不同附生樹種對金釵石斛石斛堿含量的影響

李志平， 鄭若男， 柯伙釗，陳梁軍，翁培金

(1.福建生物工程職業技術學院，福建福州 350002；2.泉港天馬農業綜合開發有限公司，福建泉州 362804)

金釵石斛(Dendrobiumnobile)與鐵皮石斛同屬附生蘭類，又名扁金釵、扁黃草、扁草，是藥用范圍較廣的名貴中藥，也是我國古代藥書中記載和研究應用最早的石斛類。在列入藥典的石斛中，只有金釵石斛才具有主治五臟虛弱羸瘦、強陰益精、久服厚腸胃、補腎益力等功效[1-3]。后續研究證明，金釵石斛與福建省內普遍種植的鐵皮石斛相比，石斛堿含量遠高于鐵皮石斛，正是石斛堿起到上述功效[4]。同時，由于其花形奇特、花色艷麗，因而具有較高的觀賞價值[5]。但是金釵石斛自然繁殖率低，加之長期的過度采挖、生態環境的破壞，野生資源逐漸枯竭，我國已將其列為珍稀瀕危的中藥種類之一。前人對金釵石斛的研究多集中在組培快繁、形態結構、共生真菌、藥用功能、成分提取與分析等方面[6-8]。

近幾年來，為提高資源利用率和經濟效益，金釵石斛仿野生種植的調查和研究增多[9-11]，其中活樹附生栽培是時下石斛種植的一種典型代表，附生種植不破壞原有種植的植物，立體化種植，不消耗土地，在提升資源利用率的同時，其拉動的往往還有旅游業和觀光業，既能滿足消費者的使用需求，也能滿足企業和種植戶的經濟需求。目前已有關于金釵石斛適宜的種植高度及不同附主對金釵石斛的保存率、萌芽率、萌芽莖條長、萌芽莖條葉片數(新葉片數)等方面影響的研究，然而，關于不同附生樹種對金釵石斛有效成分石斛堿含量的影響研究鮮見報道[12-15]。

以貴州赤水金釵苗為樣本，針對泉州地區4個主要人工林樹種開展試驗研究，旨在探究附主樹種對附生金釵石斛藥用有效成分石斛堿含量的影響，篩選優質附主樹種，為其林下栽培提供科學依據，既可保持和推動泉州固有的水果產業的發展，又可獲得現在倍受市場推崇的養生保健中草藥——金釵石斛的附加高價值收益。

1　材料與方法

1.1研究地概況研究地點位于種植地點泉州市泉港天馬農業綜合開發有限公司農場，泉州地處閩南地區，屬亞熱帶海洋季風氣候，冬短而無嚴寒，年平均氣溫18～20 ℃，無霜期310 d以上，年降雨量1 000～1 800 mm，年平均日照達1 900～2 000 h，主要種植枇杷、楊梅、龍眼、杉木等植物。

1.2植物材料試驗選用的附生樹種主要有杉木、楊梅、枇杷、龍眼活體樹4個樹種(表1)。仿野生環境生長的金釵石斛3年生藥材采自貴州省赤水市旺隆鎮云集村，試驗材料于2016年4月鋪設完成。

1.3林下栽培管理條件栽培基質選用木屑、水草、農家肥3種，3∶3∶1配比，塑料網兜固定于不同樹種。種植高度為樹干中部距離地面1.2～1.5 m處，金釵石斛喜溫暖、濕潤、陰涼的生長環境，其附生栽培中要特別注意光照和水分控制。光照以55%～70%的遮光度為宜，光照不合適要進行人工調節。水分管理以基質不干不澇、保持濕潤為度，栽培初期對葉面施NPK促根肥(9∶45∶15)2 500倍液1～2次以促進生根，當出現新根后開始根部施肥，以加快石斛根系的生長，提高產量和質量，30 d后自然生長,持續附生生長360 d。

金釵石斛的生長總體而言，病蟲害發生較輕，其防治應采取預防為主、綜合治理的策略，因此移栽后每3～5 d噴1 000倍多菌靈預防病害[10，14，16]。

表1　各樹木生長狀況

1.4石斛堿含量檢測[1]

1.4.1儀器與試劑。檢測儀器與試劑：日本島津 GC -14C 氣相色譜儀；FID 檢測器；Starsorius BT125D1/10 萬電子分析天平；高純氮(含量 99.99%)；石斛堿對照品(購自中國標準品中心，批號：BW5537)；所用試劑(萘、甲醇、甲酸等)均為分析純。

