原癌基因和鏈蛋白在肝癌中的表達及臨床意義

王娟+黃炳臣+盧運龍+羅春英+吳雪銘+馬鳳艷+成迎迎+龍喜帶+黃小英

【摘要】目的探討原癌基因（c-myc）和β-鏈蛋白（β-catenin）在肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC，以下簡稱“肝癌”）中的表達及意義。方法通過免疫組化EnVision法檢測108例肝癌組織及癌旁組織中c-myc和β-catenin的表達，觀察c-myc和β-catenin在肝癌組織中的表達與臨床病理特征之間的關系。結果c-myc和β-catenin在肝癌組織中的表達率分別為42.59%（46/108）和40.74%（44/108），c-myc和β-catenin在癌旁組織中陽性率分別為1481%（16/108）和4.63%（5/108），二者比較差異有統計學意義（P<0.001）。c-myc和β-catenin在癌組織中的表達與腫瘤分化程度相關（P<0.001），與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個數、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無統計學關聯（P>005）。結論在肝癌組織中c-myc和β-catenin表達密切相關。

【關鍵詞】c-myc；β-catenin；肝癌；表達；臨床意義

中圖分類號：R735.7文獻標識碼：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2017.06.001

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and significance of c-myc and β-catenin in HCC（Hepatocellular carcinoma）.MethodsThe relationship between c-myc and β-catenin expression in HCC and the clinicopathological characteristics was observed through respectively detecting the expression of c-myc and β-catenin in 108 cases of HCC tissues and adjacent tissues by Immunohistochemical EnVision method.ResultsThe expression rate of c-myc and β-catenin in HCC tissues was 42.59%（46/108）and 40.74%（44/108）respectively，and the positive rate of them in the adjacent tissues was 1481%（16/108）and 4.63%（5/108），respectively，so difference between the two groups was statistically significant（P<0001）.The expression of c-myc and β-catenin in cancer tissues was correlated with the degree of tumor differentiation（P<0001），but it was not statistically related to age，sex，tumor thrombus，tumor number，tumor diameter and cirrhosis of adjacent tissues（P>0.05）.ConclusionThe expression of c-myc and β-catenin in HCC tissues was closely related.

【Key words】c-myc；β-catenin；HCC；expression；clinical significance

肝癌（HCC）是最常見的惡性腫瘤，是多基因突變、多因素和多步驟的復雜過程。近年來肝癌的發病率和死亡率呈逐步上升趨向[1]。該病具體的發病機制仍是研究熱點。由于肝癌早期癥狀隱匿、進展迅速，很多患者臨床確診時已為晚期。原癌基因（c-myc）是細胞增殖的重要調節因子，與多種腫瘤發病機制密切相關。β-鏈蛋白（β-catenin）是一種通過參與信號傳導、影響腫瘤發生發展的癌基因。筆者應用免疫組化方法檢測c-myc和β-catenin在肝癌中的表達情況，分析它們表達的相關性及與臨床病理參數的關系。1資料與方法1.1一般資料收集2013年5月至2017年5月在右江民族醫學院附屬醫院住院手術的108例肝癌患者癌組織以及相應的癌旁組織作為研究對象，其中男性患者95例，女性患者13例，年齡22～74歲。患者術前均未進行任何抗癌診斷及治療，每例均取肝癌組織及對應癌旁肝組織（距腫瘤邊緣2 cm），且所有病例均無明確肝外轉移。按Edmondson分級法進行分級：Ⅰ～Ⅱ級為高分化75例，Ⅲ～Ⅳ級為低分化33例。臨床資料包括患者的姓名、性別、年齡；病理資料包括腫瘤直徑、腫瘤個數、癌旁組織伴肝硬化、門脈癌栓等。

1.2檢測方法肝癌手術切除的所有標本經10%的福爾馬林固定24 h，常規石蠟包埋切片。免疫組化染色EnVision兩步法，DAB顯色。c-myc和β-catenin抗體和試劑盒均購自福州邁新，所有操作步驟均按照說明書上進行。用PBS緩沖液作為一抗陰性對照。

1.3免疫組化結果判定β-catenin蛋白的陽性定位于細胞核，以核內有明顯的棕色顆粒作為核陽性的判定標準；c-myc陽性定位于細胞核，以核內有明顯的棕色顆粒作為核陽性的判定標準。

1.4統計學方法應用SPSS 23.0統計學軟件進行分析，計數資料的組間比較采用χ2檢驗，相關性分析采用MeNemar相關分析，檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。2結果2.1肝癌組織和癌旁組織中c-myc和β-catenin的表達肝癌組織病理形態學發生改變（圖1-A），c-myc陽性表達著色位于胞核，呈棕黃色（圖1-B）；β-catenin陽性表達位于胞核，呈棕黃色（圖1-C）。c-myc在肝癌組織、癌旁組織中陽性率分別為42.59%（46/108）和1481%（16/108）；β-catenin在肝癌組織、癌旁組織中陽性率分別為40.74%（44/108）和4.63%（5/108），二者差異均有統計學意義（P<0.001）。見表1。endprint

