甲磺酸桂哌齊特與馬來酸桂哌齊特注射液藥動學比較研究

羅芳梅，曹 靖，王 婷，劉 輝，田 娟，丁勁松

(1.湖南省兒童醫院，長沙 410007；2.中南大學湘雅藥學院，長沙 410013)

馬來酸桂哌齊特(cinepazide maleate，CMA)具有增加內源性腺苷、拮抗鈣離子、擴張血管和促進腦細胞營養代謝等作用，對心腦缺血細胞具有保護作用[1-3]。CMA臨床應用廣泛，主要用于心腦血管、外周血管疾病及其他疾病的治療，如不穩定型心絞痛[4]、高血壓性腦出血[5]、腦梗死[6-7]、蛛網膜下腔出血[8]、腎絞痛[9-10]、糖尿病周圍神經病變[11]及急診眩暈[12]等。但CMA注射液的光穩定性較差，對其生產、儲藏、運輸和使用帶來不便，同時也給臨床安全用藥帶來隱患[13-15]。為了改善桂哌齊特的光穩定性，更好的發揮其臨床優勢，北京四環制藥有限公司研制了桂哌齊特(cinepazide，CPZ)的甲磺酸鹽，即甲磺酸桂哌齊特(cinepazide mesylate，CME)。臨床前藥效學對比研究發現，CME與CMA一樣，具有擴張血管、改善循環及保護腦細胞的作用。分別以水和甲醇為溶劑比較CME和CMA的溶解度發現，CME的溶解度高，更適合做成注射劑。理化性質的改變可能改變其體內處置，而體內處置與療效、毒性和不良反應等安全性問題密切相關。此外，心腦血管疾病如心絞痛[16]、腦梗死[17]及蛛網膜下腔出血[18]等臨床治療需多次用藥，而連續多次給藥后藥物在體內可能會蓄積中毒。因此，對CPZ改變酸根前后進行單次與多次給藥藥動學比較研究是非常必要的。本研究考察了CME和CMA單次與多次給藥的藥動學特征，并比較了單次與多次給藥、酸根改變前后的藥動學特征，為其臨床研究提供依據。

1 儀器與材料

1.1儀器 LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津公司)；XW-80A微型渦旋混合儀(上海滬西分析儀器廠有限公司)；TDD5M多管低速離心機(長沙平凡儀表有限公司)；TGL16M低溫高速離心機(長沙泰英儀器廠)；KL-up-Ⅱ-10型超純水機(臺灣艾柯公司)；BP 211D型十萬分之一天平(北京賽多利斯科學儀器有限公司)。

1.2試藥 甲磺酸桂哌齊特注射液(規格：250 mg/10 mL，批號110902)，馬來酸桂哌齊特注射液(規格：320 mg/10 mL，批號20110940)，桂哌齊特游離堿(質量分數為96.7%，批號110422-1)，均為北京四環制藥有限公司生產；鹽酸坦索羅辛對照品(中國食品藥品檢定研究院，質量分數為99.8%，批號1006882004-01)；乙腈(批號LOT40Y1201SS)，甲醇(批號LOT1105074)，均為色譜純，購自美國天地有限公司；冰醋酸(批號T20100519)，乙酸銨(批號F20091117a)，三乙胺(批號F20100802)，均為國藥集團化學試劑有限公司生產；色譜用水為試驗自制去離子超純水；其余試劑均為國產分析純。

1.3材料 空白人血漿和尿液(來自健康受試者)。

2 方法

2.1志愿者 篩選12名中國健康志愿者，男女各半，年齡為20～27歲，身高150～176 cm，體質量45.5～65.5 kg。試驗方案經中南大學湘雅三醫院倫理委員會批準，且試驗前所有志愿者均簽署知情同意書。

2.2試驗方案 采用2×2交叉試驗設計，12名健康志愿者，男女各半，在兩周期內分別靜脈滴注CME 250 mg和CMA 320 mg(以CPZ計，為等摩爾劑量)，每周期連續給藥5 d，每日1次。洗脫期為10 d。

血樣采集與保存：于每周期給藥的第1和5天給藥前(0 h)分別采靜脈血5 mL，給藥開始后0.5，1，1.5，2 h(滴完)，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12和14 h以及第3和4天給藥前分別采靜脈血5 mL，血樣立即離心，-80 ℃保存待測。

尿樣采集與保存：在每周期第1天給藥前采集尿液樣本并排空膀胱，于給藥開始后0～2，2～4，4～8，8～12和12～24 h分段收集尿液樣本，測量體積后，留取5 mL樣品，-80 ℃保存待測。

2.3測定方法 采用HPLC-UV法測定血樣和尿樣中的CPZ[19]。

2.3.1色譜條件 色譜柱：依利特C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm)；保護柱：Security Guard C18柱(4 mm×3.0 mm，Phenomenex，USA)；流動相：乙腈∶乙酸銨緩沖溶液(1 mL·L-1醋酸+2 mL·L-1乙酸銨+1 mL·L-1三乙胺)=29∶71；柱溫：40 ℃；流速：1 mL·min-1；進樣量：30 μL。

