180～200 g，四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，合格證號(hào)：SCLK(川)2004-16。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，剔除空腹血糖>7 mmol/L或尿蛋白試紙法陽(yáng)性大鼠。

1.2試劑及藥物 鏈脲佐菌素(STZ)，Sigma公司，美國(guó)；厄貝沙坦，杭州賽諾菲按萬(wàn)特民生制藥有限公司；清熱益氣化瘀通絡(luò)方由葛根、黃芪、水蛭、黃芩、黃柏、牛蒡子、柴胡、山茱萸、川芎等組成，中藥飲片由本院提供。

1.3分組、造模及干預(yù) 采用數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分為正常組、糖尿病腎病組、清熱益氣化瘀通絡(luò)組、厄貝沙坦組，每組10只。大鼠禁食12 h后，糖尿病腎病組、清熱益氣化瘀通絡(luò)組、厄貝沙坦組大鼠均采用一次性腹腔注射STZ 55 mg/kg方法制作DN模型，正常組大鼠腹腔注射等量枸櫞酸鈉溶液。注射STZ后每3 d測(cè)1次血糖，連續(xù)2周血糖均>16.7 mmol/L，2周后24 h尿量>造模前150%，24 h尿蛋白定量>造模前150%確定糖尿病腎病造模成功[9]。然后清熱益氣化瘀通絡(luò)組給予清熱益氣化瘀通絡(luò)合劑2.1 mL/100 g(中劑量給藥，為成人劑量的10倍)灌胃，厄貝沙坦組給予厄貝沙坦5 mg/100 g(中劑量給藥)溶于2 mL水制成混懸液灌胃，正常組和糖尿病腎病組給予生理鹽水2 mL灌胃，各組大鼠均每日灌胃1次，共12周。全部大鼠在同一動(dòng)物房?jī)?nèi)分籠飼養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)飲食。12周后N組、DN組、Q 組、I 組分別存活7只、6只、6只、6只大鼠。

1.4生化指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用德國(guó)拜耳-拜安捷血糖儀尾部針刺取血測(cè)量血糖，成模后大鼠每周測(cè)定1次，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前再次測(cè)定；造模前、造模后第2周末及實(shí)驗(yàn)結(jié)束前使用代謝籠收集各組大鼠24 h尿液，測(cè)尿量并檢測(cè)24 h尿蛋白定量；最后斷頸處死大鼠，心臟取血檢測(cè)血清肌酐、尿素氮水平。

