復方紅芪促睡眠顆粒劑制備工藝研究*

程 晨 ，王燕萍 ，白瑞斌 ，張 靜 ，楊扶德 ，胡芳弟 △

1甘肅中醫藥大學藥學院，甘肅 蘭州 730000；2蘭州大學藥學院

復方紅芪方主要功效為滋陰潛陽、交通心腎、養血安神。目前臨床使用該方僅限于按處方水煎服用，該使用方式在快節奏的現代生活方式下存在著諸多不便。復方紅芪方由紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、枸杞子、牡蠣、遠志等8味藥組成，臨床使用證明在改善睡眠方面具有很好的療效。顆粒劑因攜帶、服用方便，生物利用度高，是近年發展最快的一種中藥固體制劑［1］。筆者為了研發一種既能達到改善睡眠，又能方便患者服用、質量穩定的制劑，研究該方的顆粒劑制備工藝，確定其生產工藝流程以及輔料的添加，制定含量測定方法。

1 試藥與儀器

1.1 試藥 紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、枸杞子、牡蠣和遠志8味藥材均由蘭州大學藥學院周印所教授鑒定。紅芪為豆科植物多序巖黃芪(Hedysarum polybotrys Hand.Mazz.)的干燥根。酸棗仁為鼠李科植物酸棗［Ziziphus jujaba Mill.var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chou］的種子。熟地黃為玄參科植物地黃(Rehmannia glutinosa Libosch.)的塊根經加工炮制而成。白芍為毛茛科植物芍藥(Paeonia lactiflora Pall.)的干燥根。女貞子為木犀科植物女貞(Ligustrum lucidum Ait.)的干燥成熟果實。枸杞子為茄科植物寧夏枸杞(Lycium barbarum L.)的干燥成熟果實。牡蠣為牡蠣科動物長牡蠣(Ostrea gigas Thunberg)的貝殼。遠志為遠志科植物遠志(Polygala tenuifolia Willd.)的干燥根。甲醇為色譜純，國藥集團化學試劑有限公司。實驗用水為娃哈哈純凈水。冰醋酸為分析純。

1.2 儀器 Sartorius BT分析天平(德國Sartorius)；YLD-2000型電熱鼓風干燥箱(北京興爭儀器設備廠)；Waters2695高效液相色譜儀，分析天平，Waters2998二極管陣列檢測器，KQ-400KDE型高功率數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。SF-1水分測定儀(天津國銘醫藥設備有限公司)；ZLB80旋轉制粒機(張家港市榮華機械設備有限公司)。

2 方法與結果

2.1 主要功效成分及指標成分的確定依據 通過查閱文獻，本研究選定的主要功效成分及指標成分為總皂苷、總黃酮和芍藥苷。藥理學研究表明酸棗仁能延長睡眠時間，與戊巴比妥等有協同作用，對多數失眠、入睡困難和睡眠易醒癥都有較好療效。酸棗仁促睡眠的主要活性成分是酸棗仁黃酮和酸棗仁總皂苷［2-5］。遠志中含有的皂苷E、F、G等能非競爭性抑制環腺苷酸磷酸二酯酶，作用與罌粟堿相當；目前從遠志中分離得到的皂苷類成分達80多種，已證實其皂苷類成分為其鎮靜催眠的活性成分［6］。女貞子中樞抑制作用成分含有齊墩果酸、熊果酸等；女貞子能顯著縮短睡眠潛伏期且能顯著延長睡眠持續時間［7］。鄧少玲［8］采用石蓮女貞湯(石蓮子、女貞子、五味子、酸棗仁、朱砂)治療頑固性失眠30例，取得了滿意的療效。研究發現白芍改善睡眠的活性成分主要是白芍總苷［9-11］，白芍所含的芍藥苷和丹皮酚均有鎮靜作用，有增強催眠的作用。

2.2 提取工藝的研究

2.2.1 提取方法依據 大量文獻證實酸棗仁［12］、白芍［9］、女貞子［13］、熟地黃［14］、遠志［15］、牡蠣［16］、枸杞子［17］、紅芪水提取液具有鎮靜、協調運動和促睡眠作用。依據配方藥物中功效成分的理化性質，提取工藝設計為以上各藥采用共同水煎煮提取的方法。