2.2肝癌組織中c-myc和β-catenin的表達與臨床病理指標的關系c-myc和β-catenin在HCC中的表達與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個數、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無顯著性相關（P>0.05），與HCC組織分化程度有顯著相關性（P<0.001）。見表2。

2.3c-myc和β-catenin在肝癌中表達的相關性c-myc和β-catenin均為陽性表達30例，均為陰性表達48例，依據MeNemar的相關性分析，二者在肝癌中表達呈正相關性（r=0.855，P<0.001）。見表3。

3討論目前為止，HCC的發病機制尚不是十分明確，主要是通過各基因的表達產物作用于肝癌細胞的增殖、分化、代謝過程，最終導致肝細胞癌變。

c-myc是一種基因核內轉錄因子，參與調控腫瘤細胞增殖及分化。研究發現，致癌基因c-myc擴增或過表達參與多種腫瘤的復發、轉移[2]，在腫瘤的分化及預后方面起到關鍵作用[3]，其表達紊亂時會造成癌基因的激活，促進胃癌程序性細胞死亡[4]，它的異常表達參與胃癌的增殖及分化[5]。c-myc等多種原癌基因的激活及p53等抑癌基因的失活在肝癌形成的過程中起到至關重要的作用。此外，c-myc癌基因連續激活時可引起肝細胞的增殖和選擇性轉化，導致HCC的發生。黃炳臣等[6]檢測81例肝癌組織發現c-myc參與肝癌的形成，且與肝癌的分化密切相關。本研究結果顯示，c-myc在癌組織中陽性表達顯著高于癌旁組織，二者差異有統計學意義。這表明c-myc的異常表達與肝癌的發生有密切的聯系。我們還發現c-myc在HCC中的表達與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個數、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無統計學關聯，與HCC分化程度有關，此結果與某些文獻報道相一致，表明c-myc參與肝癌的形成，且可能與肝癌的分化程度有關。

Wnt信號通路主要有3條信號通路構成，Wnt/β-catenin信號通路是經典Wnt信號通路。迄今為止，Wnt/β-catenin是最受重視的信號通路，涉及多種腫瘤的形成機制。研究[7～9]發現在惡性腫瘤的細胞核中，Wnt/β-catenin異常的積聚與腫瘤預后不良有關。已有文獻猜測Wnt/β-catenin信號通路可能參與了肝細胞癌變的過程。劉銘等人[10]通過110例肝癌標本發現β-catenin在HCC中的異常表達與腫瘤分化、被膜浸潤等因素有關。Evason等[11]研究發現β-catenin在肝細胞癌早期發生改變、胞肝癌發生機制中起著重要作用。劉德忠等[12]用免疫組化檢測83例肝癌組織發現β-catenin與肝癌的分化有關，癌組織分化越低其陽性表達越高，此外其表達紊亂對肝癌患者的預后有一定的影響。Witjes等[13]發現β-catenin與HCC組織學分化程度相關，低分化癌細胞中β-catenin表達升高。另外有文獻認為阻斷β-catenin的異常表達，可提高患者預后的情況，可為臨床上治療肝細胞癌提供一些新的思路。我們的研究結果顯示，β-catenin在肝癌組織中陽性表達明顯高于癌旁組織，二者差異有統計學意義，表明β-catenin的異常表達參與肝癌的形成。我們研究還發現β-catenin在HCC中的表達與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個數、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無統計學關聯，與HCC組織分化的程度有關，與某些文獻報道相一致，表明在肝癌中存在β-catenin胞核的異常積聚，猜測該因子在肝癌發生、發展中起著重要作用。

本研究對c-myc和β-catenin進一步行MeNemar相關性分析，發現二者表達有密切相關性，呈正相關。程云娟等[14]檢測40例肝癌樣本發現c-myc和β-catenin的異常表達與肝癌的發生相關，且可以用于評估肝癌發病程度的進展及預后。姚忠強等[15]研究發現肝外轉移、術后復發及腫瘤分化的程度都與c-myc和β-catenin的異常表達有關，表明c-myc和β-catenin二者在肝癌形成的過程中起到協同作用，二者具有細胞內調節增殖和癌變的信號傳導途徑，即Wnt途徑。但本課題目前僅研究二者在蛋白水平的表達，二者在基因水平的表達與蛋白水平的表達是否具有一致性尚不是非常明確，因此需進一步檢測c-myc和β-catenin在基因程度中的表達，明確其與腫瘤分化、增殖及凋亡之間的關系。

綜上所述，c-myc和β-catenin參與肝癌的形成，可能作為判斷惡性腫瘤的程度及轉移的重要依據。因此，深入研究c-myc和β-catenin二者在肝癌中的關系，為進一步探討肝癌的具體發病機制提供新的思路。

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（收稿日期：2017-09-21修回日期：2017-11-09）

（編輯：梁明佩）endprint