1.5Wilms腫瘤抑制因子(WT1)、鈣黏蛋白(P-Cadherin)、結(jié)蛋白(desmin) mRNA表達(dá)檢測(cè) 取斷頸處死大鼠的右腎上極部分腎皮質(zhì)，放入液氮凍存，使用TaqMan熒光探針?lè)z測(cè)各組腎組織中WT1，P-Cadherin和desmin mRNA表達(dá)情況。提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo引物利用反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA，在PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增完后置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩８鶕?jù)NCBI Genebank中大鼠WT1、P-Cadherin、desmin、β-actin基因序列行引物及探針設(shè)計(jì)，內(nèi)參β-actin上游引物序列為GAAGATCAAGATCATTGCTCCT，下游引物序列為TACTCCTGCTTGCTGATCCA，探針CTGTCCACCTTCCAGCAGA，擴(kuò)增長(zhǎng)度111 bp；WT1上游引物序列為CCCTACAGCAGTGACAAT，下游引物序列為CTCTGCCCTTCTGTCCAT，探針CTGCTGGGAGCTCCAGCTC，擴(kuò)增長(zhǎng)度137 bp；P-Cadherin上游引物序列為CATCACAGACAAGGACCTGT，下游引物序列為GAACTTCTTCAGGGACAAG，探針 CCTCCCCTTTCCAGGCCCA，擴(kuò)增長(zhǎng)度130 bp；desmin上游引物序列為GTACAAGTCCAAGGTTTCAG，下游引物序列為CATCAATCTCGCAGGTGTAG，探針CCGACACCAGATCCAGTCC，擴(kuò)增長(zhǎng)度125 bp；反應(yīng)體系：10×buffer(Mg2+ free)3 μL、MgCl2(25 mmol/L)3 μL、DNTP(25 mmol/L)0.36 μL、上游引物(10 μmol/L)1 μL、下游引物(10 μmol/L)1 μL、探針(10 μmol/L)0.6 μL、Taq酶(5 IU/μL)0.3 μL、ddH2O 18.74 μL、cDNA模板2 μL，共計(jì)30 μL在FTC2000型熒光定量PCR儀上進(jìn)行，擴(kuò)增條件：①94 ℃ 2 min；②94 ℃ 20 s， 60 ℃ 30 s，將PCR儀的熒光采集時(shí)間統(tǒng)一設(shè)定在擴(kuò)增反應(yīng)的延伸期，45個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，系統(tǒng)將采集到的每一循環(huán)反應(yīng)時(shí)的各反應(yīng)管的熒光強(qiáng)度增長(zhǎng)指數(shù)(DRn)進(jìn)行分析繪制每一反應(yīng)管的擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)曲線，得到β-actin基因、WT1基因、P-Cadherin基因、desmin基因的熒光定量PCR動(dòng)力學(xué)曲線，根據(jù)動(dòng)力學(xué)曲線確定每個(gè)樣品管中熒光強(qiáng)度增加到特定閾值時(shí)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)(Ct值)；取待測(cè)cDNA樣品，以10×梯度稀釋4次后于同等條件下行熒光定量PCR。根據(jù)熒光定量PCR儀繪制P-Cadherin， WT1，desmin及β-actin基因的熒光定量PCR動(dòng)力學(xué)曲線，以樣品拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，Ct值為縱坐標(biāo)，分別擬合P-Cadherin、WT1、desmin熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線，一方面用樣本的目的基因Ct值減去對(duì)應(yīng)的內(nèi)參Ct值，得到△Ct值，每一組的△Ct求平均值及標(biāo)準(zhǔn)差, 以2-△Ct表示實(shí)驗(yàn)組目的基因的表達(dá)；另一方面取正常組為校正樣品，各組每個(gè)樣本的△Ct減去正常組的△Ct平均值，計(jì)算各組△△Ct，以2-△△Ct表示實(shí)驗(yàn)組目的基因的表達(dá)相對(duì)于正常組的倍數(shù)關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組大鼠生化指標(biāo)比較 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各造模組的血糖水平均明顯高于正常組(P均<0.05)，但各造模組間血糖水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；各造模組的24 h尿蛋白定量也均明顯高于正常組(P均<0.05)，但厄貝沙坦組和清熱益氣化瘀通絡(luò)組24 h尿蛋白定量均明顯低于糖尿病腎病組(P均<0.05)，且清熱益氣化瘀通絡(luò)組明顯低于厄貝沙坦組(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組大鼠生化指標(biāo)比較

注：①與正常組比較，P<0.05；②與糖尿病腎病組比較，P<0.05；③與厄貝沙坦組比較，P<0.05。

2.2各組WT-1、P-Cadherin、desmin mRNA表達(dá)(2-△Ct)及相對(duì)定量(2-△△Ct) WT1 mRNA表達(dá)(2-△Ct)及相對(duì)定量(2-△△Ct)結(jié)果顯示從高到低依次為正常組、厄貝沙坦組、清熱益氣化瘀通絡(luò)組、糖尿病腎病組，但4組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；正常組、厄貝沙坦組、清熱益氣化瘀通絡(luò)組P-Cadherin mRNA表達(dá)(2-△Ct)及相對(duì)定量(2-△△Ct)均明顯高于糖尿病腎病組(P均<0.05)，desmin mRNA表達(dá)(2-△Ct)及相對(duì)定量(2-△△Ct)均明顯低于糖尿病腎病組(P均<0.05)，但3組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表2及表3。

3 討 論

表型轉(zhuǎn)化是指某種細(xì)胞在環(huán)境改變時(shí)失去其特定的表型特征而獲得另一種表型特征，是胚胎發(fā)育、腫瘤發(fā)生、組織纖維化的必需過(guò)程。一般情況下，起源于間充質(zhì)的細(xì)胞才具有轉(zhuǎn)化的潛能。足細(xì)胞在腎臟發(fā)育過(guò)程中由間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來(lái)，具有EMT的潛能，其在腎小球毛細(xì)血管攀形成階段開(kāi)始分化形成足突，啟動(dòng)終末分化上皮細(xì)胞表型的表達(dá)，與腎小球基底膜、內(nèi)皮細(xì)胞所組成的腎小球?yàn)V過(guò)屏障是迄今為止最復(fù)雜的生物膜[10]。本研究中糖尿病腎病組大鼠足細(xì)胞WT1 mRNA表達(dá)雖有下降趨勢(shì)，但與正常組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示尚未出現(xiàn)足細(xì)胞數(shù)目減少；而上皮細(xì)胞表型標(biāo)志物P-Cadherin的表達(dá)降低、間充質(zhì)細(xì)胞表型標(biāo)志物desmin的表達(dá)增多提示早期DN大鼠(12周)足細(xì)胞存在表型轉(zhuǎn)化(EMT)。表型轉(zhuǎn)化是DN病變初期的反應(yīng)性表現(xiàn)，抑或是其轉(zhuǎn)向主動(dòng)參與病變繼續(xù)進(jìn)展的細(xì)胞生物學(xué)轉(zhuǎn)折點(diǎn)，基于以上認(rèn)識(shí)，足細(xì)胞特異性保護(hù)治療已成為足細(xì)胞病研究的新目標(biāo)[11-12]。

