何氏養腎顆粒的制備工藝研究※

張 莉 唐運洪 莫美紅 劉 仔 陳繼英 吳 謀

何氏養腎顆粒來源于東莞市中醫院治療慢性腎臟病，且臨床療效確切的驗方，由黃芪、地黃、山茱萸、蒲黃等6味中藥組成。該方通過“調補脾腎、化瘀通絡”，及早干預治療，在保護腎臟功能、延緩進入腎臟替代時間、緩解患者臨床癥狀等方面有顯著療效[1-2]。長期以來，臨床上以煎煮法制成湯劑服用。為提高患者依從性，彌補煎煮湯劑難以攜帶、保存和服用等不足，本研究以中醫藥理論為指導，根據臨床使用特點，運用現代制藥技術和方法將其制成顆粒劑型的醫院制劑。分別對提取、濃縮、干燥和成型工藝進行研究，確定何氏養腎顆粒的制備方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器SQW-6J超微粉碎機（濟南易辰超微粉碎技術有限公司）；Agilent 1100高效液相色譜儀[美國安捷倫科技（中國）有限公司]，Alltech 2000型蒸發光散射檢測器[美國奧泰科技（中國）有限公司]；GLP-10噴霧干燥機（上海金橋噴霧干燥成套設備廠）；DHG 9000系列電熱恒溫鼓風干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）等。

2 方法與結果

2.1 劑型篩選從用藥證候、慢性腎臟病患者的年齡和生理情況等臨床用藥需求出發，兼顧方劑特點、工藝難易程度和規模生產的可能性。考慮到中藥顆粒既能保持湯劑特色，又能克服臨用時煎煮及易變霉的問題，確定顆粒劑為該驗方的開發劑型。

2.2 提取工藝的研究與優化

2.2.1 工藝研究通過文獻研究，該方劑中飲片的有效成分均能溶于（熱）水，且對濕、熱較穩定，因此采用煎煮法提取（山茱萸除外）。煎煮前用冷水浸泡藥材約 30 min，以促進藥材的潤濕、有效成分的溶解和浸出。其中，蒲黃為花粉類藥材，體輕，煎煮時易飄浮在水面或成糊狀，采用包煎法進行提取，裝入蒲黃的紗布袋不宜包得過緊，以免影響有效成分的煎出[3]。

山茱萸是山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb,et Zucc.的干燥成熟果肉，為酸性中藥[4]。有研究認為，主藥黃芪避免與酸性藥材共同提取，可使黃芪甲苷含量增加[5]，因此在制備時，將山茱萸直接粉碎入藥。

2.2.2 提取工藝正交試驗設計采用正交試驗優化提取工藝。以提取次數（A）、提取時間（B）和加水倍數（C）作為考察因素，各因素取3個水平（表1）。以處方中主藥黃芪的主要有效成分黃芪甲苷的含量和干膏得率作為評價指標，各以權重系數0.5進行綜合評分。

表1 提取工藝影響因素

按處方量比例分別稱取黃芪、地黃等5味藥材，平行9份，按L9(34)正交試驗表（表2）安排進行水煎煮提取，提取液濾過、濃縮、放置100 ml量瓶中，加水定容，作為測定黃芪甲苷含量及干膏得率的供試品溶液備用。

2.2.3 黃芪甲苷含量測定[6]

以8個明確和14條基本方略為核心要義的習近平新時代中國特色社會主義新思想開辟了馬克思主義新境界、中國特色社會主義新境界、黨治國理政新境界、管黨治黨新境界，是已被十八大以后五年實踐證明了的科學理論。它從理論與實踐兩個方面確保中國化馬克思主義最新成果的時代前沿性，為新時代全黨全國人民確立理論自信提供了堅實前提。

2.2.3.1 色譜條件與系統適用性ZORBAX SB -C18色譜柱：（150 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；流動相：乙腈-水（32∶68）；流速：1.0ml/min；蒸發光散射檢測器參數：漂移管溫度為 105 ℃，氮氣流速為每分鐘2.6 L。理論板數按黃芪甲苷峰計算應不低于4000。

2.2.3.2 對照品溶液的制備取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.5 mg/ml的溶液，即得。

2.2.3.3 供試品溶液的制備精密吸取正交試驗制得提取液10 ml，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5 ml使其溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱（內徑為1.5 cm，柱高為12 cm），以水50 ml洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。制得的供試品溶液穩定，平均回收率為99.1%，RSD=2.32%。

2.2.3.4 測定分別精密吸取對照品溶液 10 μl、20 μl，供試品溶液20 μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程計算，計算黃芪甲苷含量，結果見表2。

2.2.4 干膏得率測定按照干燥失重測定法，精密吸取正交試驗所得提取液10 ml，置已干燥至恒重的蒸發皿中水浴蒸干。在干燥后移至干燥器中放冷，稱定重量，計算干膏得率，結果見表2。

通過計算綜合評分和方差方析等數據分析得出結果。表2數據顯示：影響提取效果的主次因素為：提取次數（A）＞提取時間（B）＞加水倍數（C），最佳工藝為A3B3C3；表3數據表明：提取次數（A）對提取效果的差異有統計學意義（P＜0.05），而B、C因素對提取效果沒有顯著性影響。從經濟角度出發，將優選出的最佳提取工藝調整確定為：A3B2C2，即加10倍水，煎煮3次，每次1.5小時。

