雙指標控制半夏曲質量及其含量檢測方法研究*

毛 鑫，阮俊杰，王 熠，操文浩，萬 軍

西南交通大學生命科學與工程學院，四川 成都 611756

半夏曲是由清半夏、白礬、六神曲、生姜汁、面粉等原料經發酵等工藝制成。具有降逆止嘔，止咳化痰的功效，臨床用于惡心嘔吐，食欲不振，咳嗽痰壅［1］。現代研究顯示半夏曲中含琥珀酸、生物堿等多種活性成分［2］，但目前尚無半夏曲中含量指標的控制方法。本實驗依據半夏曲的研究現狀以及琥珀酸、生物堿的化學性質［3］，分別采用電位滴定法和紫外分光光度法分別對半夏曲中琥珀酸、總生物堿進行測定，并開展方法學研究。

1 試藥與儀器

1.1 試藥 試藥：半夏曲，四川弘升藥業有限公司2批，生產日期：2015年11月，2016年5月；內江良輝藥業有限公司1批，生產日期：2016年3月；四川千方中藥股份有限公司1批，生產日期：2016年9月。依次編號為1～4號。方法學考察采用2號樣品。對照品：琥珀酸對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST-16030502)。鹽酸麻黃堿對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110821-201112)。

1.2 儀器 BS110S電子天平(德國賽多利斯公司)；HX-200型高速中藥粉碎機(浙江省永康市溪岸五金藥具廠)；TU-1901雙光束紫外可見光分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；DZ-2型自動電位滴定儀(上海儀電科學儀器股份有限公司)。

2 方法與結果

2.1 琥珀酸的測定［4-6］

2.1.1 標準 NaOH滴定液的配制 參照《中國藥典》2015版第三部［7］進行配置標定，所制NaOH標準溶液的準確濃度為0.101 9 mol/L。

2.1.2 標準HCl滴定液的配制 參照《中國藥典》2015版第三部進行配置標定，所制HCl標準溶液的準確濃度為0.107 9 mol/L。

2.1.3 琥珀酸對照品溶液的配制 精密稱取18mg琥珀酸對照品，精密加入NaOH滴定液10 mL，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)30分鐘，轉移至50 mL量瓶中，加新煮沸過的冷蒸餾水定容，搖勻，制成0.36 mg/mL的琥珀酸對照品溶液。

2.1.4 供試品溶液的制備 取本品粉末(過四號篩)約5 g，精密稱定，置錐形瓶中，加95%乙醇50 mL，加熱回流1小時，同上操作，再重復提取2次，放冷，濾過，合并濾液，蒸干，殘渣精密加入氫氧化鈉滴定液(0.1 mol/L)10 mL，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)30分鐘，轉移至50 mL量瓶中，加新沸過的冷蒸餾水至刻度，搖勻，即得。

2.1.5 空白溶液的制備 乙醇150 mL置水浴鍋上蒸干，按“2.1.4”項方法中從“精密加入氫氧化鈉滴定液”開始配制空白溶液。

2.1.6 琥珀酸對照品溶液的電位突躍范圍測定 精密吸取濃度0.36 mg/mL的琥珀酸對照品溶液25 mL，置小燒杯中，將燒杯置電磁攪拌器的磁盤上，浸入電極，以濃度為0.094 32 mol/L的標準HCl溶液滴定，分階段記錄電位。記錄消耗酸溶液的體積和電位值，以電位的變化量(ΔE)和體積的變化量(ΔV)的比值為縱坐標，電位變化前后所用HCl溶液體積的平均值(V)為橫坐標作圖，繪制ΔE/ΔV～V電位曲線圖。見圖1。

2.1.7 供試品電位突躍范圍測定 精密量取25mL，照電位滴定法測定，用鹽酸滴定液(0.1 mol/L)滴定，并將滴定的結果用空白實驗校正。滴定終點明顯，滴定曲線見圖2—3。

