老年SCLC患者GSS基因遺傳變異與鉑類藥物化療效果及預后的關系

楊　穎　王　健

(武漢市第一醫院腫瘤一科，湖北　武漢　430000)

小細胞肺癌(SCLC)屬于神經內分泌腫瘤，雖然僅占肺癌總數的20%，但其惡性程度高且多發于老年人群，給病情控制帶來了困難〔1〕。卡鉑、順鉑與足葉乙甙聯合治療為一線化療方案，但療效存在明顯的個體差異性〔2〕。影響化療效果的分子機制包括DNA修復能力、細胞內藥物濃度和解毒能力等〔3〕。谷胱甘肽可通過干擾DNA分子特異位點形成的共價結合物等途徑來使鉑類藥物失效〔4〕；谷胱甘肽合成酶(GSS)基因可編碼合成酶蛋白，影響谷胱甘肽的生物合成〔5〕。目前，國內關于GSS基因遺傳變異與SCLC化療效果關系的研究報道較少。本次研究旨在探討老年SCLC患者GSS基因4個標簽單核苷酸多態位點(htSNP)遺傳變異與鉑類藥物化療效果及預后的關系。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2008年1月至2013年10月在武漢市第一醫院確診，接受鉑類藥物化療的老年小細胞肺癌患者451例。入選患者年齡≥60歲，在本院行首個療程化療，療程≥2個周期；未合并其他原發腫瘤，患者之間無直系親緣關系。其中男353例，女98例；年齡60～78歲，平均(68.36±5.09)歲；有吸煙史319例，無吸煙史132例；KPS評分≤80分215例，>80分236例；局限期217例，廣泛期234例。

1.2治療方案與療效評價入選患者均給予含鉑類藥物化療，其中EP方案(順鉑+足葉乙甙)231例，CE方案(卡鉑+足葉乙甙)220例。130例接受單純化療，321例化療后接受輔助放療。2個周期治療結束后評價近期化療效果，依據Recist標準分為；完全緩解、部分緩解、病情穩定、病情進展。通過電話結合門診隨訪收集患者生存例數、死亡例數、總生存時間，隨訪截止到2016年10月5日，隨訪時間32～172個月。

1.3基因組DNA提取入選患者化療前抽取外周靜脈血4 ml，抗凝處理后置于-80℃冰箱中保存待測，使用QIAGEN DNA血液微型試劑盒(上海睿安生物科技有限公司)提取基因組DNA。分光光度法檢測獲取DNA的純度和濃度。

1.4htSNP位點篩選和基因分型通過美國國家生物技術信息中心的dbSNP數據庫和千人基因組(1000 genomes project)計劃數據庫篩選中國漢族且在本院接受鉑類藥物化療的老年SCLC患者次要等位基因頻率(MAF)≥0.1，得到GSS基因的標簽htSNP共4個位點：位于內含子的rs3136185G>A、rs8376881G>A、rs3384795T>G，位于3′近基因區的rs836632T>C，MAF分別為0.21、0.33、0.34、0.52。通過Sequenom Mass Array SNP 基因型分析技術進行基因分型。

1.5統計學分析應用SPSS20.0統計學軟件進行分析，臨床參數及GSS基因遺傳變異與鉑類化療效果的關系使用Logistic回歸模型進行分析，GSS基因遺傳變異與患者預后的生存分析使用Cox比例風險模型，以雙側α=0.05為檢驗水準。

2　結　果

2.1臨床特征與化療效果的關系451例患者中化療有效327例，無效124例，有效率72.51%。單因素分析顯示，患者年齡、性別、吸煙史、化療方案與化療療效無明顯關系(P>0.05)，KPS評分、腫瘤分期與化療療效明顯相關(P<0.05)，其中KPS評分≤80分、>80分的化療有效率分別為66.51%(143/215)、77.97%(184/236)，腫瘤局限期、廣泛期的化療有效率分別為79.72%(173/217)、65.81%(154/234)。多因素分析顯示，KPS評分、腫瘤分期是化療效果的獨立影響因素，KPS評分>80分患者化療效果高于KPS評分≤80分患者(OR=0.75，95%CI為0.51～0.93)，廣泛期患者效果明顯低于局限性患者(OR=1.96，95%CI為1.48～2.88)。

2.2GSS基因遺傳變異與化療效果的關系位于GSS基因3′近基因區的rs836632位點與鉑類藥物化療效果有關，攜帶C等位基因化療效果明顯低于攜帶T等位基因的患者，差異有統計學意義(P<0.05)，化療無效的發生率增加1.39倍；而rs3136185、rs8376881、rs3384795 htSNP位點差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　GSS基因htSNP位點影響鉑類藥物化療效果的Logistic多因素分析(n)

