新城疫抗體血凝抑制試驗比對結果分析

劉華 陳曦 朱良強 占松鶴 何長生

摘要 為掌握某獸醫實驗室新城疫抗體血凝抑制（HI）試驗能力，用新城疫標準陽性血清和陰性血清制備52份盲樣，由6名檢測技術員同時進行HI抗體檢測。將檢測結果與參考值進行比較，計算陽性、陰性一致性以及符合率，并用Win Episcope 2.0軟件進行Kappa一致性檢驗，計算二者差值并進行統計描述。結果表明，312個檢測值陽性率為13.5%，低于參考值15.4%的陽性率（p<0.01）；二者陽性結果的一致性為68.8 %（33/48），陰性結果一致性為96.6%（255/264），符合率為92.3%（288/312），Kappa值為0.69（95%置信區間0.58～0.80）；檢測值與參考值差值在2個滴度范圍內浮動（95%置信區間-2.2～1.8），完全符合的占70.5%（220/312）。由此可知，該獸醫實驗室新城疫抗體HI試驗定性結果與參考值一致性強度為高度，但在定量結果方面仍有進一步提升的空間。

關鍵詞 新城疫抗體；血凝抑制試驗；比對試驗；Kappa 檢驗

中圖分類號 S852.4+3 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）22-0230-02

Abstract A comparison of HI method for detection of Newcastle Disease（ND）antibody was conducted to estimate the test capability of HI method at a veterinary laboratory.The standard NDV antibody positive serum which was diluted into different titers，together with the standard NDV-antibody-negative ones were prepared totally 52 for the 6 technicians who did the HI test at the same time.The HI titers of the 52 samples were observed by the staffs and were compared with the reference values.The positive and negative coincidence，the coincidence rate were calculated separately and Kappa-test was conducted by using Win Episcope 2.0 software. Meanwhile，difference between the tested and the reference values was described by statistics method.The results showed that positive rate was 13.5%，which showed a statistic difference with the reference 15.4%（p<0.01）.The positive consistency rate was 68.8%（33/84），the negative consistency rate was 96.6%（255/264）and the coincidence rate was 92.3%（288/312）.The Kappa value was 0.69（95% CI= 0.58-0.80）.The difference between the observed and the reference values was existed，and the different values were at the range of -2.2 to 1.8（95% CI），in which the rate of fully agreement of these two values was 70.5%（220/312）.The results indicated that，for the qualitative test of NDV HI antibody there was a high agreement between the observed results and the reference values at this veterinary laboratory，but the quantitative test showd be further improved.

Key words Newcastle Disease antibody；hemagglutination inhibition test；comparison test；Kappa-test

為適應當時畜牧業生產發展的需要，某獸醫實驗室成立于1918年。近些年，受財政預算減少等因素影響，政府采取獸醫實驗室商業化、私有化等措施，如為養殖戶和利益相關方提供有償獸醫實驗室檢測服務，以解決當前的問題。但獸醫實驗室也面臨著科研人才流失、儀器設備老化和日益復雜的動物疫病流行形勢等諸多挑戰。為掌握該獸醫實驗室血凝抑制試驗（HI）的檢測能力，由6名具備檢測資質的技術人員同時進行HI抗體檢測，筆者對試驗結果進行了比對分析。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

新城疫標準陽性血清（批號：2/12），新城疫標準陰性血清（批號：06/15A），新城疫標準檢測抗原（批號：08092015），均由意大利IZSAM實驗室提供。

1.2 試驗方法

將雞新城疫標準陰性、陽性血清分別進行倍比稀釋后分裝，共制成52份盲樣，其中8份為陽性，即HI效價≥1∶16，結果（即參考值）記為Nlog2。6名檢測技術員參照《OIE陸生動物診斷試驗與疫苗手冊—2012》第2.3.14章，對這52份盲樣進行雞新城疫病毒HI抗體檢測，檢測結果記為nlog2。

1.3 統計方法

檢測值（n）和參考值（N）均按≥4為陽性，反之為陰性進行定性判斷。應用Epi Info 7對結果進行2×2表格統計（圖1），計算陽性一致性（）、陰性一致性（），用Win Episcope 2.0計算符合率（Observed proportion of agreement）（），再用Win Episcope 2.0軟件進行試驗一致性（Agreement）分析，計算Kappa值，以比較HI定性試驗的符合情況。參照經典文獻進行一致性強度判斷，即Kappa值 <0，極差；0～0.20，微弱；0.21～0.40，弱；0.41～0.60，中度；0.61～0.80，高度；0.81～1.00，極強[1]。

