UPLC/ESI-Q-TOF MS法分析遠(yuǎn)志中的化學(xué)成分*

柴士偉 ，楊 帆 ，于卉娟 ，王躍飛

遠(yuǎn)志為臨床常用中藥之一，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。《中國(guó)藥典》（2015版）規(guī)定了遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志（Polygala tenuifolia Willd.） 或卵葉遠(yuǎn)志（Polygala sibirica L.）的干燥根，具有安神益智、祛痰、消腫等功效[1]。臨床上常用于治療由于心腎不交而引起的失眠、多夢(mèng)、焦慮、神志迷糊、健忘驚悸、咳痰不爽等癥[2-3]，其主要化學(xué)成分包括糖酯、皂苷、口山酮類等[4-5]。文獻(xiàn)報(bào)道，以西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5、西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6為代表的寡糖酯類成分和口山酮類成分是遠(yuǎn)志及遠(yuǎn)志科其他植物中的特征性化學(xué)成分[4,6-9]。糖酯類化合物在抗癡呆、腦保護(hù)和抗抑郁方面表現(xiàn)出明顯的生物活性[10-13]；皂苷類化合物是遠(yuǎn)志發(fā)揮其鎮(zhèn)靜安神、祛痰止咳作用的主要藥效物質(zhì)[14-19]；口山酮類化合物具有止痛、抗菌、抗腫瘤、抗病毒等作用[20-22]。

采用超高效液相色譜-電噴霧離子化-四級(jí)桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC/ESI-Q-TOFMS）法分析遠(yuǎn)志中化學(xué)成分，并綜合文獻(xiàn)總結(jié)歸納了遠(yuǎn)志藥材中主要化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律，闡明遠(yuǎn)志藥材化學(xué)成分。

1 材料與方法

1.1 儀器 采用UPLC/ESI-Q-TOFMS（美國(guó)Waters公司）；萬(wàn)分之一天平（瑞士METTLER公司）；十萬(wàn)分之一天平（瑞士METTLER公司）；超純水儀（美國(guó)Millipore公司）；超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物有限公司）；臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；4℃醫(yī)用冷藏箱（青島海爾特種電器有限公司）。

1.2 試劑 質(zhì)譜級(jí)乙腈（美國(guó)Sigma-Aldrich公司）；色譜級(jí)甲醇（美國(guó)Sigma-Aldrich公司）；色譜級(jí)甲酸（美國(guó)Sigma-Aldrich公司）；超純水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

1.3 試藥 對(duì)照品：西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5（141102，SA5）、西伯利亞遠(yuǎn)志糖 A6（141015，SA5）、西伯利亞遠(yuǎn)志口山酮 B（140605，SX5）、遠(yuǎn)志口山酮 XI（141104，PXXI）、3,6′-二芥子酰基蔗糖（141024,DS）、細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷（141205，TF）、遠(yuǎn)志皂苷元（140717，SG）、遠(yuǎn)志酸（141127，PGA）、遠(yuǎn)志皂苷 D（140623，PGD）購(gòu)于成都普菲德生物技術(shù)有限公司，經(jīng)高效液相色譜-紫外法（UPLC-UV）分析除了3，6′-二芥子酰基蔗糖（95.3%）外純度均大于98%。樣品：遠(yuǎn)志（購(gòu)自亳州市藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地：山西）。

1.4 色譜條件 色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm,1.7μm）；流動(dòng)相：乙腈（B）-0.1%甲酸水（A），梯度洗脫：（0～12 min，11%～29%B；12～13 min，29%～36%B；13～24 min，36%～43.5%B；24～25 min，43.5%～90%B）；進(jìn)樣量：2 μL；流速：0.5 mL/min；柱溫：40℃。

1.5 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源（ESI）掃描方式；正離子模式毛細(xì)管電壓：3.0 kV；負(fù)離子模式毛細(xì)管電壓：-2.5kV；離子源溫度：120℃；脫溶劑氣溫度：400℃；脫溶劑氣流量：700 L/h；錐孔氣流量：50 L/h；碰撞氣（氬氣）：0.20 mL/min。質(zhì)量軸校正采用亮氨酸-腦啡肽（m/z[M+H]+=556.277 1，m/z[M-H]-=554.261 5）溶液。質(zhì)量掃描范圍：m/z 100～2 000 Da，數(shù)據(jù)分析：Masslynx V 4.1軟件。

1.6 供試品溶液的制備 取遠(yuǎn)志，粉碎，過(guò)60目篩，取0.5 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加入適量甲醇，密塞，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）30 min，放至室溫，甲醇定容至刻線，搖勻，渦旋1 min后14 000 r/min離心10 min，取上清液，即得。1.7 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 分別取SA5、SA6、SX5、PXXI、DS、TF、SG、PGA、PGD 各 5 mg，精密稱定，加甲醇和少量DMSO溶解并配制成每1 mL分別含有SA5 0.050 mg、SA6 0.052 mg、SX5 0.050mg、PXXI0.063 mg、DS0.049 mg、TF 0.054 mg、SG0.049 mg、PGA 0.052 mg、PGD 0.056 mg的混合對(duì)照品溶液，即得。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 遠(yuǎn)志化學(xué)成分的UPLC/ESI-Q-TOFMS分析采用UPLC/ESI-Q-TOFMS對(duì)遠(yuǎn)志的化學(xué)成分進(jìn)行質(zhì)譜定性鑒別，供試品溶液總離子流圖分別見(jiàn)圖1（A）、圖 1（C），對(duì)照品溶液總離子流圖分別見(jiàn)圖1（B）、圖 1（D）。共檢測(cè)到 36個(gè)化合物，鑒定和推測(cè)了29個(gè)化合物，包括14個(gè)糖酯、4個(gè)口山酮、9個(gè)皂苷、2個(gè)苷元。通過(guò)與對(duì)照品的保留時(shí)間、質(zhì)譜碎片信息的比對(duì)，確證了 SA5、SA6、SX5、PXXI、DS、TF、SG、PGA、PGD化合物。參考相關(guān)文獻(xiàn)[23-27]，根據(jù)色譜保留時(shí)間、質(zhì)譜數(shù)據(jù)以及裂解規(guī)律，推測(cè)了20個(gè)化合物。所檢測(cè)到的化合物的保留時(shí)間、準(zhǔn)分子離子和加合離子的精確質(zhì)量數(shù)、誤差、理論分子量、分子式和二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了一種高效、快速的UPLC-Q/TOF MS方法，通過(guò)結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖及查閱相關(guān)文獻(xiàn)，鑒定和推測(cè)了遠(yuǎn)志藥材中29個(gè)化學(xué)成分，并總結(jié)了遠(yuǎn)志中糖酯、口山酮、皂苷類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律，為遠(yuǎn)志藥材進(jìn)一步研究和其他中藥研究奠定了基礎(chǔ)。

圖1 供試品溶液正離子模式（A）、對(duì)照品溶液正離子模式（B）、供試品溶液負(fù)離子模式（C）、對(duì)照品溶液負(fù)離子模式（D）總離子流圖Fig.1 UPLC/ESI-Q-TOF MStotal ion chromatograms of RPextracts(A)in positive ion mode and(C)in negative ion mode,base peak intensity chromatogramsof mixed standards(B)in positive ion mode and(D)in negativeion mod

表1 遠(yuǎn)志化學(xué)成分的質(zhì)譜鑒定Tab.1 Identification of chemical constituents in RPby UPLC/ESI-Q-TOF MS

續(xù)表1

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