拜城油雞鞘磷脂提取物對高脂血癥小鼠血脂及肝臟的影響

依帕爾古麗·阿不拉，阿依姑麗·艾合麥提，熱娜古麗·木沙，李 珊

(新疆農業大學食品科學與藥學學院，烏魯木齊 830052)

鞘磷脂(sphingomyelin，SM)是生物細胞膜的主要成分，由磷酸膽堿、鞘氨醇及脂肪酸組成的兩性脂類，也是哺乳動物血漿中第2豐富的磷脂，18%的血漿磷脂以鞘磷脂的形式存在[1-2]；血清鞘磷脂參與脂蛋白代謝，進而影響動脈粥樣硬化[3]。近幾年的研究結果表明，鞘磷脂與人體內的脂肪酸、膽固醇及毒枝菌素所引起的一些疾病有著密切的關系，因此，食品中的鞘磷脂逐漸受到人們的關注[4-5]。有報道表明，在小鼠動物實驗中，鞘磷脂可通過改善脂肪器官的感性起到抑制小鼠結腸癌的作用[6-8]。本研究采用飼喂高脂飼料建立高脂血癥小鼠模型，初步探討拜城油雞鞘磷脂提取物對高脂血癥性小鼠血清生化指標以及肝功能的影響。為今后進一步深入研究拜城油雞鞘磷脂提取物預防脂肪肝的作用機制奠定理論基礎。

1 儀器與材料

1.1儀器 AU400全自動生化分析儀(日本Olympus公司)；NICO7200分光光度計(尤尼柯儀器有限公司)；TGL-20M臺式高速冷凍離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)；電熱鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)。

1.2試藥 血脂康膠囊，購自北京北大維信生物科技有限公司(批號 20100108)；三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所(批號20101118)。

1.3動物 取健康昆明小鼠60只，雌雄各半，體質量為20±2 g，由新疆醫科大學實驗動物中心供應，許可證號:SCXK(新)2016-0003。

2 方法

2.1供試品溶液及高脂乳劑的制備 鞘磷脂(SM)：準確稱取50 g雞皮，切碎，用正己烷洗脫中性脂質，乙醇攪拌后過濾，濾液在室溫中靜置48 h，再次過濾，用旋轉蒸發儀濃縮至干燥。將干燥的乙醇提取物用甲醇鈉水解(37 ℃，1 h)，并用硫酸將溶液的pH值調至1，37 ℃靜置1 h，再用氫氧化鈉將溶液的pH調至中性。將混合物用己烷∶乙醇∶水(8∶4∶1)進行萃取，下層相利用旋轉蒸發儀濃縮至干燥，干燥的固體物中加水和體積分數為50%的丙酮，室溫下離心，重復2次，將沉淀部分用乙醇溶解后濃縮至干燥，干燥的固體物稱定質量獲得SM[9]。

高脂乳劑：按照文獻方法[10]進行制備。

血脂康：將血脂康膠囊用蒸餾水制成所需質量濃度的混懸液。

2.2小鼠的分組、造模與給藥 將60只小鼠隨機分為6組：正常對照組、高脂模型組(給予高脂乳劑0.02 mL·g-1)、陽性對照組(給予血脂康0.10 g·kg-1·d-1)和鞘磷脂高、中、低劑量組(給予鞘磷脂0.20,0.10和0.05 g·kg-1·d-1),分組和給藥方案見表1。實驗周期為35 d，每周稱定小鼠質量1 次，末次給藥后，小鼠12 h禁食不禁水，眼球取血，血液靜置2 h，以3 000 r·min-1離心10 min后，分離血清，備用；同時，快速取出肝臟，稱定質量并計算臟器系數，提取若干小葉備病理切片用。

臟器系數=肝臟濕質量(mg)÷體質量(g)×100%

表1實驗小鼠分組和給藥方案

Tab.1 The dosage regimen of experimental mice

組別藥物高脂乳劑/mL·g-1生理鹽水/mL·g-1血脂康/g·kg-1·d-1鞘磷脂提取物/g·kg-1·d-1正常對照組-適量(Day)--高脂模型組0.02(AM)適量(PM)--陽性對照組0.02(AM)-0.10(PM)-高劑量組0.02(AM)--0.20(PM)中劑量組0.02(AM)--0.10(PM)低劑量組0.02(AM)--0.05(PM)

注：- 表示未給藥或用生理鹽水灌胃。

2.3肝臟組織病理學檢查 將已取出的肝右小葉用4 ℃生理鹽水洗凈，用質量濃度為6.5 g·L-1的中性甲醛溶液固定，制成病理切片，進行蘇木精-伊紅染色，用生物顯微鏡觀察各組肝組織切片，比較觀察病理學變化。

3 結果與分析

3.1鞘磷脂提取物對高脂血癥小鼠體質量及臟器系數的影響 見表2。由表2可知，各組小鼠的體質量間差異無統計學意義(P>0.05)。與正常對照組相比，高脂模型組小鼠的臟器系數極顯著性升高(P<0.01)，臟器系數越高表示肝臟的受損程度越大；與高脂模型組相比，鞘磷脂提取物高、中劑量組和陽性對照組小鼠的臟器系數極顯著下降(P<0.01)。