圖1 琥珀酸對照品滴定曲線

圖2 半夏曲樣品中琥珀酸滴定曲線

圖3 空白試驗的滴定曲線

2.1.8 線性范圍的考察 精密稱取琥珀酸對照品30.0 mg，置50 mL容量瓶中，加 95%乙醇制成0.6 mg/mL琥珀酸對照品溶液。分別精密吸取3 mL、5 mL、7 mL、9 mL、11 mL、13 mL 的琥珀酸對照品溶液，按供試品溶液的制備方法制備。精密量取25 mL，照電位滴定法測定，以相應的試劑同法制作空白，對滴定結果校正。以琥珀酸含量為橫坐標，消耗的NaOH體積為縱坐標。每1 mL氫氧化鈉滴定液(0.1 mol/L)相當于5.904 mg的琥珀酸(C4H6O4)。結果顯示琥珀酸在1.8～7.8 mg/mL的范圍內線性關系良好，琥珀酸回歸方程：Y=0.169 5X+0.005 2，r=0.999 2。

2.1.9 精密度實驗 精密吸取同一批次供試品溶液5份，按“2.1.7”項方法測定，空白校正。計算得RSD=1.71%，表明儀器精密度良好。

2.1.10 穩定性實驗 分別于 0、1、2、4、6、8 小時從同一供試品溶液中吸取25 mL并按法測定。計算得RSD=2.05%，表明供試品溶液在8小時內穩定。

2.1.11 重復性實驗 稱取同一批次半夏樣品粉末5份，每份約5 g，精密稱定，按“2.1.4”項方法提取，測定，用空白校正后，計算得樣品中平均含量為4.05 mg/g，且RSD=2.04%，表明該測定方法重復性良好。

2.1.12 加樣回收實驗 精密稱取6份已知總酸含量的樣品2.5 g，取琥珀酸對照品10 g，精密稱定，按確定的方法提取，測定，并用空白進行校正。計算回收率為100.19%，RSD=2.26%(n=6)。見表1。

表1 琥珀酸加樣回收實驗

2.2 總生物堿的測定［8］

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10.0 mg，置5 mL容量瓶中，加蒸餾水制成每l mL含0.2 mg鹽酸麻黃堿溶液，即得對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取半夏曲樣品粉末1.5 g，置50 mL三角瓶中，加濃氨水1 mL，濕潤后，加三氯甲烷10 mL，稱定質量。冷浸3小時后分別超聲提取60分鐘，加三氯甲烷補足減失的質量，過濾，殘渣以10 mL三氯甲烷分3次洗滌，合并濾液與洗液，60℃以下加熱蒸發至三氯甲烷蒸干。加入8 mL三氯甲烷使溶解并轉移至25 mL分液漏斗中，再依次精密加入10 mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH=5.6)和1 mL0.1%溴麝香草酚藍溶液，充分振搖后，靜置15分鐘，取三氯甲烷層，水層再用三氯甲烷同法萃取兩次，每次8 mL。合并三氯甲烷層，用三氯甲烷定容于25 mL容量瓶內，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 精密稱取不含清半夏的樣品粉末1.5 g，置50 mL三角瓶中，按“2.2.2”項同法制備陰性對照溶液。

2.2.4 最大吸收波長的確定 按供試品溶液的制備方法，不稱取半夏曲樣品粉末制備空白對照液。將對照品溶液、供試液、陰性對照液和空白對照液在280～800 nm波長范圍內進行全波長光譜掃描。結果半夏曲樣品供試液和對照品溶液在416 nm處都有最大吸收，而空白對照液及陰性對照溶液無干擾。故本含量測定最終確定416 nm波長作為半夏曲鹽酸麻黃堿含量的測定波長。

