九節茶浸膏分離富集前后成分對比研究

歐余航，吳文杰

（1.福建中醫藥大學附屬第三人民醫院，福建 福州 350108；2.廈門消防支隊后勤處衛生隊，福建 廈門 361000）

九節茶系金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandra glabra（Thunb.）Nakai的干燥地上部分（腫節風為其全草［1］），夏、秋兩季采收，除去雜質，曬干，以江西、福建的草珊瑚自然分布中心區質量較佳［2］，是福建省道地優質藥材品種之一，具有消炎鎮痛等作用。本實驗以九節茶浸膏為原料，擬研究開發外用新藥—九節茶腫痛寧乳膏，利用高效液相色譜分離能力強、靈敏度高的特點，對九節茶浸膏過柱前后成分變化及含量進行了對比分析，為新藥制劑研發提供科學依據。

有研究表明：中藥中有效成分不是單一的某一成分或者是某一類成分，因此僅某一成分或某兩成分的定量考察，不能反應出藥物的整體水平。因此建立一個有效方法對九節茶浸膏分離富集有效部位前后的成分進行對比分析，以此來對分離富集后的產品做出更全面、準確評價十分重要。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 WatersE2695SeparetiongsModμLeHPLC系統［（沃特世科技（上海）有限公司）］；METTLER AE240天平［（梅特勒-托利多（上海）有限公司）］；BFX5-320型低速離心機（河北白洋離心機廠）；SB4200DT數控超聲波清洗器（上海珂淮儀器有限公司）。

1.2 試藥 HPD-400型大孔吸附樹脂（滄州寶恩吸附材料科技有限公司）；迷迭香酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111871-201001）；九節茶浸膏由三明華健生物工程有限公司參照《中華人民共和國藥典（一部）》［1］腫節風浸膏制法工藝生產提供，批號：20100301；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）；液相用水為超純水；樹脂相關用水為蒸餾水。

2 方 法

2.1 供試品溶液的制備 稱取九節茶浸膏30 g，加水300 mL，攪拌，超聲溶解，以4 000 rpm／min離心15 min，取上清液備用。精密量取上清液1 mL，置10 mL量瓶，加30%乙醇定容至刻度。

取上述九節茶浸膏上清液適量，經HPD-400型大孔吸附樹脂進行分離富集，上樣體積與樹脂體積比為4∶1，水洗1BV，再用70%乙醇洗脫體積3BV，收集該部位洗脫液；將洗脫液濃縮至密度約為1.07 g／mL的清膏，精密量取該清膏2 mL，置100 mL量瓶，加30%乙醇定容至刻度。

2.2 色譜條件 色譜柱：HypersiL ODS （4.6 μm×250 mm，5 μm）；柱溫：30℃；檢測波長：280 nm；進樣量：20 μL；流速：1 mL／min；流動相：A 為乙腈（含0.1%的甲酸），B為0.1%的甲酸水溶液。梯度洗脫：0～25 min，5%～36.5%A；25～30 min，36.5%～36.5%A；30～31 min，36.5%～5%A；31～35 min，5%～5%A。

2.3 方法學考察 為了考察分析方法的可靠性，以色譜圖中峰面積最大的特征峰為參比峰（S），其色譜峰的保留時間和峰面積為1，計算其它各峰的相對保留時間和相對峰面積比值。依照2.2項下的方法和條件測定，得九節茶浸膏分離富集后清膏的圖譜，根據得到的峰數、峰值（積分值）、峰位（保留時間）等相關參數，共標示出 16個共有特征峰。從指紋圖譜中可以看出16號峰（保留時間20.598 min）峰形好、純度高，故選其作為參照峰，如圖1。

2.3.1 精密度考察 取經樹脂分離富集后的清膏供試品溶液，按2.2項下的方法，連續進樣 6次，各共有峰的相對保留時間RSD均在2%之內，相對峰面積RSD均在2%之內，證明本法精密度良好。