2.2.5 最佳提取工藝的驗證試驗按10倍處方量稱取藥材，平行 3份，按優選出的最佳提取工藝進行試驗，并測定黃芪甲苷含量和干膏得率，結果見表4。根據2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）“黃芪含量測定”項測定黃芪藥材中黃芪甲苷的含量，并計算黃芪甲苷的轉移率。

驗證試驗中，黃芪甲苷含量和干膏得率RSD分別為 1.15%和 1.30%；藥材中黃芪甲苷含量為0.1132%，轉移率為80.57%。表明正交試驗優選出的最佳提取工藝穩定、可行。

2.3 濃縮、干燥工藝研究根據設備條件和實際生產，采用減壓濃縮和噴霧干燥制得干膏粉。分別考察提取液濃度和進、出風溫度等主要影響因素，以制得的粉末數量和性狀為判定標準優選出最佳工藝。

表2 優化提取工藝正交試驗設計與結果

表3 提取工藝方差分析

表4 最佳提取工藝驗證試驗結果(%)

結果表明：提取液相對密度過大，會引起粉末含水量增高，粘壁明顯，出粉量偏低等現象。若出風溫度過高，對中藥熱不穩定成分有影響；溫度過低，粉末含水量增高，出現粘壁現象。最終工藝確定為：將提取液減壓濃縮至相對密度1.05～1.10（60 ℃），物料溫度 50～60 ℃，進風溫度 180 ℃，出風溫度85 ℃，所得粉末量較多，且質地松脆，溶解性好。

2.4 制劑成型工藝研究

2.4.1 山茱萸粉碎入藥因傳統方法炮制的山萸肉質柔軟[4]，不能直接進行粉碎，并兼顧顆粒劑生產對藥粉細度的要求，將山茱萸在50 ℃條件下加熱干燥2 h，然后粉碎成120目的細粉，與制得的提取液干膏粉充分混合，備用。

2.4.2 輔料的選擇與用量結合本方臨床服用劑量和藥粉黏性等特點，分別選用中藥顆粒劑常用輔料淀粉、乳糖和糊精，按藥粉/輔料為1∶0.3的比例混合，以 75%乙醇為潤濕劑制粒，以成型性、吸濕率和休止角為考察指標，選定成型輔料及其用量。結果見表5。

表5 輔料種類篩選

結果表明：以乳糖和糊精為輔料時，制得顆粒成型性好，吸濕性及休止角差異不大；淀粉作為輔料時，有粘連情況。綜合考慮生產成本等因素，選擇糊精作為稀釋劑。分別比較藥粉/輔料以 1∶0.1、1∶0.3和1∶0.5的比例混合、制粒，結果發現，隨著輔料用量的增加，顆粒的成型性變好，吸濕性降低，流動性增強。考慮輔料用量不宜過多，確定混合藥粉與輔料的比例為1∶0.5。

2.4.3 矯味劑的選擇與用量為增加患者依從性，需加入矯味劑掩蓋不良口味，分別加入藥粉量1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%的蔗糖進行實驗。結果表明：加入2.0%的蔗糖用量，已有良好的矯味效果。

2.4.4 成型工藝驗證試驗將制得的提取液干膏粉與山茱萸細粉混合后，加糊精（干膏粉與糊精比例為1∶0.5）和2.0%蔗糖，充分混勻。逐滴加入75%乙醇，制成軟材，制粒。濕顆粒于60 ℃下干燥，依次將干顆粒過一號篩和五號篩整粒、去細粉，計算出平均收復率為89.7%，RSD為2.17%。

制得的顆粒劑干燥、均勻、色澤一致，無軟化、結塊等現象。照水分測定法測定，水分＜8.0%；取10 g顆粒劑，加熱水200 ml，攪拌5 min，顆粒全部溶化，輕微渾濁。粒度、水分和溶化性檢查均符合2015年版《中華人民共和國藥典》通則0104顆粒劑的相關規定。結果表明：該制備工藝合理、可行。

3 討論

黃芪能補氣升陽、固表止汗、利水消腫、托毒排膿[6]，有助于慢性腎臟病患者的治療，其在何氏養腎方中為主藥。因此，以黃芪主要活性成分黃芪甲苷作為提取工藝正交試驗評價指標，并采用《中華人民共和國藥典》收載的法定方法：高效液相色譜法測定黃芪甲苷含量，該研究方法合理、可行。

制備工藝中，采用了浸膏液的固體化制劑中最常用的噴霧干燥，因干燥時物料受熱表面積大，受熱時間短，能減少對效成分的破壞，工藝簡單、高效。

綜上所述，何氏養腎顆粒的制備工藝合理、穩定、可行，該工藝為何氏養腎方制備成醫院制劑（顆粒劑）提供實驗依據。

[1]李強,鄧麗娥,林捷,等.何氏養腎方治療早中期慢性腎臟病的臨床研究[J].內蒙古中醫藥,2017,36(18)∶8-9.

[2]鄧麗娥,李強,董明國,等.何氏養腎方對腎病綜合征大鼠模型的抗炎作用[J].廣州中醫藥大學學報,2017,34(6)∶888-892.

[3]陶春虹.談煎煮方法對中藥湯劑療效的影響[J].中國醫藥導報,2010,7(16)∶107-107.

[4]張茜,朱亞利,張德甫,等.山茱萸提取工藝及對α-淀粉酶抑制作用的研究[J].時珍國醫國藥,2011,22(6)∶1428-1429.

[5]吳怡,鄒桂欣,王光函,等.化胃舒顆粒供試品制備方法對其黃芪甲苷含量的影響[J].中國藥師,2014,17(1)∶29-32.

[6]中華人民共和國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京∶中國醫藥科技出版社,2015.