1.4.2色譜條件。色譜柱：DB-1(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；程序升溫：初始溫度80 ℃，10 ℃/min升溫至250 ℃，保持5 min；進樣口溫度250 ℃；檢測器溫度250 ℃。載氣N2，流速 1 mL/min，進樣量1 μL 。按上述色譜條件進行分析得其色譜圖(圖 1)。

1.4.3溶液的制備。①內標溶液：稱取萘對照品(純度99.9%)適量，配制成25 μg/mL萘-甲醇溶液作為內標液。②對照品溶液：稱取石斛堿對照品(純度99.6%)適量，配制成50 μg/mL石斛堿-甲醇溶液作為對照品液。③上機溶液:一是樣品上機溶液。取樣品過濾液2 mL，加入1 mL內標溶液，加入2 mL甲醇，混勻，過膜。二是對照品上機溶液。取對照品溶液2 mL，加入1 mL內標溶液，加入2 mL甲醇，混勻，過膜。④供試品溶液的制備:鮮葉樣品105 ℃殺青1 h，60 ℃烘干至恒重(連續2次稱量質量差<0.2 mg) ，用粉碎機粉碎，過3號篩。 稱取約0.25 g樣品粉末，置于100 mL圓底燒瓶中，加含0.05%甲酸的甲醇溶液25.00 mL，稱定質量m1，水浴加熱回流3 h，冷卻至室溫，稱重m2。用0.05%甲酸-甲醇溶液補足溶液直至質量為m1，過濾，備用。

2　結果與分析

2.1生長情況附生生長30 d后，長出新葉片及新芽，生長90 d后，新莖明顯長出，在生長180 d后，金釵石斛苗的根部明顯附著于樹皮上，同時葉片和莖水分飽滿，未發現明顯病蟲害，解開塑料網兜，檢查根部，也未發現明顯病蟲害，生長1年后，莖明顯增粗變長。附生金釵石斛的保存率、株高、根數、莖桿數、莖粗見表2。

表2　不同附生樹種對金釵石斛的保存和生長的影響

2.2檢測結果

2.2.1計算校正因子。對照品上機溶液：取對照品溶液2 mL，加入1 mL內標溶液，加入2 mL甲醇，混勻，過膜，上機，計算公式如下：

(1)

式中，As為萘的峰面積；Ar為石斛堿的峰面積；Cs為萘的濃度(μg/mL),Cr為石斛堿濃度(μg/mL)

經計算，校正因子f=0.656。

2.2.2石斛堿含量。在龍眼、楊梅、枇杷、杉木不同附生樹種條件下，金釵石斛中石斛堿含量分別為0.601%、0.790%、0.825%、0.932%。由檢測結果可知，石斛堿含量均符合2015版《中國藥典》限量要求，不同附生樹種金釵石斛中石斛堿的含量有明顯差異，其中，楊梅、杉木、枇杷較龍眼樹的石斛中石斛堿含量高，杉木附生的金釵石斛石斛堿含量比最低的龍眼附生要高出50%，有明顯差異，在種植環境的溫度、濕度、施肥情況相同的前提下，考慮是由于不同樹種的遮陰度不同，使得石斛堿含量出現差異。不同附生樹種條件下金釵石斛中石斛堿的GC色譜圖見圖1。

3　結論

活體樹干可為石斛的根系生長提供有利條件，減少栽培成本，簡單易行，“以林養林”的方式增加當地林農經濟收入的同時，提高其生態保護意識，并能緩解長周期林木投入與短周期經濟效益的矛盾，是解決生態效益與經濟矛盾的有效方法。

泉州地處閩南地區，屬亞熱帶海洋季風氣候，適合金釵石斛生長。同時泉州市也是著名的亞熱帶果蔬產地，如龍眼、楊梅等，但近年來面臨東南亞一些國家的沖擊及自身發展的局限性，相關產業受到沖擊。金釵石斛產量高，藥用價值高，金釵石斛平均市場價為600元/kg，如每年果園種植金釵石斛獲得750 kg/hm2產量，則種植戶每年至少可獲得45萬元/hm2石斛鮮品收益。開展金釵石斛與果樹的仿野生附生栽培技術研究，有助于提高空間利用率，減少栽培成本，增加金釵石斛資源，緩解長周期林木投入與短周期經濟效益的矛盾，促進其可持續利用[17-18]。

注：A.對照品；B.龍眼；C.楊梅；D.枇杷；E.杉木Note:A.reference substance,B.Dimocarpus longan,C.Myrica rubra,D.Loquat,E.Cunninghamia lanceolata圖1　石斛堿的GC色譜Fig.1　GC of Dendrobine

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