3.2鞘磷脂提取物對高脂血癥小鼠血清的影響 見表3。由表3可知，與正常對照組相比，高脂模型組TG、TC和LDL-C含量顯著升高(P<0.05)，HDL-C含量顯著降低(P<0.05)，結果表明，小鼠高脂血癥模型誘導成功。與高脂模型組比較，鞘磷脂提取物高劑量組和陽性對照組TC、TG和LDL-C含量顯著降低(P<0.05)，HDL-C的含量顯著升高(P<0.05)。結果表明，鞘磷脂提取物和血脂康均能降低高脂血癥小鼠的血脂水平。

表2鞘磷脂提取物對高脂血癥小鼠體質量和臟器系數的影響

注：與正常對照組比較*P<0.05，**P<0.01；與高脂模型組比較△P<0.05，△△P<0.01。

表3鞘磷脂提取物對高脂血癥小鼠血清生化指標的影響

注：與正常對照組比較*P<0.05；與高脂模型組比較△P<0.05。

3.3鞘磷脂提取物對高脂血癥小鼠肝臟組織病理學變化分析 見圖1。

圖1各組小鼠肝臟組織的病理學變化

A．正常對照組(×100)；B．正常對照組(×400)；C．高脂模型組(×100)；D．高脂模型組(×400)；E．陽性對照組(×100)；F．陽性對照組(×400)；G．低劑量組(×100)；H．低劑量組(×400)；I．中劑量組(×100)；J．中劑量組(×400)；K．高劑量組(×100)；L．高劑量組(×400)。

Fig.1 The pathological changes of liver tissues in each groups of mice

A.control group (×100)；B.control group (×400)；C.high fat model group (×100)；D.high fat model group (×400)；E.positive control group (×100)；F.positive control group (×400)；G.low dose group (×100)；H.low dose group (×400)；I.middle dose group (×100)；J.middle dose group (×400)；K.high dose group (×100)；L.high dose group (×400).

由圖1可知，正常對照組周圍肝細胞結構正常，肝細胞竇清晰；高脂模型組有散在的點狀壞死灶，灶中可見中心粒細胞部分中央靜脈擴張充血，多數肝細胞胞脂中含有脂滴，部分中央靜脈周圍的肝細胞水腫較為明顯，可見肝細胞索結構紊亂，肝竇狹窄；陽性對照組中央靜脈周圍肝細胞輕度顆粒樣變，部分遠離中央靜脈肝細胞輕度脂變，肝索、肝竇結構較為清晰；鞘磷脂低劑量組中央靜脈周圍肝細胞輕微脂肪變，脂肪變多位于中央靜脈周圍，遠離中央靜脈多呈輕微的顆粒樣變；鞘磷脂中劑量組部分肝細胞呈輕中度脂肪變性，細胞輕度腫脹，肝竇狹窄，部分肝細胞嗜酸變，核濃縮；鞘磷脂高劑量組部分中央靜脈輕度擴張充血，部分肝細胞輕度脂變，肝索、肝竇結構清晰。

4 討論

高脂血癥又稱脂類代謝紊亂或異常，是導致脂肪肝和動脈粥樣硬化等多種疾病的因素[11-14]。肝臟是脂類代謝的重要器官，在脂類消化、吸收、代謝及運輸等過程中起著重要的作用[15]。崔瑩雪等[16]研究發現，ApoE-/-小鼠在給予高脂飲食12周后，早期艾灸關元穴可一定程度上調整ApoE-/-小鼠血脂代謝的紊亂狀態，減慢肝臟組織病變發生。阿依姑麗·艾合麥提等[17]在通過灌服高脂乳劑建立高脂血癥模型的基礎上，發現TFWA可降低高血脂大鼠的血脂，能減少肝臟損傷。魏國華等[18]報道，高脂飲食是導致家兔在肝臟中呈現病理改變的原因，并隨著高脂飲食的時間延長，病變逐步加重。實驗結果發現，經過35 d灌胃高脂乳劑的小鼠，肝臟呈病變趨勢；當灌胃鞘磷脂提取物后，肝細胞的部分中間靜脈輕度擴張充血，部分肝細胞輕度脂變，肝索、肝竇結構清晰，說明鞘磷脂具有一定的保護肝細胞、防止肝細胞變性的作用。

另外，Exon J H等[19]研究發現，鞘磷脂能夠降低小鼠異常結腸隱窩數量，抑制結腸隱窩細胞數量擴增，但對小鼠的免疫功能無較大影響。Dillellay D L等[20]將健康雌性CF1小鼠用1，2-二甲肼鹽酸(DMH)處理后，再用飼料(含鞘磷脂0.025%～0.1%)喂養28周，結果發現，鞘磷脂組小鼠結腸腫瘤的發生率降至20%。本實驗通過灌胃高脂乳劑的方法建立小鼠高脂血癥模型，給藥35 d后發現，與高脂模型組比較，給藥組小鼠血清TC、TG和LDL-C含量顯著下降，肝組織脂肪變性也得到顯著改善。

研究結果表明，拜城油雞鞘磷脂提取物可顯著降低高脂血癥小鼠的血脂水平，能保護肝細胞、改善肝細胞脂肪變性，為今后拜城油雞鞘磷脂提取物對實驗動物血脂與肝臟的深入研究奠定基礎。

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