2.2.5 標準曲線的制備 分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 的鹽酸麻黃堿對照品溶液(C=0.208 0 mg/mL)至分液漏斗中，按供試品溶液制備方法進行制備，得各濃度的鹽酸麻黃堿溶液，以相應的試劑同法制作空白。照紫外分光光度法，在416 nm波長處測定吸光度，以吸光度A為縱坐標，對照品濃度C為橫坐標，繪制標準曲線。結果回歸方程Y=18.58X+0.002，r=0.999 1。表明鹽酸麻黃堿在0.008 2～0.041 0 mg/mL的范圍內線性關系良好。

2.2.6 精密度實驗 取供試品溶液，在416 nm波長處重復測定5次。計算得RSD=2.28%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩定性實驗 取供試品溶液，在416 nm波長處測定其吸收度，并每隔30分鐘測定一次，連續測定7次。計算得RSD=2.84%，表明供試品溶液在180 min內測定穩定。

2.2.8 重復性實驗 按“2.2.2”項同法平行制備5份供試品溶液，分別在416 nm處測定其吸收度。計算得樣品平均含量為0.181 mg/g，RSD=1.93%，表明該測定方法重復性良好。

2.2.9 加樣回收實驗 取半夏曲樣品粉末0.7 g，5份，精密稱定，精密加入鹽酸麻黃堿對照品溶液(C＝0.208 0 mg/mL)0.8 mL，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在416 nm處測定其吸收度。計算得平均回收率為99.71%，RSD為2.38%(n=6)。見表2。

表2 總生物堿的加樣回收實驗

3 樣品測定

精密稱取不同批次供試品，按確定的方法分別進行琥珀酸的含量測定和總生物堿的測定，每個樣品平行測定2次，取平均值，結果見表3。

表3 不同半夏曲樣品含量測定

4 討論

4.1 指標成分的選擇 半夏中的琥珀酸是其發揮止咳，祛痰，抗炎的主要成分。此外，半夏中所含的生物堿有降壓、降脂作用,對體外腫瘤細胞的增殖，也具有較強的抑制作用，抑瘤及鎮咳作用。因此，選擇琥珀酸和總生物堿作為其質量控制的指標性成分。

4.2 半夏曲質量標準 現有半夏曲的質量標準主要收載于中藥部頒標準，但其中均無含量測定控制指標。本實驗對半夏曲琥珀酸及總生物堿均進行了含量測定，為更好控制半夏曲質量提供實驗依據。

4.3 含量測定 在琥珀酸的測定中，滴定曲線有波動現象，可能是由于自動滴定速度過快，在儀器記錄數據的時間間隔內，酸堿未反應完全或者反應完全后未攪拌均勻。控制滴定速度后，波動現象消失。總生物堿的測定采用的是酸性染料比色法，實驗中應嚴格控制溶液的pH值，pH過高或過低都會導致生物堿無法與酸性染料結合成有色化合物，從而無法溶于有機化合物，影響測定結果。

參考文獻

［1］趙高潮，劉繼寧.半夏的炮制及臨床應用淺析［J］.陜西中醫，2009，30(5):601-602.

［2］張超，趙重博，胥敏，等.半夏曲炮制歷史沿革及現代研究［J］.世界科學技術:中醫藥現代化，2015，17(9):1893-1898.

［3］董雪，王延年.試論半夏曲古今研究概況［C］.北京：中華中醫藥學會中藥炮制分會2009年學術研討會，2009.

［4］李軍鴿，朱凱，于智莘，等.pH電位滴定法測定清半夏中琥珀酸的含量［J］.中國科技縱橫，2015，21(5):212.

［5］王兵，李敏，盧道會，等.電位滴定法測定不同居群半夏中總酸的含量［J］.中藥與臨床，2010，1(2):15-17.

［6］張慧慧，黃永亮，吳純潔，等.電位滴定法測定半夏硫熏前后琥珀酸的含量變化［J］.臨床合理用藥雜志，2015，8(5):95-96.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2015：2011.

［8］鄔浩杰.半夏總生物堿的含量測定［J］.海峽藥學，2010，22(3):69-70.