聚乙二醇干擾素α-2b治療慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞亞群和血清細胞因子水平變化*

羅丹，陳勇，陳清，萬十千

臨床常用的治療CHB患者的抗病毒藥物為α-干擾素和核苷（酸）類[1]。很多指南已將α-干擾素作為治療CHB患者的一線藥物推薦[2，3]，停藥后持續性病毒學應答率（SVR）較高[4]。近年來，隨著免疫學的不斷發展，不斷豐富了對CHB患者整體免疫調控網絡失衡理論的認識[5]。本研究應用聚乙二醇干擾素α-2b治療184例CHB患者，觀察了療效及其外周血T淋巴細胞亞群和血清細胞因子水平的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年1月～2016年1月我科收治的CHB患者184例，男性101例，女性83例；年齡18～68歲，平均年齡（45.31±9.24）歲。病程 2～32年，平均病程（18.64±5.34）年。符合2010年發布的《慢性乙型肝炎防治指南》[7]的診斷標準，血清HBeAg陽性91例，患者在半年內未接受過免疫調節劑治療。排除標準：①合并肝硬化或肝癌；②嚴重的腎功能不全；③孕產婦或哺乳期孕婦；④伴有原發性精神障礙或癡呆。本研究經我院醫學倫理委員會批準同意。患者給出知情同意書。

1.2 治療方法 將患者分成兩組，分別給予恩替卡韋（中美上海施貴寶制藥有限公司）0.5mg口服，1次/d或者在恩替卡韋治療的基礎上加用聚乙二醇干擾素α-2b（佩樂能，默沙東公司，批準文號：S20140 016）80 μg皮下注射，1次/w。干擾素治療48 w，在停藥后隨訪24 w。

1.3 相關指標檢測 使用美國 Coulter公司生產的流式細胞儀檢測外周血T淋巴細胞亞群；采用放射免疫法檢測血清IL-6、INF-ɑ、IL-4（北京福瑞潤康生物技術有限公司）；采用酶聯免疫吸附法檢測血清IL-17、TGF-β1和HBV標記物（上海恒遠生物有限公司）；采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA、核轉錄因子 RORγt、Foxp3、IL-17mRNA；使用DIRUI-CS400b全自動生化分析儀檢測肝功能指標。

2 結果

2.1 兩組血清HBeAg和HBV DNA變化比較 在停藥隨訪 24 w，聯合組與恩替卡韋組血清HBV DNA陰轉率分別為86.96%（80/92）和84.78%（78/92）（P＞0.05）；聯合組血清 HBeAg陰轉率為 28.89%（13/45），與恩替卡韋組的15.22%（7/46）比，無顯著性差異（P＞0.05）。

2.2 兩組血生化指標比較 治療前，兩組患者血清肝功能指標比較無顯著性差異（P＞0.05）；治療后，聯合組患者血清TBIL、ALB、PTA水平與恩替卡韋組比較無顯著性差異，ALT水平顯著低于恩替卡韋組（P＜0.05，表1）。

2.3 兩組治療前后外周血T細胞亞群和NK細胞變化比較 治療前，兩組患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞和CD4+/CD8+比值比較無顯著性差異（P＞0.05）；治療后，聯合組患者 CD3+、CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值顯著高于恩替卡韋組（P＜0.05），CD8+細胞百分比顯著低于恩替卡韋組（P＜0.05），兩組患者NK細胞百分比無顯著性差異（P＞0.05，表2）。

表1 兩組血生化指標（±s）比較

表1 兩組血生化指標（±s）比較

與恩替卡韋組比，①P＜0.05

例數 TBIL（μmol/L） ALT（U/L） ALB（g/L） PTA（%）聯合組 治療前 92 22.6±11.1 145.4±23.6 117.5±18.4 55.9±11.7治療后 92 21.61±7.9 34.6±11.6① 40.7±8.4 79.4±15.8恩替卡韋 治療前 92 21.6±10.8 143.61±24.3 115.9±16.6 54.8±10.5治療后 92 19.1±12.6 64.6±20.5 41.5±11.2 81.7±12.4

表2 兩組T細胞亞群和NK細胞(±s）比較

表2 兩組T細胞亞群和NK細胞(±s）比較

與恩替卡韋組比，①P＜0.05

例數CD3+（%）CD4+（%）CD8+（%）聯合組 治療前 92 64.2±12.7 32.1±5.6 36.5±9.7治療后 92 75.6±14.5① 42.7±10.3① 29.3±7.3①恩替卡韋 治療前 92 63.6±11.4 31.6±5.0 37.8±10.2治療后 92 66.8±14.4 36.7±8.5 34.8±8.5 NK（%）17.6±5.7 18.6±6.3 17.5±5.1 18.1±6.2 CD4+/CD8+比值1.9±0.5 1.4±0.6①1.1±0.4 1.0±0.5

