Tyrer-Cuzick模型聯合SNPs位點在江西地區乳腺癌診斷中應用研究

張樂 徐勝昔 郭翔取 張利群

摘 ? 要：目的 ?探討Tyrer-Cuzick模型聯合SNPs位點在江西地區乳腺癌診斷中的應用價值。方法 ?選取2016年1月～2017年12月我院收治的乳腺癌患者150例作為A組，選擇同期乳腺良性腫瘤患者130例作為B組。采用病史采集回顧性分析，使用Gail及Tyrer-Cuzick模型計算乳腺癌患病風險值，比較兩者的風險值的靈敏度、準確度，繪制ROC曲線圖，比較曲線下面積。使用PCR測序法統計FGFR2基因rs2981582位點基因分型的數目及頻率，采用非條件Logist回歸分析結果。結果 ?Tyrer -Cuzick模型應用于風險評估的敏感度66.00%，特異度86.92%，陽性預測值為85.34%，陰性預測值68.90%; 其ROC曲線下面積0.786大于Gail模型的0.665，差異有統計學意義（P<0.001）;FGFR2基因rs2981582位點在A組基因型CC、CT、TT的分布頻率分別為44.00%、43.33%、12.67%，在B組基因型CC、CT、TT的頻率分別為38.46%、38.46%、23.08%。結論 ?Tyrer-Cuzick模型聯合rs2981582位點可用于江西地區乳腺癌篩查和診斷，不失為一種新方法，且TT基因型可能增加江西地區乳腺癌患病風險。

關鍵詞：Tyrer-Cuzick模型;SNPs位點;乳腺癌

中圖分類號：R737.9;R445.1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.24.038

文章編號：1006-1959（2018）24-0131-03

Abstract：Objective ?To investigate the value of Tyrer-Cuzick model combined with SNPs in the diagnosis of breast cancer in Jiangxi. Methods ?From January 2016 to December 2017， 150 patients with breast cancer admitted to our hospital were selected as group A， and 130 patients with benign breast tumors were selected as group B. Retrospective analysis of medical history was used to calculate the risk value of breast cancer using Gail and Tyrer-Cuzick models. The sensitivity and accuracy of the risk values were compared. ROC curves were drawn and the area under the curve was compared. The number and frequency of FGFR2 gene rs2981582 genotyping in the two groups were counted by PCR sequencing， and the results were analyzed by unconditional Logist regression. Results ?The sensitivity of the Tyrer-Cuzick model was 66.00%， the specificity was 86.92%， the positive predictive value was 85.34%， and the negative predictive value was 68.90%. The area under the ROC curve was 0.786， which was larger than 0.665 of the Gail model，the difference was statistically significant（P<0.001）; the distribution frequency of FGFR2 gene rs2981582 in group A genotype CC， CT， TT was 44.00%， 43.33%， 12.67%， respectively. The frequency of group B genotype CC， CT， TT was 38.46. %， 38.46%， and 23.08%.Conclusion ?Tyrer-Cuzick model combined with rs2981582 can be used for breast cancer screening and diagnosis in Jiangxi， which is a new method， and TT genotype may increase the risk of breast cancer in Jiangxi.

Key words：Tyrer-Cuzick model;SNPs locus;Breast cancer

在我國罹患乳腺癌的婦女死亡率呈逐年上升趨勢。及早對女性進行乳腺癌風險評估，提高乳腺癌早期檢出率是關鍵。而乳腺癌預測模型及SNP（single nucleotide polymorphism）是目前研究的熱點。本文旨在將Tyrer-Cuzick模型與江西地區亞裔婦女乳腺癌易感基因的SNP位點結合應用在乳腺癌風險評估中，以期建立一個新的風險評估形式。

1 資料與方法

1.1一般資料 ?選擇2016年1月～2017年12月南昌大學附屬九江市第一人民醫院女性乳腺癌接受手術治療的患者150例作為A組，患者術前未接受化療或放療，年齡 35～69歲，平均年齡（51.02±4.63）;選擇同期乳腺良性腫瘤女性患者130例作為B組，患者無惡性腫瘤病史，年齡 35～69歲，平均年齡（52.78±5.01），本研究經本院倫理委員會審批通過。

1.2提取數據 ?收集上述病例相關危險因素信息，分別應用Gail模型和Tyrer-Cuzick模型回顧性計算280例婦女未來5年患癌風險值。

1.3 FGFR2基因 rs2046210位點的基因提取 ?將上述收集280例患者腫塊標本石蠟塊每例制作成10～15 μm的石蠟切片3片。采用成都福際生物的通用基因組DNA提取試劑盒 ，按照試劑盒說明書抽提基因組DNA。提取完畢DNA后盡快使用。根據NCBI 數據庫及國內外文獻報道，選擇FGFR2基因rs2981582位點作為研究對象。采用Primer Premier 5.0軟件設計引物（上海英俊生物技術公司），上游引物5'-CGTGAGCCAAGCCTCTACTT-3'，下游引物5'-TCTCACACGATTGCTTCAGG-3'。按下列比例配制反應液：10×PCR buffer 2.5 μl，DNA 模板2.0 μl，dNTP 0.5 μl，Taq酶0.5 μl，Forward primer1.0 μl，reverse primer1.0 μl，純化水17.5 μl，反應體系總體積25 μl。上樣于 ABI 9700 PCR儀進行擴增（ABI，USA）。PCR擴增參數：95 ℃ 50 s，54 ℃ 50 s，72 ℃ 1 min，35 個循環后，72 ℃ 延伸 5 min。PCR產物送上海吉凱基因有限公司測序，統計基因型的數目及頻率，然后計算相應等位基因的頻率。