2.3.2樣品處理 血樣處理：取血樣200 μL，置于2 mL EP管中，精密加入25 μL 質量濃度為200 μg·mL-1的鹽酸坦索羅辛內標溶液，渦旋30 s，加入100 μL甲醇-50 g·L-1硫酸鋅(70∶30)沉淀劑，渦旋振蕩1 min，以13 500 r·min-1離心10 min，取上清200 μL，置于進樣瓶的內襯管中，進樣30 μL。

尿樣處理：取尿樣200 μL，置于2 mL EP管中，精密加入25 μL質量濃度為 2 mg·mL-1的鹽酸坦索羅辛內標溶液，渦旋30 s，加入1 mL甲醇-水(30∶80)溶液，渦旋振蕩1 min，以13 500 r·min-1離心10 min，取上清200 μL，置于進樣瓶的內襯管中，進樣30 μL。

2.4統計學處理 采用DAS Ver 2.1計算CPZ的藥動學參數，采用非房室模型擬合法計算各志愿者血漿中CPZ的藥動學參數。利用SPSS 13.0進行統計分析。

對CPZ的藥動學參數lnCmax、lnAUC0～t、lnAUC0～∞、V和CL進行方差分析，并對參數t1/2和MRT0～t進行非參數檢驗，對尿累積排泄率進行獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1方法學驗證 血樣中CPZ、內標的保留時間分別為8.0和6.8 min，尿樣中分別為7.9 和6.6 min，特異性良好。分別配制CPZ質量濃度為15，10，5，1，0.5，0.1和0.05 μg·mL-1的CPZ標準血樣和CPZ質量濃度為300，150，50，25，5，1和0.5 μg·mL-1的CPZ標準尿樣，按照2.3.2項下方法處理后，采用內標法計算質量濃度。血樣、尿樣中CPZ的線性回歸方程分別為y=1.24x-0.046 4(r=0.997 7)和y=6.86×10-5x+0.16(r=0.998 0)，線性范圍分別為0.05～15.0和0.5～300 μg·mL-1，定量下限分別為0.05和0.5 μg·mL-1(S/N≥10)。血樣、尿樣的提取回收率見表1。日內、日間精密度見表2。CPZ血樣及尿樣室溫避光放置6 h穩定(RSD<7.0%，3.3%)。血樣及尿樣處理液室溫避光放置24 h穩定(RSD<5.4%，5.3%)，4 ℃避光放置48 h穩定(RSD<7.2%，6.3%)。CPZ血樣和尿樣均在3次凍融過程中穩定(RSD<3.2%，2.9%)。CPZ血樣及尿樣在-80 ℃放置60 d穩定(RSD<10.4%，5.2%)。

3.2受試者入組及完成情況 12名健康志愿者參與本試驗，其中1名于第1周期給藥第4天因個人時間原因撤銷知情同意，退出試驗，共11名志愿者完成全部試驗。

表1血樣、尿樣中CPZ和內標的提取回收率

3.3藥時曲線

3.3.1血藥質量濃度的測定 11名志愿者單次、多次靜脈滴注CME和CMA后CPZ平均血藥質量濃度時間曲線見圖1。

3.3.2尿藥質量濃度的測定 12名志愿者參與本試驗的尿液樣本收集，其中10號因試驗中途退出，第2周期的尿液樣本缺失，6號第1周期因生理期未收集尿液樣本，其余志愿者均按照試驗方案收集尿液樣本。志愿者靜脈滴注CME 250 mg和CMA 320 mg后24 h內CPZ尿累積排泄率分別為55.30%±3.39%和56.22%±3.61%。平均尿累積排泄率-時間曲線見圖2。

表2血樣、尿樣中CPZ的精密度

圖1受試者單次、多次靜脈滴注CME/CMA后CPZ平均血藥質量濃度-時間曲線(n=11)

Fig.1 Mean plasma concentration(μg·mL-1)-time(h) curve of CPZ after single and multiple intravenous drip of CME/CMA(n=11)

圖2志愿者單次靜脈滴注CME和CMA后尿中CPZ平均累積排泄率-時間曲線(n=11)

Fig.2 Mean urine cumulative excretion rate(%)-time(h) curve of CPZ after single intravenous drip of CME and CMA(n=11)

3.4藥動學參數 11名志愿者單次和多次靜脈滴注CME 250 mg和CMA 320 mg后CPZ的藥動學參數見表3。

表3CPZ的藥動學參數

注：—表示未檢測到數據。

3.5統計分析

3.5.1單次與多次給藥比較 與單次給藥比較，連續多次靜滴CME或CMA后主要藥動學參數(lnAUC0～t、lnAUC0～∞、lnCmax、V、CL、t1/2和MRT0～t)間差異均無統計學意義(P>0.05)，且谷濃度低于定量下限，表明CME或CMA多次給藥后無藥物蓄積，多次給藥不改變其體內藥動學過程。