2.4 兩組血清細胞因子水平比較 治療前，兩組血清IL-6、IL-17、IL-4、INF-ɑ 和 TGF-β1 水平比較無顯著性差異（P＞0.05）；治療后，聯合組血清 IL-6和INF-ɑ水平顯著高于恩替卡韋組（P＜0.05），IL-17和IL-4水平顯著低于恩替卡韋（P＜0.05），兩組血清TGF-β1水平比較無顯著性差異（P＞0.05，表3）。

2.5 兩組血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平比較 治療前，兩組血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平比較無顯著性差異（P＞0.05）；治療后，聯合組血清RORγt水平顯著低于恩替卡韋組（P＜0.05），而Foxp3和IL-17 mRNA水平與恩替卡韋組比，無顯著性差異（P＞0.05，表4）。

表3 兩組血清細胞因子水平（pg/ml，±s）比較

表3 兩組血清細胞因子水平（pg/ml，±s）比較

與恩替卡韋組比，①P＜0.05

例數 IL-6 IL-17 IL-4聯合組 治療前 92 2.1±0.3 4.2±1.2 5.6±1.5治療后 92 6.8±1.2① 0.7±0.3① 1.4±0.5①恩替卡韋 治療前 92 2.1±0.2 4.3±1.3 5.7±1.6治療后 92 3.5±0.8 2.8±0.9 3.8±1.5 INF-ɑ 0.8±0.3 4.0±1.3①0.9±0.3 2.6±0.9 TGF-β1 25.1±4.3 25.6±5.0 25.2±4.2 25.4±4.8

表4 兩組血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平（±s）比較

表4 兩組血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平（±s）比較

例數 Foxp3 IL-17mRNA RORγt聯合組 治療前 92 4.32±1.02 0.12±0.10 1.76±0.54治療后 92 4.52±1.85 0.10±0.01 0.86±0.31①恩替卡韋 治療前 92 4.31±0.98 0.10±0.09 1.79±0.51治療后 92 4.43±1.65 0.09±0.01 1.56±0.43

3 討論

目前，全球CHB發病率高達3.5億以上，并且據相關資料統計，在一些地區CHB發病率高居不下，嚴重威脅患者的生命健康。CHB治療的關鍵是通過長期以及有效地抑制HBV DNA復制，從而達到治療疾病的目的。臨床上主要使用的抗病毒藥物為核苷/核苷酸類藥物和α-干擾素，而不少文獻結果證明在合適的患者，干擾素治療的臨床療效更佳[8]，而本文研究結果也證實了這一觀點。

干擾素是上個世紀90年代初被批準開始在臨床上使用的一種藥物，其能在治療病毒性肝炎時發揮抗病毒以及提高對免疫調控的作用。干擾素具有抗病毒作用的主要機制是其能與細胞膜上的干擾素受體相結合，誘導機體產生多種抗病毒蛋白，起到抑制病毒核酸表達，抑制病毒蛋白合成的作用，達到控制病毒復制的目的[9，10]。除此之外，研究發現干擾素還能增強細胞膜上人類白細胞抗原的表達，使細胞毒性T淋巴細胞易于識別和殺傷HBV感染的靶細胞，增強免疫細胞活性[11，12]。聚乙二醇干擾素α-2b由單聚乙二醇化的重組人干擾素α-2b組成，能抑制病毒的復制、抑制細胞增殖以及增強巨噬細胞吞噬活動、增強淋巴細胞對靶細胞的特異性細胞毒性等一系列免疫調控活動[13]。

近些年，隨著免疫學的發展，整體免疫調控網絡在CHB疾病進展中的作用逐步得到肯定，并逐漸得到完善[14]。有文獻研究表明，在CHB患者外周血Th1/Th2細胞明顯處于失衡狀態，并且隨著Th17細胞的發現和對其進行深入研究，發現其與各個T細胞亞群相互之間有些精細而復雜的平衡關系，并且構成了一個免疫調控網絡[15]。也有相關研究表明，在CHB患者，外周血Th17細胞和血清細胞因子水平明顯高于正常水平，并且Th17細胞百分比與肝臟炎癥程度或肝纖維化程度存在著密切的相關性[16，17]。為此，本研究分析了聚乙二醇干擾素α-2b對CHB患者外周血CD4+T淋巴細胞整體免疫調控網絡的影響。

諸多文獻表明聚乙二醇干擾素對CHB患者具有較高的臨床療效，對病毒抑制的時間長，且安全性高[18，19]。在本研究結果中，治療后聯合組外周血CD3+、CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+細胞比值明顯高于恩替卡韋組（P＜0.05），CD8+細胞百分比明顯低于恩替卡韋組（P＜0.05），證明聚乙二醇干擾素α-2b能提高CHB患者的免疫力，同時調節了患者免疫失調狀態。并且，經過治療后患者血清細胞因子水平明顯下降，RORγt降低，從而改善了Th1和Th17細胞紊亂狀況，從多個方面控制了整體免疫調控。

綜上所述，聚乙二醇干擾素α-2b能通過調控細胞因子表達水平，從多個環節對CHB患者的免疫狀態實現良好的調控，因而對CHB患者具有良好的臨床運用價值。

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