UPLC-MS/MS法測定多潘立酮口腔崩解片的含量

謝 君，呂玲燕，馮星月，蔣志濤，余 輝，陳曉峰

0 引言

多潘立酮(Domperidone，DP)，又稱嗎丁啉，化學(xué)名為5-氯-1-{1-[3-(2，3-二氫-2-氧代-1H-苯并咪唑-1-基)丙基]哌啶-4-基}-1，3-二氫-2H-苯并咪唑-2-酮，是一種合成的苯并咪唑類化合物[1-3]。DP為選擇性的外周多巴胺受體拮抗劑，通過阻斷胃壁細(xì)胞上的多巴胺受體增強(qiáng)胃蠕動(dòng)，并產(chǎn)生較強(qiáng)的止吐作用，臨床上主要用于消化不良、腹脹、噯氣、惡心、嘔吐、腹部脹痛[4-6]。

DP口服后存在明顯的首過效應(yīng)，導(dǎo)致其生物利用度低，僅為12.7%～17.6%[7]。口腔崩解片(Orally disintegrating tablets，簡稱ODT)是一種新型的口服固體劑型，該類制劑在無水或少量水存在的情況下于口腔中迅速崩解，隨吞咽動(dòng)作進(jìn)入消化道吸收，可以減少首過效應(yīng)對藥物的破壞。將多潘立酮制成口腔崩解片，一方面可以提高其生物利用度，另一方面可以提高患者的用藥依從性，尤其適用于老年、吞咽困難患者和兒童等[4]。目前，多潘立酮口腔崩解片的含量測定多采用高效液相色譜法，故本研究采用UPLC-MS/MS法來測定多潘立酮口腔崩解片的含量，旨在快速、靈敏、準(zhǔn)確地實(shí)現(xiàn)定量的要求。

1 儀器與試藥

1.1 試藥 多潘立酮對照品，純度99.7%(批號：100304-201103)，購于中國食品藥品檢定研究院。多潘立酮口腔崩解片購自R藥業(yè)有限公司(規(guī)格：10 mg，批號：20170202、20170302、20170321)。甲醇(色譜純，德國Merck公司)，水為超純水，乙酸銨為分析純。

1.2 儀器 ACQUITY型UPLC系統(tǒng)(包括自動(dòng)進(jìn)樣器，在線脫氣機(jī)和四元泵溶劑系統(tǒng)，Xevo TQ檢測器，MassLynxTM質(zhì)譜工作站軟件，Waters公司)；MS105電子天平(上海梅特勒-托利多有限公司)；SCQ-250超聲波清洗器(上海盛普機(jī)械制造有限公司)；Drict-Q5超純水機(jī)(法國Millipore公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測條件 色譜條件：ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)；流動(dòng)相：甲醇-2 mmol/L乙酸銨水溶液(80∶20，V/V)；流速：200 μL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。

質(zhì)譜條件：離子源：ESI；離子化模式：正離子；檢測電壓：3.25 kV；離子源溫度：120 ℃；脫溶劑氣流量500 L/h；脫溶劑氣溫度：350 ℃；錐孔電壓50 V，碰撞能量30 V。定量模式：多離子反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)；用于定量分析的離子反應(yīng)為多潘立酮m/z426.32→m/z175.21。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 稱取干燥至恒重的多潘立酮對照品適量，精密稱定后用甲醇溶液溶解并稀釋至濃度為12.4 μg/mL的對照品儲(chǔ)備液。所有對照品溶液在4 ℃下儲(chǔ)存。

2.2.2 供試品溶液的制備 取20片藥片研碎，稱取相當(dāng)于1片的重量，置于100 mL的容量瓶中，加甲醇溶解，超聲15 min，稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液100 μL置于10 mL的容量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 分別吸取上述對照品溶液和供試品溶液各2 μL注入液相色譜儀，結(jié)果見圖1。

2.3.2 線性范圍考察 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下儲(chǔ)備液適量，用甲醇溶液稀釋至系列濃度為0.006 2、0.062、0.31、1.65、3.1、6.2 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別進(jìn)樣2 μL，記錄峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，多潘立酮對照品的濃度(X，μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明在0.006 2～6.2 μg/mL范圍內(nèi)，多潘立酮的峰面積與濃度具有良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=926 410 X+28 730,相關(guān)系數(shù)r=0.996 3，最低定量限為6.2 ng/mL。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下濃度為0.062、0.31、3.1 μg/mL的多潘立酮對照品溶液分別作為低、中、高3種濃度水平，同日內(nèi)分別進(jìn)行測定，重復(fù)進(jìn)樣6次，連續(xù)測定3 d，記錄峰面積，計(jì)算日內(nèi)精密度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值，分別為0.93%、1.02%、0.98%，日間精密度的RSD值分別為1.23%、1.15%、1.18%，結(jié)果表明，日內(nèi)、日間精密度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值均小于2%，說明本方法的精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下的供試品溶液于0、2、4、6、8、10、12、24 h分別進(jìn)行測定，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，結(jié)果峰面積之間基本無變化，RSD為0.42%(n=6)，結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號的樣品6份，按試驗(yàn)方法中供試品溶液配制，分別進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果6份供試品溶液的平均標(biāo)示含量為99.21%，RSD為0.25%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于多潘立酮10 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入多潘立酮對照品約10 mg，加甲醇溶解，超聲15 min，取出，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm的微孔濾膜過濾，平行制備5份。

圖1 對照品和樣品中多潘立酮的MRM色譜

取2 μL注入液相色譜儀，測定并計(jì)算，多潘立酮的平均回收率為100.23%(n=6)，RSD為1.78%。

2.4 樣品含量測定 分別取3個(gè)批號的多潘立酮口腔崩解片后精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜與質(zhì)譜條件依法測定，利用已建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算3個(gè)批號的多潘立酮口腔崩解片中多潘立酮的含量，結(jié)果含量分別為標(biāo)示量的100.22%、100.26%、100.15%(n=3)。結(jié)果表明，該廠所生產(chǎn)的多潘立酮口腔崩解片含量符合要求，含量均在標(biāo)示量的90.0%～110.0%范圍內(nèi)。

3 討論

本研究比較了不同規(guī)格的色譜柱，結(jié)果顯示，ACQUITYTM UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)色譜柱的保留及分離效能更好。試驗(yàn)中分別嘗試采用正、負(fù)2種離子模式，發(fā)現(xiàn)正離子模式下的離子化效率明顯高于負(fù)離子模式。同時(shí)，考察了不同的流動(dòng)相體系及比例，發(fā)現(xiàn)甲醇與2 mmol/L乙酸銨水溶液的比例為80∶20時(shí)出峰時(shí)間合適，峰形較好。

目前已有文獻(xiàn)報(bào)道可采用HPLC法[8-10]測定多潘立酮原料及制劑的方法，為考察多潘立酮口腔崩解片的療效，本文采用靈敏度更高的UPLC-MS/MS法測定樣品中多潘立酮的含量，在0.006 2～6.2 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低定量限可達(dá)6.2 ng/mL，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率均符合要求，進(jìn)一步提高了多潘立酮含量測定的標(biāo)準(zhǔn)。

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