AA為主要等位基因純合型，AB為雜合型，BB為次要等位基因純合型；a為存在缺失數據

2.3GSS基因htSNP位點對SCLC患者預后的影響攜帶rs8376881 GG、GA、AA基因型的生存時間分別(26.35±4.08)、(23.82±5.37)、(18.60±5.92)個月，差異有統計學意義(P<0.01)。攜帶A等位基因的SCLC患者總生存時間明顯短于G等位基因，死亡風險明顯增加(HR=1.27，95%CI為1.13～1.44)，見表2。攜帶rs836632 TT、TC、CC基因型的生存時間分別(29.38±6.95)、(25.13±5.67)、(24.69±6.09)個月，差異有統計學意義(P<0.01)。與攜帶C等位基因的SCLC患者總生存時間明顯短于T等位基因，死亡風險明顯增加(HR=1.29，95%CI為1.16～1.42)。攜帶rs3136185、rs3384795 htSNP位點與SCLC患者化療后總生存時間之間無明顯相關性(P>0.05)。見表2，圖1，圖2。

2.4攜帶GSS基因rs8376881、rs836632不同風險等位基因對預后的影響不攜帶rs8376881、rs836632位點風險等位基因的GG+TT基因型患者116例，死亡71例(61.21%)，生存時間(29.50±5.38)個月。攜帶1～2個風險等位基因患者240例，包括：GG+TC基因型98例、GA+TT基因型6例、GA+TC基因型121例、GG+CC基因型15例，死亡170例(70.83%)，生存時間(25.31±6.26)個月。攜帶3～4個分析等位基因患者66例，包括：GA+CC基因型40例、AA+TC基因型2例、AA+CC基因型24例，死亡51例(77.27%)，生存時間(21.65±3.92)個月。攜帶不同風險等位基因數量患者總生存時間之間差異有統計學意義(P<0.01)，見圖3。隨著攜帶風險等位基因數量增加，患者死亡風險明顯增加。

表2　GSS基因htSNP位點影響SCLC患者總生存時間的Cox多因素分析(n)

AA為主要等位基因純合型，AB為雜合型，BB為次要等位基因純合型；a為存在缺失數據

圖1　GSS基因rs8376881不同基因型SCLC患者生存曲線

圖2　GSS基因rs836632不同基因型SCLC患者生存曲線

圖3　攜帶GSS基因rs8376881、rs836632不同風險等位基因SCLC患者生存曲線

3　討　論

中晚期SCLC患者治療中化療是主要手段之一，以鉑類藥物為基礎的聯合化療方案始終是SCLC一線治療方案。DNA修復能力、腫瘤細胞內藥物濃度等均對鉑類化療方案的效果有明顯影響，谷胱甘肽可通過抑制DNA結合物形成來誘導鉑類藥物失效，還可參與外來物質的膜運輸，防止體內細胞被氧自由基損傷等多種生物學功能，而GSS基因編碼的蛋白質在谷胱甘肽生物合成第二步中發揮催化作用〔6〕。相關研究顯示，谷胱甘肽在非小細胞肺癌、膀胱癌、腎癌等多種惡性腫瘤中水平均上升且與非小細胞肺癌患者化療耐藥性存在相關性〔7〕。KPS評分>80分和局限性患者能夠取得更為理想的化療效果，延長總生存時間。最新研究顯示，在北美洲白種人SCLC患者中，GSS基因內含子區rs8376881與治療預后不良和死亡風險升高明顯相關，內含子區rs3136185和rs3384795與治療預后改善和死亡風險降低明顯相關〔8〕。本次研究發現，rs836632(T>C)與老年SCLC患者鉑類藥物化療效果和總生存時間均存在明顯相關性，rs8376881(G>C)僅與患者總生存時間相關，而rs3136185、rs3384795與患者化療效果和總生存時間無明顯關聯。該結論與相關研究結果存在差異，可能與研究對象人種差異有關。rs836632位于GSS基因3′近基因區，能夠影響基因和miRNA的相互結合。rs8376881位于GSS基因內含子區，能夠改變基因剪切和連接，以及轉錄因子的結合位點，影響轉錄因子的結合，改變GSS基因多種生物學功能，進而影響谷胱甘肽的生物學功能，抑制DNA修復過程，降低鉑類藥物化療效果，縮短老年SCLC患者的總生存時間。

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2李誠，蘭莉，楊超，等.哈爾濱市癌癥風險評估系統的構建與應用〔J〕.中國衛生工程學，2016；15(4)：388-9.

3傅興寧.小細胞肺癌外周血和組織中耐藥基因表達的檢測〔D〕.青島：青島大學，2013.

4徐俊，丁香彧，郭楠等.小細胞肺癌患者血清胃泌素釋放肽前體和神經元特異性烯醇化酶水平〔J〕.中國老年學雜志，2015；35(5)：1281-2.

5吳翠翠，修冬瑩，張雪琦，等.肺癌患者血清P53抗體及肺癌組織P53表達對肺癌診斷價值的研究〔J〕.北華大學學報(自然科學版)，2014；15(4)：486-9.

6劉靜.TTF-1及CgA與小細胞肺癌PFS相關性分析〔D〕.大連：大連醫科大學，2015.

7李海洋，趙振山.肺癌患者放療前后外周血淋巴細胞亞群變化研究〔J〕.北華大學學報(自然科學版)，2016；17(2)：213-6.

8Fiegl M，Pircher A，Waldthaler C，etal.Small steps of improvement in small-cell lung cancer(SCLC)within two decades：A comprehensive analysis of 484 patients〔J〕.Lung Cancer，2014；84(2)：168-74.