1.4統計學分析 ?采用SPSS 17.0軟件分析兩組使用Gail模型和Tyrer -Cuzick模型計算出來的風險值，分別計算其ROC曲線下面積，進行？字2檢驗，P<0.001表示差異有統計學意義，ROC曲線下面積在0.5～0.7時有較低準確性，ROC曲線下面積在0.7～0.9時有一定準確性，ROC曲線下面積>0.9時有較高準確性。采用？字2檢驗驗證該位點基因型分布頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律、比較等位基因頻率在兩組之間的差異，P≤0.05為差異有統計學意義。分別采用非條件Logistic回歸計算OR和CI評估rs2981582多態性與乳腺癌患病風險及臨床病理參數的關系。

2 結果

2.1兩種模型預測未來5年患浸潤性乳腺癌的風險值比較 ?使用Gail模型預測上兩組未來5年患浸潤性乳腺癌的風險值所繪制的ROC曲線（見圖1），確定該曲線上的界值，該界值為0.31%，風險值>0.31%為高風險，風險值<0.31%為低風險。Gail模型應用于風險評估的敏感度53.33%，特異度 77.69%，陽性預測值為73.39%，陰性預測值 59.06%，有統計學意義（？字2=16.98，P<0.001），ROC 曲線下面積 0.665。使用Tyrer-Cuzick模型預測未來5年患浸潤性乳腺癌的風險值所繪制的ROC曲線見圖2，確定該ROC曲線上的界值，該界值為0.53%，風險值>0.53%為高風險，風險值<0.53%為低風險列出診斷性試驗的評價結果。Tyrer -Cuzick模型應用于風險評估的敏感度 66.00%，特異度 86.92%，陽性預測值為85.34%，陰性預測值68.90%，差異有統計學意義（？字2=17.00，P<0.001），ROC 曲線下面積0.786。

2.2兩組FGFR2基因 rs2046210位點基因分型結果比較 ?FGFR2基因rs2981582位點在A組的基因型CC、CT、TT的例數分別為 66例、65例、19例，其分布頻率分別為 44.00%、43.33%、12.67%。等位基因T的頻率為34.60%，等位基因C的頻率為58.67%;B組基因型 CC、CT、TT 的例數分別為 50例、50例、30例，其頻率分別為38.46%、38.46%、23.08%，等位基因 T 的頻率為42.25%。兩組rs2981582點位基因型與乳腺癌患病風險結果見表1。

3 討論

我國目前應用較廣的乳腺癌風險評估模型仍以Gail模型為主，但大量報道顯示其可能低估了女性乳腺癌患病風險。Tyrer-Cuzick模型將惡性腫瘤家族史、遺傳及非遺傳因素等多種早前廣泛報道與乳腺癌發病密切相關的因素囊括在內，故相較于前者，后者準確性更高但后者在我國缺乏各地大樣本報道。本研究采用病史采集回顧性分析將兩組分別使用Gail、Tyrer-Cuzick 模型計算出的乳腺癌患病風險值繪制出ROC曲線圖，通過比較曲線下面積。明確得出Tyrer-Cuzick模型預測準確性優于Gail模型，為其提供了江西地區樣本數據。

SNP是指基因組上單個核苷酸的變異（轉換、顛換、缺失和插入）所形成的第三代可檢測的遺傳標志性物質，變異頻率一般>1%。SNP在CG序列上出現最為頻繁，且多是由C轉換為T ，原因可能是胞嘧啶常被甲基化，而后自發地脫氨成為胸腺嘧啶[1]。SNP位點多態性的差異會造成不同個體對環境的刺激產生差異性敏感，從而導致疾病發病率及耐藥性的個體差異[2]。本研究顯示在江西地區人群樣本中FGFR2基因rs2981582位點等位基因T在A組的分布頻率為34.60%，而在B組的分布頻率為42.25%，分布頻率符合Hardy-Weinberg 平衡檢驗。基因CC、CT、TT型在乳腺癌A組的分布頻率分別為44.00% 、43.33% 、12.67%。對照B組頻率分別為38.46%、38.46%、23.08%。采用Logistic回歸顯示TT基因型分布頻率在A組低于B組，差異有統計學意義（P=0.035），以CC基因型作為內參，TT基因型可能是降低乳腺癌保護的因素。這說明rs2981582位點TT基因型有可能增加乳腺癌患癌風險。

因此，Tyrer-Cuzick模型聯合rs2981582位點可用于江西地區乳腺癌篩查和診斷，不失為一種新方法。

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收稿日期：2018-10-18;修回日期：2018-11-2

編輯/成森