表2 各組WT-1、P-Cadherin、desmin mRNA表達(dá)

注：①與糖尿病腎病組比較，P<0.05。

表3 各組WT-1、P-Cadherin、desmin mRNA相對(duì)定量

注：①與糖尿病腎病組比較，P<0.05。

糖尿病在中醫(yī)學(xué)稱之為消渴病，DN屬其并發(fā)癥之一。中醫(yī)古籍中雖無(wú)DN獨(dú)立病名的記載，但古代醫(yī)家早已發(fā)現(xiàn)消渴日久可出現(xiàn)水腫并發(fā)癥，最早在《靈樞》中有“消癉”的記載，巢元方《諸病源候論》：“消渴其久病變，或發(fā)癰疽，或成水疾。”《金匱要略·消渴小便不利淋病脈證并治專論》還指出：“消渴，小便反多，以飲一斗，小便一斗，腎氣丸主之。”宋·趙佶《圣濟(jì)總錄》提出“消腎”之病名，云：“消渴病久，腎氣受傷，腎主水，腎氣虛衰，氣化失常，開(kāi)闔不利，能為水腫。”上述論述與DN的臨床表現(xiàn)極為相似。遵循中醫(yī)對(duì)DN臨床基本證候的病機(jī)和治則認(rèn)識(shí)：內(nèi)熱燔灼，消蝕氣陰，可苦寒堅(jiān)陰，清熱益氣；經(jīng)絡(luò)榮衛(wèi)氣傷，內(nèi)有干血，當(dāng)化瘀通絡(luò)。本研究所用清熱益氣化瘀通絡(luò)方即根據(jù)上述病機(jī)而設(shè)。方中葛根性味辛涼，既善治熱病津傷，又能鼓舞清陽(yáng)之氣；并且葛根主要含有黃酮類物質(zhì)，具有化瘀通絡(luò)的功效；該藥功效切中病機(jī)，方中重用量大，為本方君藥。黃芩、黃柏、牛蒡子和柴胡苦寒清熱，臣輔君藥堅(jiān)陰御蝕；黃芪、山茱萸補(bǔ)氣生津，增強(qiáng)君藥固本藥力；水蛭、川芎逐瘀通絡(luò)，力峻效宏。諸藥協(xié)同，共奏清熱益氣、化瘀通絡(luò)之功。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各造模組的血糖水平和24 h尿蛋白定量均明顯高于正常組，但各造模組間血糖水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；厄貝沙坦組和清熱益氣化瘀通絡(luò)組24 h尿蛋白定量均明顯低于糖尿病腎病組，且清熱益氣化瘀通絡(luò)組明顯低于厄貝沙坦組。4組間WT1 mRNA表達(dá)情況比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；正常組、厄貝沙坦組、清熱益氣化瘀通絡(luò)組P-Cadherin mRNA表達(dá)(2-△Ct)及相對(duì)定量(2-△△Ct)均明顯高于糖尿病腎病組，desmin mRNA表達(dá)(2-△Ct)及相對(duì)定量(2-△△Ct)均明顯低于糖尿病腎病組，但3組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果提示早期DN大鼠足細(xì)胞數(shù)目尚未發(fā)生改變時(shí)，已經(jīng)存在足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，清熱益氣化瘀通絡(luò)方可增加DN大鼠足細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)志P-Cadherin的表達(dá)、降低間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志desmin的表達(dá)，即具有一定的拮抗足細(xì)胞EMT的作用，可能是其治療DN蛋白尿的作用機(jī)制之一，但其抑制足細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。

[1] Dai HY，Zheng M，Lv LL，et al． The roles of connective tissue growth factor and integrin-linked kinase in high glucose-induced phenotypic alterations of podocytes[J]． J Cell Biochem，2012，113(1)：293-301

[2] 徐晶，劉麗秋，楊壟． 高糖對(duì)足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和Smad7表達(dá)的影響[J]． 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2012，13(12)：1062-1064

[3] 趙小麗，徐建偉，劉麗秋． 高糖刺激對(duì)體外培養(yǎng)小鼠足細(xì)胞snail表達(dá)和轉(zhuǎn)分化的影響[J]． 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2014，15(3)：207-210