2.2.2 提取工藝考察 通過預實驗得知影響提取的主要因素為加水量(A)、提取時間(B)和提取次數(C)，為進一步優選各因素最佳工藝水平，設計正交實驗，以出膏率、總黃酮含量、總皂苷含量以及芍藥苷含量等多個指標，采用L9(34)正交表優選水提復方紅芪方的最佳提取工藝條件。實驗前首先進行了藥材吸水量的考察，為確定液料比提供依據。吸水量：取1日量的處方，加10倍量水，浸泡24小時后，將浸泡液全部倒入另一帶刻度的容器中，測定其體積，以公式藥材吸水量=(原加水量-浸泡液體積)/原藥材總質量。藥材的吸水量為1.2倍。以吸水量和最小浸沒藥材的水量作為因素水平設計依據。當藥材吸水量為2倍，最小浸沒藥材水量為4倍時，因素水平表見表1。

表1 水提取工藝因素水平

2.2.3 考察方法及結果 按設定的工藝精密稱取處方比例的各藥，每個工藝平行2份，共18份，采用L9(34)正交表安排實驗，將各次提取濾液合并后，加熱濃縮至相對密度為1.25～1.30(60℃)的稠膏，減壓干燥(70℃)，得到干膏粉。并測定干膏粉中總黃酮、總皂苷和芍藥苷含量，分別通過干膏粉得率，芍藥苷含量、總黃酮、總皂苷以及上述各指標加以權重后的綜合指標(出膏率50%、芍藥苷10%、總黃酮20%、總皂苷20%)對水提工藝參數進行優選。總黃酮、總皂苷和芍藥苷的測定方法參照《中國藥典》方法，結果見表7。

表2 平均出膏率的正交實驗結果方差分析

表3 平均芍藥苷含量的正交實驗結果方差分析

表4 平均總黃酮含量的正交實驗結果方差分析

表5 平均總皂苷含量的正交實驗結果方差分析

表6 歸一化、權重的正交實驗結果方差分析

表7 水提取工藝L9（34）正交實驗

出膏率和芍藥苷含量的直觀分析見表7，在所選定的3個因素中，對出膏率的影響最大的為提取次數C，3個因素對出膏率的影響程度依次是C＞B＞A。對芍藥苷含量的影響最大的為提取時間B，3個因素對芍藥苷含量的影響程度依次是B＞C=A。平均出膏率最佳組合是A3B3C3。從芍藥苷含量的直觀分析中，最佳組合是A3B1C1。總黃酮含量的直觀分析，影響最大的為提取次數C，3個因素對總黃酮的含量的影響程度依次是C＞A＞B。同樣從黃酮的含量的直觀分析可以看出，最佳組合是A1B1C3。總皂苷含量的直觀分析中，在所選定的3個因素中，對其影響最大的為提取時間B，3個因素對總皂苷的含量的影響程度依次是A＞B＞C，最佳組合是A3B2C1。

從表2出膏率正交實驗結果方差分析，A(加水量)、B(提取時間)、C(提取次數)對出膏率都沒有顯著性的影響。從Ⅲ型平方和來看，3個因素的影響程度C＞B＞A。從表3平均芍藥苷含量正交實驗結果方差分析，A、B、C對芍藥苷含量都沒有顯著性的影響。從Ⅲ型平方和來看，3個因素的影響程度B＞A＞C。從表4平均總黃酮含量正交實驗結果方差分析，A、B、C對總黃酮含量都沒有顯著性的影響。從Ⅲ型平方和來看，3個因素的影響程度C＞A＞B。從表5平均總皂苷含量正交實驗結果方差分析，A、B、C對總皂苷含量都沒有顯著性的影響，從Ⅲ型平方和來看，3個因素的影響程度A＞B＞C。