用SPSS 20和Excel軟件對檢測值和參考值的差值進行統計描述和頻數分析，統計差值的極大值、極小值、均值、標準差、方差、頻數和直方圖，分析定量結果的總體分布情況。

2 結果與分析

2.1 定性結果一致性

將6名檢測技術員的312個檢測值與參考值的定性結果全部進行相關統計，結果檢測陽性42份，陽性率13.5%，低于參考值15.4%的陽性率（χ2=148.85，P<0.01）。二者陽性結果的一致性為68.8%（33/48），陰性結果一致性為96.6%（255/264），符合率為92.3%（288/312）。經Kappa一致性檢驗，Kappa值為0.69（95%置信區間0.58～0.80），表明該實驗室的新城疫抗體HI試驗定性結果與參考值的一致性強度為高度一致。

2.2 定量結果統計描述

將312個檢測值與參考值進行比較，計算兩者差值。將這些差值用SPSS 20進行統計描述，結果極大值為4，極小值為-7，均值為-0.23（表1）。

再將這些差值用SPSS 20進行頻數和直方圖統計。312個檢測值中，完全與參考值一致的有220個（即差值為0），約占樣本總數的70.5%；差值在-1～1之間的占87%，其中比參考值小的有67個，比參考值大的有25個（表2）。

由表2和圖2可知，二者差值呈中間高、兩邊低、左右基本對稱的分布，差值在2個標準差范圍內（-2～2），大約包括95.5%的觀察值；差值在3個標準差范圍內（-3～3），大約包括99.0%的觀察值；2個極端組各占0.32%。因此，本組數據近似滿足正態分布條件。用X±1.96 S（X為樣本均數，S為標準差）[2]計算95%置信區間為-2.20～1.75，即近似正、負偏差2個滴度。

綜上，定量結果統計結果表明，該獸醫實驗室新城疫的HI實驗結果與參考值95%在2個滴度范圍內浮動，其中完全一致的占樣品總數的70.5%。

3 結論與討論

（1）在實際工作中，往往以NDV HI抗體效價≥4log2為陽性，反之為陰性來診斷或判斷免疫抗體是否合格。定量試驗通常允許檢測結果與參考值上下偏差1個滴度，如果抗體效價為4 log2時，則可能出現假陰性；為3 log2時，則可能出現假陽性。因此，在進行定量結果評價的同時還要進行定性結果的評價。符合率是直接的方法，但當樣本量較小時，包括了相當部分的機遇可能；而卡方檢驗只能分辨差異有無統計學意義，不能反映是否一致[3]。Kappa統計量是在校正機遇可能后衡量定性結果一致性的方法[4]，可以用于有序和無序變量資料的一致性檢驗，近年來在醫學檢驗、流行病學及臨床資料可靠性考察等方面的應用較為廣泛[3-5]，在獸醫實驗室檢測中也逐漸開始應用[6-10]。Kappa值越大，表明2種結果可靠程度越高[5]。本次比對試驗中，觀察值與參考值之間的定性結果一致性強度為中度～極高，總體達到高度一致。

（2）參考值是與一個可溯源到一個國家或國際標準的標準物質或標準并進行分析、測量或比對檢測物品所確定的值。觀察值是若干參加者提交的測量值。兩者之間的差值是對定量結果能力驗證數據中常用的統計技術，在國際標準ISO 5725—4 中被稱為“實驗室偏移的估計值”[11]。二者差值的統計描述可以直觀反映出實驗室或操作者定量結果與參考值之間的差異以及數據分布情況。如果符合正態分布條件，則可進一步估算實驗室或操作者的觀察值與參考值的偏差范圍。從本次試驗比對的結果來看，該實驗室新城疫HI抗體檢測結果與參考值間差值呈近似正態分布，95%的差值在-2～2范圍內，即檢測值與參考值上下相差1或2個滴度或完全吻合。我國規定在進行HI定量檢測比對試驗時，觀察值與參考值上下相差1個滴度或完全吻合則判為正確[12]，該獸醫實驗室HI試驗有進一步提升的空間。

4 參考文獻

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