一例長島型掌跖角化癥患者SERPINB7 基因的突變分析

楊銘華 李常興 陳琳 魏威勝 劉勇勝 陳穗玲 周少珍 劉慧茹 林東子 韓春雷

【關鍵詞】 長島;掌跖角化癥;絲氨酸蛋白酶抑制劑B7;基因;突變

中圖分類號：R758.61?? 文獻標識碼：A?? DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2018.01.006

Analysis of SERPINB7 gene mutation in one case with Nagashima-type palmoplantar keratosis

YANG Minghua，LI Changxing，CHEN Lin，WEI Weisheng，LIU Yongsheng，CHEN Suiling，ZHOU Shaozhen，LIU Huiru，LIN Dongzi，HAN Chunlei

【Abstract】 Objective To investigate serine protease inhibitors B7（SERPINB7）gene mutation in one case with Nagashima-type palmoplantar keratosis（NPPK）.

Methods All coding exons and adjacent splice sites of the SERPINB7 gene were amplified by PCR，and direct sequencing was performed.

Results SERPINB7c.796C>T（p.Arg266Ter）gene heterozygous mutation was detected in this case of NPPK，causing the 266th amino acid encoded by SERPINB7 gene from arginine to termination code.No SERPINB7 mutations were found in 100 healthy controls.

Conclusion SERPINB7 c.796C>T（p.Arg266Ter）mutation may be the pathogenetic gene of this case of NPPK.

【Key words】 Nagashima;palmoplantar keratosis;SERPINB7;gene;mutation

長島型掌跖角化癥（Nagashima-type Palmoplantar Keratosis，NPPK）是一種少見的掌跖角化癥，臨床特征為手掌、手背、腕部、足底、足背、踝部、跟腱等部位出現紅斑、丘疹、斑塊、角化、脫屑，部分患者伴手足多汗癥[1～2]。NPPK是常染色體隱性遺傳，由絲氨酸蛋白酶抑制劑B7（SERPINB7）基因突變引起[2～5]。筆者發現1例NPPK患者，對該患者進行SERPINB7基因測序發現8號外顯子出現雜合性突變c.796C>T（pArg266Ter），現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集NPPK一家系連續兩代，1例患者。先證者，男，18歲。4歲開始于雙側手腕、手掌、掌背、足底等部位出現紅斑，對稱分布，無明顯自覺癥狀。先證者12歲開始，雙側手腕、手掌、掌背部位皮疹明顯加重，表現為對稱性紅斑、斑塊，出汗時候伴有異味。冬天與夏天的皮疹無明顯變化。皮膚科專科檢查：雙手掌、指背（圖1A，圖1B）、足底、手腕、踝部、跟腱等對稱性紅斑、角化性斑丘疹、斑塊伴脫屑。實驗室檢查：血常規、肝腎功能、HIV、RPR及TPPA均無明顯異常。先證者父母非近親婚配，父母未見類似疾病。收集100例漢族健康體檢者血液標本作為正常對照。

1.2 實驗方法

1.2.1 外周血DNA提取及基因來源

抽取家系成員外周靜脈血4 ml，用EDTA二鉀鹽抗凝管存-20℃冰箱，按照QIAGEN試劑盒說明操作流程進行提取DNA。SERPINB7基因（NC_000018.10）序列從PUBMED上獲得。引物設計參照文獻4。

1.2.2 PCR反應體系和擴增條件

反應體系中含有20 ng 基因組DNA，正向與反向引物（10p）各1 μL，10×緩沖液3 μL，模板（ng/μl）2 μL，20 μL dNTPs（25 mM）和0.2 μL Taq（5 U/μL），H2O 20.8 μL，PCR總反應體系為30 μL。PCR反應參數設置：首先進行預變性：96℃ 下5分鐘;變性在96℃ 下20秒;退火在55℃下20秒;延伸在72℃下30秒;終端延伸在72℃下5分鐘。PCR反應一共進行30個循環。

1.2.3 突變分析

PCR反應后取2 μL反應產物，采用2%瓊脂糖凝膠進行分析電泳，PCR產物純化試劑盒純化PCR產物，純化后用ABI 3730（美國Applied Biosystem）型DNA測序儀進行基因測序分析。

2 結? 果

先證者的測序結果顯示，患者的SERPINB7基因第8號外顯子核苷酸序列第796位堿基由C突變成T，發生無義突變，編碼的蛋白第266位的精氨酸轉換成終止密碼 （p.Arg266Ter） 見圖2A。先證者父母均為SERPINB7p.Arg266Ter雜合突變攜帶者，100個與該家族不相關的漢族正常人群中未檢測到p.Arg266Ter突變位點。見圖2B。

3 討? 論

NPPK是一種常染色體隱性遺傳病，男女發病率相似，臨床表現的特征為掌跖角化癥，該病于1977年首次在長島被報告，故亦稱為長島型掌跖角化癥[1]。NPPK臨床表現為紅斑、丘疹、斑塊、角化過度，累及手掌、足跖、手腕內側、腳踝、跟腱區、肘部和膝蓋[2～3]。部分患者可以合并耳朵過度角化及足趾甲營養不良 [4～5]。NPPK組織病理學特征為表皮角化過度，顆粒層和棘層增厚，但并無表皮松解性角化過度的特點，真皮淺層少量毛細血管擴張，少量炎癥細胞浸潤[2]。研究發現NPPK的致病基因為SERPINB7， 該種病例見于日本人及中國人報道[2～12]。本例患者4歲開始發病，初始表現為手掌紅斑，病程進程較慢，12歲癥狀開始加重蔓延至腕部、手背、足背、跟腱，伴有手足多汗癥，手掌、足底異味，該患者拒絕進行組織病理活檢，患者父母非近親結婚，無類似病史。本研究對該例患者及其家系成員進行Sanger測序SERPINB7基因，發現該例患者SERPINB7基因外顯子8基因發生雜合突變，c.796C>T （p.Arg266Ter），該突變導致SERPINB7基因編碼的蛋白第266位氨基酸由精氨酸變為終止密碼，先證者父母均為SERPINB7基因p.Arg266Ter雜合突變攜帶者，遺傳模式符合常染色體隱性遺傳。100個與該家族不相關的漢族正常人群中未檢測到pArg266Ter突變。本研究從基因水平診斷了該患者為NPPK。目前，尚未找到根治NPPK的治療方法，維甲酸類藥物如維A酸軟膏、他扎羅汀或激素軟膏如丙酸氯倍他索霜，合并真菌感染聯合抗真菌藥物，這些治療方法能緩解該患者的病情，合并真菌感染聯合抗真菌藥物治療，但停藥后容易復發。該患者外用丙酸氯倍他索霜，每天2次，2周后癥狀有所改善，遠期療效有待進一步的觀察。

參 考 文 獻

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