從表7水提取工藝L9(34)正交實驗表的直觀分析中，在所選定的4個指標出膏率、芍藥苷、總黃酮、總皂苷綜合考慮，給予出膏率50%權重、芍藥苷10%權重、總黃酮20%權重、總皂苷20%權重，數據歸一化后發現對該綜合指標影響最大因素為為提取次數C，3個因素影響程度依次是C＞A＞B。可以看出，最佳組合是A3B2C3。從表6歸一化、權重的正交試驗結果方差分析，A、B、C對歸一化、權重后的值都沒有顯著性的影響，從Ⅲ型平方和來看，3個因素的影響程度為C＞A＞B。

綜合考慮，選擇按配方比例取紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、牡蠣、枸杞子、遠志藥材，浸泡2小時后水煮提取藥材，提取3次，每次1.5小時，第一次加10倍量的水，第二次加8倍量的水，第三次加8倍量的水。提取液減壓濃縮，濃縮溫度小于等于70℃至相對密度1.25～1.30（60℃）的稠膏，減壓干燥(真空干燥，溫度70℃)，得到干膏粉。該工藝參數既考慮了出膏率又兼顧了提取物中的促睡眠活性成分以及指標成分的含量。

2.3 制劑工藝的研究

2.3.1 輔料的選擇

2.3.1.1 輔料種類的確定 蔗糖、糊精通常作為顆粒劑的輔料［18］。因水提取物含有多糖類成分，蔗糖質地較黏稠，不利于制粒，糊精為顆粒劑常用稀釋劑，且溶化性良好，故本產品選用糊精作為輔料。

2.3.1.2 輔料用量的確定 按配方比例取紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、牡蠣、枸杞子、遠志藥材，按最佳工藝參數進行提取，制備干膏。取干膏粉，分別加入不同量的糊精混合均勻，制成顆粒。以制粒現象，所得顆粒性狀，顆粒溶化性為指標，對輔料用量進行比較，并確定干膏粉與糊精的比例為 1∶1.5。見表 8。2.3.2 制粒用乙醇濃度和用量的確定 取處方量的干膏粉及糊精，混合均勻，噴灑不同濃度的乙醇，制成軟材，以制粒過程中的現象為指標，對乙醇濃度和用量進行考察，以制粒過程中的現象，所得顆粒性狀，顆粒溶化性為指標，確定采用85%乙醇制粒。見表9。

表8 輔料用量考察

表9 乙醇濃度的考察

2.3.3 顆粒劑的制備

2.3.3.1 制軟材 按配方比例取紅芪、酸棗仁、熟地黃、白芍、女貞子、牡蠣、枸杞子、遠志藥材，按上述提取工藝參數進行提取，制備干膏粉。取干膏粉，加入糊精混合均勻，干膏粉和糊精的比例為1:1.5。加85%的乙醇，并用手指不斷挫捏，混勻至“手捏成團，壓之即散”。

2.3.3.2 制濕顆粒 將制好的軟材放入不銹鋼16目篩中，不停抖動，搖晃鋼篩，讓顆粒成粒通過篩孔制成濕顆粒，重復操作直到軟材用完為止。

2.3.3.3 顆粒的干燥 將制好的濕顆粒鋪平放入瓷盤中，并于電熱恒溫鼓風干燥箱(60℃)中干燥，制成干顆粒。

2.3.4 檢查 性狀為深棕黃色顆粒，味苦。粒度、水分、溶化性，裝量差異均按《中國藥典》2015版附錄要求進行檢查，均符合要求。第一批含水量4.1%，第二批含水量4.3%，第三批含水量4.3%。裝量差異見表10。

表10 供試品10袋裝量差異

3 討論

本實驗對復方紅芪促睡眠顆粒劑的制備工藝進行了研究。通過正交實驗法，確定最佳提取條件，并為其制定了簡便實用的質量控制方法。通過總黃酮、總皂苷、芍藥苷等多個功效成分和指標成分優化的制備工藝，可保證制劑高活性成分的含量，一方面保證該顆粒的質量，另一方面保證了制劑的療效。通過對顆粒劑的各項檢查，結果均符合《中國藥典》2015年版關于顆粒劑檢查項下的規定。所制得的復方紅芪促催睡眠顆粒劑水溶性好，既保證了傳統中藥的特點又保證了質量及療效，同時為用藥提供了方便。為常用經方的更進一步推廣使用提供范例。

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