3.5.2CME與CMA比較 CME和CMA單次或多次給藥后主要藥動學參數(lnAUC0～t、lnAUC0～∞、lnCmax、V、CL、t1/2和MRT0～t)間差異均無統計學意義(P>0.05)。單次給藥后尿累積排泄率在不同酸根間差異均無統計學意義(P>0.05)。

4 討論

與單次給藥相比，連續多次給藥后CPZ的主要藥動學參數間差異均無統計學意義(P>0.05)，且多次給藥后谷濃度樣本中未檢測出CPZ，提示多次給藥不影響CPZ的代謝消除，無藥物蓄積。CME與CMA單次與多次給藥后的主要藥動學參數間差異均無統計學意義(P>0.05)，單次給藥后CPZ尿累積排泄率在不同酸根間差異無統計學意義(P>0.05)，提示CME與CMA在人體內藥動學行為相似。

5 結論

甲磺酸桂哌齊特與馬來酸桂哌齊特單次與多次給藥后在人體內藥動學行為相似，連續多次給藥，體內無蓄積。

[1] 趙宏偉，張曉熒，張四喜，等.馬來酸桂哌齊特注射液的臨床應用分析[J].中國藥物應用與監測，2016，13(3)：175-177.

[2] 姚波，孫玉敏，武學偉，等.疏血通注射液聯合桂哌齊特治療短暫性腦缺血發作的療效觀察[J].現代藥物與臨床，2016，31(10):1595-1598.

[3] 周智慧，楊杰.中藥干預細胞能量代謝治療心腦血管疾病的研究進展[J].西北藥學雜志，2016，31(6)：658-660.

[4] 李昱，王冠濤，王洪有.馬來酸桂哌齊特治療不穩定型心絞痛的療效觀察[J].醫學信息，2014，27(6)：215-216.

[5] 史楠，余波，于偉紅，等.馬來酸桂哌齊特對高血壓性腦出血的臨床研究[J].中國臨床藥理學雜志，2016，32(3)：270-273.

[6] 宮大勇.馬來酸桂哌齊特聯合尤瑞克林治療急性腦梗死臨床研究[J].現代藥物與臨床，2017，32(3)：394-397.

[7] 易湛苗，劉芳，翟所迪.馬來酸桂哌齊特治療急性腦梗塞的系統評價[J]．中國循證醫學雜志，2010，10(9):1079-1084.

[8] 李青，楊衛忠，張國良，等．馬來酸桂哌齊特治療自發性蛛網膜下腔出血的療效觀察[J]．海峽藥學，2006，18(4)：111-112．

[9] 馮宇鵬，葉向東，連學雄，等.馬來酸桂哌齊特治療腎絞痛的臨床療效及安全性評價[J].中國臨床藥理學雜志，2015，31(18)：1822-1824.

[10]陳立波，崔艷鳳，張長寧，等.馬來酸桂哌齊特治療糖尿病腎病的臨床觀察[J].醫學研究雜志，2016，45(12)：141-143.

[11]韋麗，張建軍.甲鈷胺、依帕司他、馬來酸桂哌齊特治療糖尿病周圍神經病變的效果[J].中國醫藥導報，2016，13(5)：157-160.

[12]朱力華.馬來酸桂哌齊特聯合鹽酸異丙嗪治療急診眩暈癥的價值分析[J].當代醫學，2017，23(1)：71-72.

[13]李晉崗，張穎，羅芳梅，等.HPLC-MS/MS法研究人尿中甲磺酸桂哌齊特的主要代謝產物[J].中南藥學，2014，12(8)：782-785.

[14]劉華祥.馬來酸桂哌齊特的制備及其光致順反異構研究[D].大連：大連理工大學，2009.

[15]盧海儒，孫海霞.克林澳[J].中國新藥雜志，2003，12(11)：957-959.

[16]項燕凌.丹參酮ⅡA 磺酸鈉聯合馬來酸桂哌齊特治療不穩定型心絞痛患者臨床療效觀察[J].中國現代醫學雜志，2015，25(9)：51-53.

[17]劉永，王新玲.依達拉奉聯合左旋氨氯地平治療高血壓腦梗死的療效觀察[J].西北藥學雜志，2016，31(4)：412-414.

[18]馮怡墨，孫曉川，張曉冬，等.依達拉奉聯合馬來酸桂哌齊特治療動脈瘤性蛛網膜下腔出血后腦血管痙攣的臨床觀察[J].中國藥房，2017，28(2)：230-232.

[19]羅芳梅，何周康，王婷，等.甲磺酸桂哌齊特注射液在健康志愿者中的藥動學研究[J].中南藥學，2017，15(2)：178-182.