[4] Gun J，Xia N，Yang L，et al． GSK-3B and Vitamin D receptor are involved in 3-Catenin and snail signaling in high glucose-induced epithelial-mesenchymal transition of mouse podocytes[J]． Cell Physiol Biochem，2014，33(4)：1087-1096[5] Zhang M，Liu M，Xiong M，et al． Schisandra chinensis fruit extract attenuates albuminuria and protects podocyte integrity in a mouse model of streptozotoein-induced diabetic nephropathy[J]． J Ethnopharmaeol，2012，141(1)：111-l18

[6] 葉學(xué)鋒，胡泉，涂翔，等． 清熱益氣化淤通絡(luò)治療糖尿病腎病蛋白尿研究[J]． 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23(1)：122-123

[7] 胡泉． 清熱通絡(luò)復(fù)方對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞nephrin和podocin作用研究[D]． 成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2010

[8] 涂翔． 清熱通絡(luò)法對(duì)早期糖尿病腎病大鼠蛋白尿的作用及其機(jī)制研究[D]． 成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2010

[9] Alpers CE，Hudkins KL． Mouse models of diabetic nephropathy[J]. Curr Opin Nephrol Hypertens， 2011，20(3)：278-284

[10] Inoue K,Ishibe S. Podocyte endocytosis in the regulation of the glomerular filtration barrier[J]. Am J Physiol Renal Physiol,2015,309(5):F398-405

[11] 楊汝春，朱曉玲，張華琴，等． 白藜蘆醇對(duì)TGF- 1誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化抑制作用研究[J]． 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33(12)：1677-1682

[12] 趙小麗，徐建偉，劉麗秋． 雷公藤甲素對(duì)高糖刺激足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響[J]． 山東醫(yī)藥，2014，54(6)：14-17

Effectsofdecoctionforclearingheat,replenishingQi,resolvingstasisandunblockingcollateralsonpodocytephenotypictransitionindiabeticnephropathyrats

ZHANG Yan, YE Xuefeng, ZHAN Huakui, HU Quan, LYU Chunyan

(Teaching Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, Sichuan, China)

ObjectiveIt is to explore the effects of decoction for clearing heat, replenishing Qi, resolving stasis and unblocking collaterals on podocyte phenotypic transition (epithelial-to-mesenchymal transition, EMT) in diabetic nephropathy(DN) rats．MethodsForty healthy male Wistar rats were randomly divided into four groups: control group(group A), DN group( group B), group treated by clearing heat, replenishing Qi, resolving stasis and unblocking collaterals (group C) and group treated by Irbesartan group(group D), each group had 10 rats. All the rats except in group A were given streptozotoein by intraperitoneal injection to establish ND models. After model successfully established, group C and group D were given decoction for clearing heat, replenishing Qi, resolving stasis and unblocking collaterals and Irbesartan respectively by lavage, group A and group B were given the same dose of normal saline by lavage. All the groups were treated for 12 weeks. At the end of experiment, blood sugar, SCr, BUN and 24-hour urinary protein quantity were measured, the mRNA expressions of Wilms tumor-inhibiting factor (WT1), P-cadherin and desmin were detected by RT-PCR.ResultsAt the end of experiment, the level of blood sugar and 24 h urinary protein quantity in group B, group C and group D was higher than that in group A (P<0.05), but no significant difference in blood sugar was found among the latter 3 groups (P>0.05), the level of 24 h urinary protein quantity in group C and group D was lower than that in group B, the decrease in group C was more significant than that in group D (P<0.05). The results of the expression of WT1 mRNA (2-△Ct) and relative quantity (2-△△Ct) from high to low were group A, group D, group C and group B respectively, but no significant difference was found among the four groups (P>0.05). The expression of P-Cadherin mRNA (2-△Ct) and relative quantity (2-△△Ct) in group A, group D group C were significantly higher while the expression of desmin mRNA (2-△Ct) and relative quantity (2-△△Ct) were lower than those in group B(P<0.05), but no significant difference was found among group A, group C and group D(P>0.05).ConclusionThe decoction for clearing heat, replenishing Qi, resolving stasis and unblocking collaterals had antagonistic effect on podocyte EMT through increasing the expression of P-cadherin and decreasing the expression of desmin in the rats with DN.

diabetic nephropathy；podocyte；phenotypic transition；decoction for clearing heat, replenishing Qi, resolving stasis and unblocking collaterals

10.3969/j.issn.1008-8849.2018.01.003

R-332

A

1008-8849(2018)01-0009-05

張嬿，女，博士，副教授，研究方向?yàn)橹形麽t(yī)結(jié)合臨床。

四川省衛(wèi)生廳課題(110524)；成都中醫(yī)藥大學(xué)自然科學(xué)預(yù)研項(xiàng)目(ZRYY201001)

2017-04-07