圖1 樣品HPLC圖譜

2.3.2 重現性考察 按2.1項下的方法，制備經樹脂分離富集后的清膏供試品溶液6份，按2.2項下的方法進行測定。結果表明：各共有峰的相對保留時間RSD均在2%之內，相對峰面積RSD均在2%之內，證明本法重復性良好。

2.3.3 穩定性考察 按2.1項下的方法，新制經樹脂分離富集后的清膏供試品溶液1份，按2.2項下的方法分別于 0、2、4、8、12、24 h 進行測定。 結果表明：各共有峰的相對保留時間RSD均在2%之內，相對峰面積RSD均在2%之內，供試品溶液在24 h內穩定，證明本法穩定性良好。

3 九節茶浸膏分離富集前后圖譜成分比較

取九節茶浸膏 4 批（20110706、20110707、2012 0319、20120320），按2.1項下的方法制成4份供試品，按照2.2項下的方法，取九節茶浸膏分離富集前及分離富集后4份樣品分別進樣。采用中國藥典委員會“中藥指紋圖譜相似度評價系統（2004A）”軟件，對九節茶浸膏分離富集前后樣品的色譜峰進行整體相似性評價。通過中藥指紋圖譜相似度軟件得出4份九節茶浸膏分離富集后色譜峰與九節茶浸膏的的相似度為分別為 0.830、0.868、0.866、0.872，九節茶浸膏與共有模式的相似度為0.942，分離富集后的4份樣品與共有模式的相似度分別為0.963、0.982、0.981、0.975。

如圖2所示：通過上述相似度評價軟件分析，經分離富集后的清膏各成分基本一致，表明分離富集的方法重復性良好；同時與九節茶浸膏比較，成分也較為相近，化學成分基本相同。相對于分離富集的的清膏，九節茶浸膏在0～6 min內極性較大的成分在分離富集過程中被除去，其他成分均得到保留和富集。

圖2 九節茶浸膏分離富集前后色譜圖

4 討論

九節茶浸膏以九節茶為原料，九節茶原藥材因地域、氣候及采收時間等因素的影響，實際使用時不能保證藥材質量的穩定。同樣經分離富集得到的中間體，每個批次在成分含量、成分組成及各成分比例方面都不能保持完全的一致。因此通過該成分研究，可以對九節茶浸膏分離富集后產物的成分進行監控。通過控制中間體的穩定性，從而保證成品在成分含量、組成比例上一致，減少批間差異。

相對于分離富集的的清膏，九節茶浸膏在0～6 min內極性較大的成分在分離富集過程中被除去，其他成分均得到保留和富集。根據后期藥效學數據［3］可以看出：分離富集后的清膏仍有良好的消炎鎮痛的作用，因此推測這些極性較小的成分為其消炎鎮痛的主要成分。

《中藥辭海》記載：“腫節風浸膏有消腫散結，清熱解毒之功效”，現代廣泛用于消炎止痛藥、潤喉含片、血熱紫斑紫癜藥，如清熱消炎寧膠囊（片劑）、腫節風注射液、血康口服液、腫節風片、復方草珊瑚含片、新癀片、萬通炎康片、消炎靈片、三蛇膽川貝液、抗癌平丸和跌打傷科酒等［4-8］，此外，在保健品領域也有涉及，如草珊瑚牙膏［9］。本課題所涉及的擬研發新藥“九節茶腫痛寧乳膏”，方中九節茶味辛、苦，功專清熱解毒，活血散瘀通絡，為君藥；配以冰片清熱消腫止痛［10-11］，又能促透皮吸收［12-13］。 二藥合用，共奏“活血化瘀、消腫止痛”之功，可用于治療關節扭傷、肌肉拉傷、韌帶損傷等急性軟組織損傷。由此可見，九節茶的開發前景巨大，以期此實驗研究對其相關中藥制劑提供數據支持。

參考文獻：

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